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基于小胶质细胞-BDNF-神经元信号探讨电针对SNI大鼠的镇痛作用及机制

中国针灸 2022年第9期42卷 1029-1036,1040页

作者：杨典平张英林培敏毛安琼刘庆西南医科大学中西医结合学院四川泸州646000 西南医科大学附属中医院麻醉科四川泸州646000

目的:观察电针“环跳”“委中”对坐骨神经选择性神经损伤(SNI)大鼠脊髓背角胶质细胞活化、脑源性神经营养因子(BDNF)表达、神经元兴奋性及树突棘数量的影响,探讨电针对SNI的镇痛效应机制。方法:第一部分:60只SD大鼠随机分为假手术组、... 详细信息

目的:观察电针“环跳”“委中”对坐骨神经选择性神经损伤(SNI)大鼠脊髓背角胶质细胞活化、脑源性神经营养因子(BDNF)表达、神经元兴奋性及树突棘数量的影响,探讨电针对SNI的镇痛效应机制。方法:第一部分:60只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组和假电针组,每组15只。除假手术组外,其余组均制备SNI大鼠模型;假手术组仅做切开处理,不损伤神经。电针组于患侧“环跳”“委中”行电针干预,连续波,频率2 Hz,电流强度1 m A,每次30 min,每日1次,共14 d。假电针组于患侧“环跳”“委中”旁开0.5 cm处行电针干预,操作、电针参数及疗程同电针组。于造模前1 d,造模后3、7、14 d检测各组大鼠热缩足反射潜伏期和机械缩足反射阈值。造模后14 d,采用Western blot法检测各组大鼠脊髓背角离子钙接头蛋白1(Iba-1)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、BDNF、即刻早期基因(c-Fos)蛋白表达;采用免疫荧光法检测各组大鼠脊髓背角Iba-1、c-Fos蛋白表达;采用免疫组化法检测各组大鼠脊髓背角GFAP蛋白表达;采用高尔基染色法检测各组大鼠脊髓背角神经元树突棘数量。第二部分:30只SD大鼠随机分为对照组、BDNF组、BDNF+anti-Trk B组,每组10只。对照组予10μL 0.9%氯化钠溶液和二甲基亚砜(DMSO)的1︰1混合液鞘内注射,BDNF组将10μg大鼠重组BDNF溶于10μL0.9%氯化钠溶液和DMSO的1︰1混合液鞘内注射,BDNF+anti-Trk B组将10μg大鼠重组BDNF和30μg酪氨酸激酶受体B(Trk B)抗体溶于10μL0.9%氯化钠溶液和DMSO的1︰1混合液鞘内注射。于鞘内注射前1 d,注射1、3、7 d后检测各组大鼠机械缩足反射阈值。注射7 d后,采用Western blot法和免疫荧光法检测各组大鼠脊髓背角c-Fos蛋白表达。结果:第一部分:造模后3、7、14 d,与假手术组比较,模型组大鼠热缩足反射潜伏期和机械缩足反射阈值降低(P神经元树突棘数量较假手术组增加(P神经元树突棘数量较模型组降低(P神经元信号,最终降低神经元的兴奋性。

关键词：坐骨神经选择性损伤神经病理性疼痛电针小胶质细胞星形胶质细胞脑源性神经营养因子(BDNF) 神经元

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长链非编码RNA LOC100911498在大鼠神经性疼痛中的调节作用

长链非编码RNA LOC100911498在大鼠神经性疼痛中的调节作用

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作者：汤文昕郑州大学

学位级别：硕士

研究背景神经病理性疼痛是一种导致患者生活质量严重下降的临床疼痛综合征,这可能是由躯体感觉神经系统功能障碍或原发性损伤造成的。但是,时至今日,神经病理性疼痛的发病机制仍未研究清楚,临床疗效不佳。长非编码RNA(lncRNA)是一种大于... 详细信息

