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土荆皮乙酸抑制高糖诱导的H9C2心肌细胞损伤和NLRP3炎性小体的激活

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中药材 2022年第12期45卷 2982-2986页

作者：王元明马明峰王丽静山西医科大学汾阳学院临床医学系山西汾阳032200 山西省汾阳医院山西汾阳032200

目的:探讨二萜类天然化合物土荆皮乙酸对高糖诱导的心肌细胞H9C2损伤和NLRP3炎症小体的抑制作用。方法:采用CCK-8法检测H9C2细胞活力,LDH试剂盒检测H9C2细胞中LDH活性;ELISA试剂盒检测炎性细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-18含量;Western B... 详细信息

目的:探讨二萜类天然化合物土荆皮乙酸对高糖诱导的心肌细胞H9C2损伤和NLRP3炎症小体的抑制作用。方法:采用CCK-8法检测H9C2细胞活力,LDH试剂盒检测H9C2细胞中LDH活性;ELISA试剂盒检测炎性细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-18含量;Western Blot检测炎性相关蛋白CD36、COX2、iNOS、p-NF-κB p65表达;TUNEL+DAPI双染法检测心肌细胞H9C2凋亡率;Western Blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、NLRP3、ASC、Caspase-1表达。结果:高糖(30 mmol/L)诱导24、48、72 h后,H9C2细胞活力显著降低,LDH活性显著升高(P土荆皮乙酸低、中、高浓度(2、4、8μmol/L)处理高糖诱导的细胞24、48、72 h后,H9C2细胞活力显著升高,LDH活性显著降低(P土荆皮乙酸组细胞IL-6、IL-18、TNF-α含量及CD36、COX2、iNOS、p-NF-κB p65蛋白表达显著降低(P土荆皮乙酸高浓度效果最佳;TUNEL+DAPI双染结果表明土荆皮乙酸可有效降低高糖诱导的H9C2细胞凋亡(P土荆皮乙酸浓度提高,Bcl-2蛋白表达显著升高,而Bax、NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白表达显著降低(P土荆皮乙酸浓度高于8μmol/L时,对高糖诱导的H9C2心肌细胞损伤、凋亡、炎性因子和NLRP3炎症小体具有抑制作用。

关键词：土荆皮乙酸心肌细胞H9C2 细胞凋亡炎症 NLRP3炎症小体

土荆皮乙酸诱导鼻咽癌细胞铁死亡的作用及机制

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中华中医药学刊 2023年第11期41卷 82-85,I0018页

作者：刘景方崇锴王陵军王顺兰广州中医药大学第一附属医院广东广州510405

目的探讨土荆皮乙酸诱导鼻咽癌发生铁死亡的机制。方法CCK-8法检测土荆皮乙酸(pseudolaric acid B,PAB)干预鼻咽癌细胞的细胞毒性。将鼻咽癌细胞分为对照组、土荆皮乙酸组(PAB组)、土荆皮乙酸+铁死亡抑制剂组(PAB+Fer-1组),划痕实验检... 详细信息

目的探讨土荆皮乙酸诱导鼻咽癌发生铁死亡的机制。方法CCK-8法检测土荆皮乙酸(pseudolaric acid B,PAB)干预鼻咽癌细胞的细胞毒性。将鼻咽癌细胞分为对照组、土荆皮乙酸组(PAB组)、土荆皮乙酸+铁死亡抑制剂组(PAB+Fer-1组),划痕实验检测土荆皮乙酸对鼻咽癌细胞迁移能力的影响;化学发光法检测鼻咽癌细胞丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)含量水平;Western Blot检测鼻咽癌细胞铁死亡相关蛋白谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、重肽铁蛋白(FTH1)、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、环氧化酶2(COX-2)的表达水平;流式细胞术检测鼻咽癌细胞的活性氧(ROS)水平。结果土荆皮乙酸随着剂量的增加和时间的延长抑制鼻咽癌细胞的细胞活力并诱导细胞死亡的作用增强。土荆皮乙酸能够明显抑制细胞迁移和增殖,促进细胞凋亡。土荆皮乙酸增加ROS水平、降低GSH水平、降低SOD活性、增加MDA浓度;下调GPX4、FTH1、SLC7A11表达,上调COX-2表达。土荆皮乙酸+铁死亡抑制剂组降低ROS水平、MDA浓度,增加GSH、SOD水平,上调GPX4、FTH1、SLC7A11蛋白表达,下调COX-2的表达。结论天然产物土荆皮乙酸通过促进鼻咽癌细胞凋亡及抑制细胞增殖和迁移来发挥抗肿瘤作用,其机制可能与诱导细胞铁死亡有关。

关键词：土荆皮乙酸铁死亡鼻咽癌

土荆皮乙酸对TGF-β1介导的A549细胞迁移、侵袭及上皮间质转化的影响

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土荆皮乙酸对TGF-β1介导的A549细胞迁移、侵袭及上皮间质转化的...

