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哺乳动物不育系20样激酶1表达水平与宫颈癌相关病理学参数的关联性

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河南医学研究 2021年第13期30卷 2416-2418页

作者：韩芳芳孙鑫沈志强黄河水利委员会黄河中心医院病理科河南郑州450000

目的分析哺乳动物不育系20样激酶1(Mst1)表达水平与宫颈癌相关病理学参数的关联性。方法选取2011年1月至2019年12月黄河水利委员会黄河中心医院收治的80例宫颈癌患者作为研究对象,均经手术病理证实,手术治疗时均取宫颈癌组织及配对癌旁... 详细信息

目的分析哺乳动物不育系20样激酶1(Mst1)表达水平与宫颈癌相关病理学参数的关联性。方法选取2011年1月至2019年12月黄河水利委员会黄河中心医院收治的80例宫颈癌患者作为研究对象,均经手术病理证实,手术治疗时均取宫颈癌组织及配对癌旁组织(距肿瘤边缘≥4 cm处),分别采用免疫组化法、免疫印迹(Western blot)法检测宫颈癌组织及癌旁组织Mst1表达水平,并比较不同病理参数(年龄、肿瘤直径、组织学分型、分化程度、FIGO分期、是否有淋巴结转移)Mst1阳性表达率,分析Mst1阳性表达率与FIGO分期的相关性。结果宫颈癌组织Mst1表达水平、阳性表达率均较癌旁组织低(P0.05);FIGO分期为ⅡB~Ⅳ期、有淋巴结转移宫颈癌的患者Mst1阳性表达率低于FIGO分期为ⅠB~ⅡA期、无淋巴结转移宫颈癌的患者(P系数分析显示,Mst1阳性表达率与FIGO分期呈负相关(r=-0.601,P=0.012)。结论Mst1在宫颈癌中呈异常低表达,参与肿瘤的发生、进展,可作为评估宫颈癌病情程度的重要指标,为临床诊治提供参考依据。

关键词：宫颈癌哺乳动物不育系20样激酶1 病理学参数

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中国现代医学杂志 2019年第9期29卷 39-43页

作者：王志强贺璇李思维田佳徐龙宽周英琼桂林医学院附属医院病理科广西桂林541001

目的探讨Yes相关蛋白(YAP)、哺乳动物不育系20样激酶1(MST1)及细胞周期蛋白D1(CyclinD1)在鼻咽癌中的表达及与鼻咽癌临床病理特征的关系。方法应用免疫组织化学染色方法检测YAP、MST1、CyclinD1在鼻咽黏膜慢性炎组织和鼻咽癌组织中的表... 详细信息

目的探讨Yes相关蛋白(YAP)、哺乳动物不育系20样激酶1(MST1)及细胞周期蛋白D1(CyclinD1)在鼻咽癌中的表达及与鼻咽癌临床病理特征的关系。方法应用免疫组织化学染色方法检测YAP、MST1、CyclinD1在鼻咽黏膜慢性炎组织和鼻咽癌组织中的表达。结果 YAP及CyclinD1在鼻咽癌组织中的表达均高于鼻咽黏膜慢性炎组织(P 0.05);三者与患者的性别、年龄、生存时间、淋巴结转移、临床分期、远处转移、复发及生存状态无相关性(P>0.05)。在鼻咽癌组织内,YAP与CyclinD1、MST1与CyclinD1呈正相关(P 0.05)。结论 YAP和CyclinD1蛋白的高表达、MST1蛋白的低表达可能与鼻咽癌的发生、发展有关,三者有望成为治疗鼻咽癌的新靶点。

关键词：鼻咽肿瘤 Yes相关蛋白哺乳动物不育系20样激酶1 细胞周期蛋白D1

胱天蛋白酶11介导的Hippo信号通路在脑缺血再灌注小鼠血脑屏障破坏中的作用和机制

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中国病理生理杂志 2023年第2期39卷 250-258页

作者：张创余孝君唐波江威谢君长沙市第一医院神经内科

目的：探讨胱天蛋白酶11(caspase-11)在脑缺血再灌注小鼠血脑屏障（blood-brain barrier, BBB）破坏中的作用和机制。方法：将72只小鼠[包括36只CASP11（编码caspase-11的基因）敲减（knockdown, KD）小鼠和36只野生型（wild-type, WT... 详细信息

