土荆皮乙酸对瘢痕疙瘩成纤维细胞及PI3K/AKT、COX-2、caspase-3表达的影响

作     者：林鑫 

作者单位：福建医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：朱世泽

授予年度：2016年

学科分类：1002[医学-临床医学] 10[医学] 

主      题：土荆皮乙酸 瘢痕疙瘩 PI3K-AKT COX-2 caspase-3 

摘      要：目的研究土荆皮乙酸对体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的干预作用,并运用Western blot和RT-PCR检测干预前后成纤维细胞中PI3K、AKt、COX-2、caspase-3蛋白和基因的表达,深入探讨土荆皮乙酸对体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响及作用机制。方法(1)对所培养的成纤维细胞制备细胞爬片后进行HE染色,利用免疫组织化学SP法抗波形蛋白抗体进行细胞纯度鉴定。(2)将土荆皮乙酸作用于体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞,以CCK-8法监测细胞存活情况(3)用Western blot检测干预前后PI3K、AKt、COX-2、caspase-3蛋白在成纤维细胞中表达情况;(4)用RT-PCR检测土荆皮乙酸干预前后PI3K、AKt、COX-2、caspase-3基因在成纤维细胞的表达情况。用统计学软件进行数据处理和统计学分析。结果1、用免疫组织化学SP法染色传代后的第五代成纤维细胞,可见波形蛋白表达呈阳性,表现为胞浆内棕黄色束状或网状结构,方向与细胞长轴方向相同,而角蛋白染色阴性。2、分别以不同浓度(0.5 umol/L,1 umol/L,2 umol/L,4umol/L)土荆皮乙酸对培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞干预不同的时间(24h,48h,72h),用CCK-8法对干预后的瘢痕疙瘩成纤维细胞的吸光度进行检测,实验结果表明抑制率随浓度和时间的增大而增大。3、RT-PCR和western blot检测结果显示,在2umol/L土荆皮乙酸作用下,PI3K、AKt基因的表达和蛋白的表达均在正常皮肤和瘢痕疙瘩成纤维细胞中均有下降(P0.05),而caspase-3基因的表达和蛋白的表达在正常皮肤和瘢痕疙瘩成纤维细胞中均上升,不同组之间比较有显著性差异(P0.05)。瘢痕疙瘩成纤维细胞中COX-2基因的表达和蛋白的表达均下降,不同组之间比较有显著性差异(P0.05)。结论1、土荆皮乙酸对体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖具有明显的抑制作用,并呈浓度和时间依赖性;2、土荆皮乙酸对瘢痕疙瘩成纤维细胞中PI3K、AKT、COX-2基因和蛋白的表达有明显的抑制作用,而对caspase-3基因和蛋白的表达有促进作用。3、COX-2→PI3K/AKT→Caspase-3信号通路可能为PAB对瘢痕疙瘩的作用机制之一。