作者：宋佳易辽宁中医药大学

学位级别：硕士

目的:研究土荆皮乙酸对人肺癌细胞A549生存活力的影响、及在TGF-β1诱导下细胞迁移、侵袭及上皮间质转化的抑制作用,为临床应用土荆皮乙酸延缓非小细胞肺癌疾病进程提供实验依据。材料与方法:采用不同浓度的土荆皮乙酸(0、10、20、40、6... 详细信息

目的:研究土荆皮乙酸对人肺癌细胞A549生存活力的影响、及在TGF-β1诱导下细胞迁移、侵袭及上皮间质转化的抑制作用,为临床应用土荆皮乙酸延缓非小细胞肺癌疾病进程提供实验依据。材料与方法:采用不同浓度的土荆皮乙酸(0、10、20、40、60、80μmol/l)培养人肺癌细胞A549,于0 h,12 h,24 h,36 h,48 h采用CCK8法检测土荆皮乙酸对人肺癌细胞A549生存活力的影响,并确定最适的给药浓度及最适作用时间。取人肺癌细胞A549进行培养,用TGF-β1进行干预,诱导细胞发生迁移、侵袭及上皮间质转化。将实验分为三组,分别为A空白组(A549细胞+培养基)、B诱导组(A549细胞+TGF-β1)、C实验组(A549细胞+TGF-β1+最适浓度土荆皮乙酸)。采用划痕迁移实验、Transwell迁移实验及Transwell侵袭实验检测三组细胞迁移、侵袭能力的改变。采用免疫荧光法检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)表达情况。采用Western Blot方法检测上皮间质相关标记物E-cadherin、α-连环蛋白(α-catenin)、波形蛋白(Vimentin)、N-cadherin、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及基质金属蛋白酶2(MMP2)、基质金属蛋白酶9(MMP9)的蛋白表达水平。采用RT-PCR法检测上述上皮间质转化相关蛋白E-ca、α-ca、Vim、Nca、α-SMA m RNA表达水平。结果:1.CCK8结果显示,土荆皮乙酸能有效抑制人肺癌细胞A549的生存活力,并且在一定范围内,呈浓度时间依赖性,当土荆皮乙酸浓度40μmol/l,作用48 h时,肿瘤细胞生长达半数抑制率,因而选择浓度为40μmol/l的土荆皮乙酸作为最佳作用浓度,最佳作用时间为48 h。2.细胞划痕实验及Transwell小室迁移侵袭实验结果显示,经过TGF-β1诱导后的人肺癌细胞A549具有明显增强的迁移、侵袭能力,而在最适浓度土荆皮乙酸作用后,能有效抑制TGF-β1诱导下人肺癌细胞A549的迁移、侵袭能力。3.RT-PCR实验结果显示,与A空白组相比,B诱导组下调了上皮标记蛋白E-ca、α-ca的m RNA水平,而提高了相关间质标记蛋白Vim、N-ca、α-SMA的m RNA水平(P土荆皮乙酸组,显示该单体能增强TGF-β1诱导后人肺癌细胞A549上皮标记物E-ca在细胞膜、质的表达情况,而使间质标记蛋白N-ca在细胞膜、质的表达下降。结论:土荆皮乙酸能有效抑制人肺癌细胞A549的生存活力,同时可以抑制在TGF-β1诱导下肺癌A549细胞迁移、侵袭能力,这可能与土荆皮乙酸抑制人肺癌细胞A549上皮间质转化的作用有关。

关键词：转移中药抗肿瘤上皮间质转化 A549 土荆皮乙酸

土荆皮乙酸诱导人前列腺癌细胞系DU145凋亡

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基础医学与临床 2022年第10期42卷 1555-1560页

作者：刘冬梅徐强李峰南通市肿瘤医院病理科江苏南通226006 南通大学附属医院检验科江苏南通226001

目的研究土荆皮乙酸(PAB)诱导人前列腺癌细胞系DU145细胞凋亡,并初步探讨其作用机制。方法以0、5、10、20和40μmol/L的PAB分别处理细胞24、48、72和96 h;CCK8法检测细胞活性;流式细胞测量术annexin V⁃FITC/PI双染和TUNEL法观察细胞凋亡... 详细信息