研究背景神经病理性疼痛是一种导致患者生活质量严重下降的临床疼痛综合征,这可能是由躯体感觉神经系统功能障碍或原发性损伤造成的。但是,时至今日,神经病理性疼痛的发病机制仍未研究清楚,临床疗效不佳。长非编码RNA(lncRNA)是一种大于200个核苷酸的RNA分子,属于非编码蛋白,参与了细胞内多种过程的调控。近年研究发现,lncRNA的失调表达在促进神经病理性疼痛过程中起到了关键作用。以往的研究表明,在坐骨神经选择性损伤模型(SNI)中,大鼠脊髓背角的小胶质细胞发生增殖活化,P2X4受体(P2X4R)、磷酸化的蛋白激酶p38(p-p38)和脑源性神经营养因子(BDNF)的表达显著增加;此外,术后大鼠脊髓中lncRNA-LOC100911498的表达水平也明显提高。研究已经证实神经病理性疼痛能诱导P2X4R的表达增加,从而进一步促进p38磷酸化,p-p38可通过激活下游特定的转录因子使BDNF在小胶质细胞中的表达增加以致产生神经病理性的疼痛。LOC100911498是否与P2X4R相互作用参与了神经病理性疼痛的形成呢?我们使用了一种基于蛋白质的氨基酸和基因的碱基对序列、二级结构倾向、氢键和范德华力来预测和评估蛋白质和RNA之间的相互作用力的在线算法(CatRAPID)评估了LOC100911498和P2X4R的相互作用力,其结果表明LOC100911498和P2X4R高度相关。因此,我们假设LOC100911498能通过激活P2X4R/p-p38/BDNF信号通路调控神经病理性疼痛的发生发展。研究目的本研究旨在讨论LOC100911498在神经病理性疼痛中的作用以及潜在机制。研究方法***100911498的表达在大鼠坐骨神经选择性损伤模型术后对疼痛行为学的影响以及在脊髓中的表达变化Sprague Dawley(SD)雄性大鼠分为sham组、SNI组、SNI+干扰RNA组(SNI+LOC100911498 siRNA组)和SNI+对照干扰RNA组(SNI+NC siRNA组),从术后第7天开始连续鞘内给药5天,从术前1天到术后1、3、5、7、9、11、14天测量大鼠后足底机械性缩足反射阈值(MWT),观察MWT的变化。并用原位杂交技术检测术后14天sham和SNI两组大鼠L4-6脊髓背角的表达差异。***100911498的表达对脊髓小胶质细胞活化及P2X4R-p-p38-BDNF信号通路的影响SD雄性大鼠分为sham组、SNI组、SNI+LOC100911498 siRNA组和SNI+NC siRNA组,采用RT-PCR技术检测术后第14天四组大鼠L4-6脊髓LOC100911498和P2X4R的表达变化;采用western blot检测脊髓中P2X4R、p38、p-p38和BDNF的分泌情况;采用免疫荧光双染技术观察大鼠脊髓背角中活化的小胶质细胞和P2X4R的表达差异。数据处理与分析用SPSS 10.0(SPSS Inc.,USA)和SigmaStat(Systat,San Jose,California)进行统计学测试。所有数据均表示为平均值±标准误差。对于MWT,通过双向(时间和处理)重复测量方差分析(ANOVA)分析数据,然后进行Newman-Keuls事后检验,并在相同时间点进行2组之间的t检验。单因素方差分析用于检测Western印迹、免疫荧光和实时PCR数据的统计学差异,然后进行Tukey或Dunnett检验,而原位杂交通过t检验进行测试,因为仅应用了2组。P性痛觉过敏明显减轻,MWT相较于SNI组来说明显升高,但仍低于对照组。而SNI+NC siRNA组的MWT与SNI大鼠没有统计学差异。此外,与对照组相比,LOC100911498的表达量在术后14天的SNI模型大鼠的脊髓背角中明显较高,并且在细胞核与细胞质中均有表达。2.与对照组相比,SNI和SNI+NC siRNA两组大鼠脊髓中P2X4R、p-p38和BDNF的表达水平显著增高,脊髓背角中活化的小胶质细胞的数量也较大,且这两组大鼠没有统计学差异。SNI+LOC100911498 siRNA组在术后给药后则能明显缩小上述差异,抑制小胶质细胞的活化和信号通路的激活。结论研究表明了lncRNA LOC100911498 siRNA对大鼠L4-6段脊髓背角小胶质细胞激活介导的P2X4R-p-p38-BDNF信号通路的影响。此外,通过调节P2X4R的表达和功能,LOC100911498可能是大鼠神经病理性疼痛的新型调

关键词：神经病理性疼痛坐骨神经选择性损伤 LOC100911498 小胶质细胞脊髓 P2X4受体 p-p38 BDNF

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