目的：探讨胱天蛋白酶11(caspase-11)在脑缺血再灌注小鼠血脑屏障（blood-brain barrier, BBB）破坏中的作用和机制。方法：将72只小鼠[包括36只CASP11（编码caspase-11的基因）敲减（knockdown, KD）小鼠和36只野生型（wild-type, WT）小鼠]分为4组（每组18只）：WT组、KD组、大脑中动脉闭塞/再灌注损伤（middle cerebral artery occlusion/reperfusion injury, MCAO/R）组和KD+MCAO/R组。其中，MCAO/R组和KD+MCAO/R组分别采用WT小鼠和KD小鼠建立MCAO/R模型，其他组在不干扰动脉的情况下进行了相同的外科手术。此外，将脑微血管内皮细胞系bEnd. 3分为4组：正常对照（normal control, NC）组、KD组、氧糖剥夺/再灌注损伤（oxygen-glucose deprivation/reperfusion injury, OGD/R）组和KD+OGD/R组。其中，KD组和KD+OGD/R组bEnd. 3细胞进行CASP11敲减转染，OGD/R组和KD+OGD/R组细胞建立OGD/R模型。通过TTC、HE和尼氏染色分析脑损伤的程度。通过伊文思蓝染料渗漏、紧密连接（tight junction, TJ）蛋白的表达和经内皮电阻（transendothelial electrical resistance, TEER）的测量来研究BBB的破坏情况。结果：MCAO/R后，caspase-11在小鼠脑内皮细胞中表达上调（P哺乳动物不育系20样激酶1(mammalian sterile 20-like kinase 1,MST1)磷酸化水平的升高（P<0.05）。此外，用p-MST1抑制剂XMU-MP-1治疗可减轻caspase-11对BBB分解的影响（P<0.05）。结论：抑制caspase-11至少部分通过调节Hippo信号通路来保持脑缺血再灌注小鼠BBB的完整性。

关键词：胱天蛋白酶11 缺血性卒中血脑屏障 Hippo信号通路哺乳动物不育系20样激酶1

Mst-1调控缺氧复氧诱导的小鼠心肌细胞自噬及凋亡的机制

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中华心血管病杂志 2020年第12期48卷 1060-1069页

作者：王艳赵然尊仇治梅沈长银陈攀科郝星袁近松邓文文石蓓遵义医科大学附属医院心血管内科 563000 遵义医科大学第二附属医院心血管内科 563000

目的探索小鼠心肌细胞中哺乳动物不育系20样激酶1(mammalian sterile 20-like kinase 1,Mst-1)调控缺氧复氧(hypoxia reoxygenation,HR)诱导的心肌细胞自噬及凋亡机制。方法采用酶消化法结合差速贴壁的方法培养小鼠乳鼠心肌细胞,通过缺... 详细信息

目的探索小鼠心肌细胞中哺乳动物不育系20样激酶1(mammalian sterile 20-like kinase 1,Mst-1)调控缺氧复氧(hypoxia reoxygenation,HR)诱导的心肌细胞自噬及凋亡机制。方法采用酶消化法结合差速贴壁的方法培养小鼠乳鼠心肌细胞,通过缺氧24 h复氧6 h的方法建立HR模型。实验分组:对照组:正常培养的心肌细胞;Mst-1空病毒组:用重组慢病毒空载体转染心肌细胞48 h;Mst-1敲低组:用携带Mst-1小干扰RNA(siRNA)的重组慢病毒转染心肌细胞48 h;Mst-1过表达组:用携带Mst-1基因的重组慢病毒转染心肌细胞48 h;HR组:建立心肌细胞HR模型;Mst-1敲低+HR组:用携带Mst-1 siRNA的重组慢病毒转染心肌细胞后48 h建立心肌细胞HR模型;Mst-1过表达+HR组:用携带Mst-1基因的重组慢病毒转染心肌细胞后48 h建立心肌细胞HR模型。采用实时荧光定量RCR(qPCR)以及Western blot检测细胞中Mst-1 mRNA及蛋白相对表达量,免疫荧光染色检测心肌细胞标志物心肌肌钙蛋白T(cTnT),及细胞自噬体与自噬溶酶体变化,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法检测心肌细胞凋亡水平,Western blot检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ/LC3Ⅰ,P62及凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸酶剪切体(cleaved-caspase)9、半胱氨酸天冬氨酸酶前体(pro-caspase)9、cleaved-caspase-3、pro-caspase-3,以及髓细胞白血病1基因(MCL-1)的表达情况达。予以MCL-1抑制剂A1210477做回复实验,验证Mst-1通过调控MCL-1参与心肌细胞凋亡及自噬。结果免疫荧光检测发现培养细胞表达心肌细胞特异性标志物cTnT;HR情况下心肌细胞中Mst-1表达增加,慢病毒转染可有效抑制或过表达细胞中Mst-1。HR组与Mst-1过表达+HR组心肌细胞内自噬体及自噬溶酶体含量低于对照组,而Mst-1敲低+HR组心肌细胞内自噬体及自噬溶酶体含量高于HR组(P均<0.05)。TUNEL结果显示,HR组及Mst-1过表达+HR组中TUNEL阳性细胞比例高于对照组,而Mst-1敲低组+HR组中TUNEL阳性细胞比例低于HR组(P均<0.05)。Western blot结果显示,与对照组比较,HR组及Mst-1过表达+HR组细胞中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ值较低,P62与cleaved-caspase-9、cleaved-caspase-3表达水平较高(P均<0.05);与HR组比较,Mst-1敲低+HR组中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ值较高,P62与cleaved-caspase-9、cleaved-caspase-3表达水平较低(P均<0.05)。HR与Mst-1过表达+HR组心肌细胞中磷酸化(P)MCL-1蛋白表达水平低于对照组,Mst-1敲低+HR组的P-MCL-1蛋白表达水平高于HR组(P均<0.05)。回复实验显示抑制细胞中MCL-1可阻断Mst-1 siRNA对细胞自噬及凋亡的调节作用。结论抑制心肌细胞中Mst-1的表达,可促进HR诱导的心肌细胞自噬,改善心肌细胞凋亡,该作用可能与其调控MCL-1表达相关。