目的研究土荆皮乙酸(PAB)诱导人前列腺癌细胞系DU145细胞凋亡,并初步探讨其作用机制。方法以0、5、10、20和40μmol/L的PAB分别处理细胞24、48、72和96 h;CCK8法检测细胞活性;流式细胞测量术annexin V⁃FITC/PI双染和TUNEL法观察细胞凋亡;划痕实验和Transwell小室分别检测迁移和侵袭;Western blot检测细胞中Bcl⁃2、Bax蛋白及PTEN、AKT、p⁃AKT蛋白的表达。结果随着PAB浓度增加和作用时间的延长,DU145细胞增殖活力明显降低(P<0.01)。与对照组相比,PAB组细胞凋亡率、Bax和PTEN蛋白表达量显著增加,而细胞划痕愈合率、穿膜细胞数、Bcl⁃2以及p⁃AKT蛋白表达量均显著减少(P<0.01)。GW9662显著降低PAB对DU145的促凋亡的作用。结论PAB可能通过PTEN/AKT信号通路抑制前列腺癌DU145细胞增殖、侵袭和诱导细胞凋亡。

关键词：前列腺癌凋亡土荆皮乙酸

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土荆皮乙酸促进喉癌细胞系HEp-2凋亡

基础医学与临床 2020年第1期40卷 92-96页

作者：杨蒙生李丽刘雪峰杨小龙甘肃省人民医院耳鼻喉-头颈外科

目的本文观察土荆皮乙酸(PAB)对人喉表皮样癌细胞系2(HEp-2)的增殖和凋亡的影响。方法细胞分组及处理:以0、0.5、1、2、4、8和16μmol/L的PAB分别处理细胞24、48和72 h;MTT法检测细胞活性;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot和qPCR检... 详细信息

目的本文观察土荆皮乙酸(PAB)对人喉表皮样癌细胞系2(HEp-2)的增殖和凋亡的影响。方法细胞分组及处理:以0、0.5、1、2、4、8和16μmol/L的PAB分别处理细胞24、48和72 h;MTT法检测细胞活性;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot和qPCR检测细胞Bcl-2、Bax和caspase-3蛋白及mRNA表达;免疫组化检测细胞PARP和c-PARP蛋白的表达。结果 PAB呈时间-浓度依赖性抑制HEp-2增殖。与对照组比较,4和8μmol/L PAB组HEp-2细胞凋亡率均显著升高(P<0.01);4和8μmol/L PAB组HEp-2细胞的Bcl-2和PARP表达均显著下降(P<0.05);Bax、caspase-3和c-PARP的表达均显著升高(P<0.05)。结论 PAB可激活线粒体凋亡途径,诱导HEp-2细胞凋亡。

关键词：土荆皮乙酸喉癌线粒体凋亡机制

土荆皮乙酸对A549细胞迁移侵袭及EMT影响探讨

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社区医学杂志 2022年第4期20卷 186-192页

作者：宋佳易辽宁中医药大学中西医结合学院辽宁沈阳110847

目的探讨土荆皮乙酸(PAB)对TGF-β1介导的人肺癌细胞A549上皮间质转化(EMT)的影响以及与其迁移侵袭的关系,以期找到该单体抗肺癌的作用机制,或为临床肺癌治疗新方案提供实验依据。方法应用CCK8法检测不同浓度(0、10、20、40、60、80μmo... 详细信息

目的探讨土荆皮乙酸(PAB)对TGF-β1介导的人肺癌细胞A549上皮间质转化(EMT)的影响以及与其迁移侵袭的关系,以期找到该单体抗肺癌的作用机制,或为临床肺癌治疗新方案提供实验依据。方法应用CCK8法检测不同浓度(0、10、20、40、60、80μmol/L)PAB对人肺癌A549细胞增殖的影响,分别干预(0、12、24、36、48 h)确定最佳作用浓度及最佳作用时间。将A549细胞分组:对照组(添加培养基)、诱导组(添加5μg/L TGF-β1)、实验组(最佳浓度PAB+5μg/L TGF-β1)。Transwell小室实验检测PAB对肺癌A549细胞迁移、侵袭力的影响。采用免疫印迹法、细胞免疫荧光法以及实时定量PCR法检测EMT相关分子标记物E-钙黏蛋白(E-cadherin)和N-钙黏蛋白(N-cadherin)表达和mRNA水平。采用SPSS 16.0对实验数据进行统计学分析,GraphPad PHsm 6.0作图软件制图,应用单因素方差分析法进行多组数据比较。结果CCK-8结果显示,不同浓度PAB对人肺癌细胞A549均具有增殖抑制作用,且抑制细胞增殖具有时间和浓度依赖性。当PAB浓度40μmol/L时对肺癌A549细胞具有明显增殖抑制作用,达到肿瘤半数抑制率,且细胞毒性较低,因而选用该浓度作用48 h作为后续实验的最佳作用浓度及时间。蛋白质印迹法检测结果显示,PAB能下调N-Ca的表达,差异有统计学意义。对照组肺癌A549细胞N-Ca蛋白量为1.080±0.015,诱导组为2.777±0.018,实验组为1.807±0.032,其中诱导组与对照组比较,差异有统计学意义,t=-13.863,P=0.001;实验组与对照组比较,差异有统计学意义,t=-6.853,P=0.002;实验组与诱导组比较,差异有统计学意义,t=-6.183,P=0.009。RT-PCR显示结果,PAB能增加E-Ca的表达而下调N-Ca的表达,差异有统计学意义。对照组肺癌A549细胞E-Ca蛋白量为1.000±0.001,诱导组为0.477±0.007,实验组为0.847±0.012,其中诱导组与对照组比较,差异有统计学意义,t=21.772,P=0.002;实验组与对照组比较,差异有统计学意义,t=2.484,P=0.048;实验组与诱导组比较,差异有统计学意义,t=-10.566,P=0.002。对照组肺癌A549细胞N-Ca蛋白量为1.000±0.001,诱导组为3.273±0.022,实验组为1.613±0.003,其中诱导组与对照组比较,差异有统计学意义,t=-24.690,P=0.002;实验组与对照组比较,差异有统计学意义,t=-6.635,P=0.003;实验组与诱导组比较,差异有统计学意义,t=9.878,P=0.002。上述结果说明与对照组相比,诱导组的肺癌A549细胞上皮标记蛋白E-ca表达下降而间质标记蛋白N-ca表达增强,同时迁移和侵袭能力也增强。与诱导组对比,实验组的肺癌A549细胞经过PAB干预后相关上皮性标记蛋白E-ca表达增加,间质标记蛋白N-ca表达下降,且迁移和侵袭能力也明显减弱。结论40μmol/L PAB作用48 h可以抑制TGF-β1介导的肺癌A549细胞的迁移和侵袭能力,这可能与抑制TGF-β1介导的肺癌A549细胞EMT的过程有关。

关键词：中药抗肿瘤上皮间质转化转移土荆皮乙酸

土荆皮乙酸B对膀胱癌5637细胞增殖和凋亡的影响

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中国中药杂志 2011年第24期36卷 3535-3538页

作者：曲更庆盛玉文陈波刘奔于立春辽宁医学院附属第一医院泌尿外科辽宁锦州121000

目的:研究二萜类化合物土荆皮乙酸(pseudolaric acid B)诱导膀胱癌5637细胞凋亡的作用,探讨其作用机制。方法:MTT法测定不同浓度土荆皮乙酸作用后5637细胞的生长情况;流式细胞术检测细胞周期情况;AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞术观察土... 详细信息

目的:研究二萜类化合物土荆皮乙酸(pseudolaric acid B)诱导膀胱癌5637细胞凋亡的作用,探讨其作用机制。方法:MTT法测定不同浓度土荆皮乙酸作用后5637细胞的生长情况;流式细胞术检测细胞周期情况;AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞术观察土荆皮乙酸作用后细胞的凋亡情况;免疫印迹法检测survivin和caspase-3蛋白表达的变化。结果:土荆皮乙酸能诱导5637细胞凋亡,并明显抑制survivin的表达,同时对caspase-3有上调作用。结论:土荆皮乙酸在体外可抑制5637细胞增殖,诱导其发生凋亡。土荆皮乙酸诱导5637细胞发生凋亡的生物学效应可能与survivin的表达下降,caspase-3的表达上升有关。

关键词：土荆皮乙酸膀胱癌凋亡 survivin因子 caspase-3因子

土荆皮乙酸对瘢痕疙瘩成纤维细胞及PI3K/AKT、COX-2、caspase-3表达的影响

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土荆皮乙酸对瘢痕疙瘩成纤维细胞及PI3K/AKT、COX-2、caspase-3表...

作者：林鑫福建医科大学

学位级别：硕士

目的研究土荆皮乙酸对体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的干预作用,并运用Western blot和RT-PCR检测干预前后成纤维细胞中PI3K、AKt、COX-2、caspase-3蛋白和基因的表达,深入探讨土荆皮乙酸对体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响... 详细信息

目的研究土荆皮乙酸对体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的干预作用,并运用Western blot和RT-PCR检测干预前后成纤维细胞中PI3K、AKt、COX-2、caspase-3蛋白和基因的表达,深入探讨土荆皮乙酸对体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响及作用机制。方法(1)对所培养的成纤维细胞制备细胞爬片后进行HE染色,利用免疫组织化学SP法抗波形蛋白抗体进行细胞纯度鉴定。(2)将土荆皮乙酸作用于体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞,以CCK-8法监测细胞存活情况(3)用Western blot检测干预前后PI3K、AKt、COX-2、caspase-3蛋白在成纤维细胞中表达情况;(4)用RT-PCR检测土荆皮乙酸干预前后PI3K、AKt、COX-2、caspase-3基因在成纤维细胞的表达情况。用统计学软件进行数据处理和统计学分析。结果1、用免疫组织化学SP法染色传代后的第五代成纤维细胞,可见波形蛋白表达呈阳性,表现为胞浆内棕黄色束状或网状结构,方向与细胞长轴方向相同,而角蛋白染色阴性。2、分别以不同浓度(0.5 umol/L,1 umol/L,2 umol/L,4umol/L)土荆皮乙酸对培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞干预不同的时间(24h,48h,72h),用CCK-8法对干预后的瘢痕疙瘩成纤维细胞的吸光度进行检测,实验结果表明抑制率随浓度和时间的增大而增大。3、RT-PCR和western blot检测结果显示,在2umol/L土荆皮乙酸作用下,PI3K、AKt基因的表达和蛋白的表达均在正常皮肤和瘢痕疙瘩成纤维细胞中均有下降(P土荆皮乙酸对体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖具有明显的抑制作用,并呈浓度和时间依赖性;2、土荆皮乙酸对瘢痕疙瘩成纤维细胞中PI3K、AKT、COX-2基因和蛋白的表达有明显的抑制作用,而对caspase-3基因和蛋白的表达有促进作用。3、COX-2→PI3K/AKT→Caspase-3信号通路可能为PAB对瘢痕疙瘩的作用机制之一。

关键词：土荆皮乙酸瘢痕疙瘩 PI3K-AKT COX-2 caspase-3

土荆皮乙酸诱导膀胱癌5637细胞凋亡作用及其机制的研究

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土荆皮乙酸诱导膀胱癌5637细胞凋亡作用及其机制的研究

作者：曲更庆辽宁医学院

学位级别：硕士

目的研究二萜类化合物土荆皮乙酸(pseudolaric acid B)体外诱导人高危浅表型膀胱癌5637细胞增殖抑制和凋亡的作用，并且探讨其作用机制。旨在为膀胱癌的腔内灌注治疗拓展新的植物化学药物治疗提供实验资料。方法体外常规培养人膀胱癌... 详细信息

目的研究二萜类化合物土荆皮乙酸(pseudolaric acid B)体外诱导人高危浅表型膀胱癌5637细胞增殖抑制和凋亡的作用，并且探讨其作用机制。旨在为膀胱癌的腔内灌注治疗拓展新的植物化学药物治疗提供实验资料。方法体外常规培养人膀胱癌5637细胞株，经终浓度为0、5、10、20、40、80μmol·L土荆皮乙酸分别处理24h、48h和72h后，用倒置显微镜下观察细胞数量、形态变化。MTT法测定5637细胞的生长抑制情况;AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞术观察20、40、80μmol·L土荆皮乙酸作用后5637细胞24、48h后的凋亡情况;免疫印迹法检测20、40、80μmol·L土荆皮乙酸作用后5637细胞24、48h后Survivin和Caspase-3蛋白表达的变化。结果土荆皮乙酸可明显抑制膀胱癌5637细胞的生长，并表现出明显形态学异常。MTT法检测结果提示5～80μmol·L土荆皮乙酸可以时间-剂量依赖方式抑制膀胱癌5637细胞增殖，并诱导5637细胞凋亡。光镜可见细胞变圆、体积变小、折光度减弱、伪足消失、包膜皱缩、胞质出现空泡，其与用药前相比有明显形态学改变。AnnexinV-FITC/PI双染结果发现土荆皮乙酸可以时间-剂量依赖方式诱导膀胱癌5637细胞凋亡。Western blot结果发现土荆皮乙酸可以时间-剂量依赖方式下调膀胱癌5637细胞Survivin的表达水平，同时对caspase-3表达有上调作用。结论土荆皮乙酸在体外可有效抑制膀胱癌5637细胞的增殖，诱导其发生凋亡，并且具有明显的剂量-时间依赖性。其机制可能与凋亡抑制蛋白Survivin的表达下调，效应蛋白Caspase-3的表达上调有关。

关键词：土荆皮乙酸膀胱癌凋亡 Survivin因子 Caspase-3因子