关键词：肌细胞,心脏哺乳动物不育系20样激酶1 自噬凋亡髓细胞生长因子1

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巨噬细胞特异性敲除MST1小鼠模型的构建

安徽医科大学学报 2023年第10期58卷 1672-1677页

作者：薛茜李鉴洋高文茜张玉侠安徽医科大学基础医学院病理生理学教研室合肥230032 安徽医科大学第一临床医学院合肥230032

目的制备髓系(包括巨噬细胞和粒细胞)特异敲除哺乳动物不育系20样激酶1(MST1)基因小鼠,为研究巨噬细胞MST1在临床相关疾病发生中的作用及机制提供动物模型。方法利用MST1基因携带loxP位点的小鼠(Mst1^(flox/flox))和髓系细胞特异表达Lys... 详细信息

目的制备髓系(包括巨噬细胞和粒细胞)特异敲除哺乳动物不育系20样激酶1(MST1)基因小鼠,为研究巨噬细胞MST1在临床相关疾病发生中的作用及机制提供动物模型。方法利用MST1基因携带loxP位点的小鼠(Mst1^(flox/flox))和髓系细胞特异表达LysM-Cre小鼠杂交构建巨噬细胞特异性敲除MST1小鼠(Mst1^(flox/flox)LysM-Cre^(+),即Mst1^(ΔM/ΔM));通过聚合酶链式反应(PCR)分别扩增loxP位点和Cre基因进行基因型鉴定;通过定量PCR以及免疫荧光验证MST1在巨噬细胞中的敲除效率;通过流式细胞术检测肝脏主要免疫细胞群。结果Mst1^(flox/flox)LysM-Cre^(+),即Mst1^(ΔM/ΔM)为巨噬细胞特异性敲除MST1小鼠基因型;qPCR和免疫荧光检测表明骨髓来源的巨噬细胞和腹腔巨噬细胞的MST1敲除效率达70%以上;流式检测表明敲除巨噬细胞MST1基因对小鼠肝脏的主要免疫细胞群无明显影响。结论成功构建巨噬细胞特异敲除MST1小鼠模型,为进一步研究巨噬细胞MST1在临床相关疾病中的作用及机制奠定了基础。

关键词：哺乳动物不育系20样激酶1 Cre-loxP 巨噬细胞基因敲除小鼠 Hippo通路

AhR对系统性红斑狼疮B细胞异常活化及Th17/Treg失衡的影响

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AhR对系统性红斑狼疮B细胞异常活化及Th17/Treg失衡的影响

作者：刘婷兰州大学

学位级别：硕士

目的:通过检测系统性红斑狼疮(Systemic lupus erythematosus,SLE)中芳烃受体(Aryl Hydrocarbon Receptor,AhR)和哺乳动物不育系20样激酶1(Mammalian sterile-20-like,MST1)的表达水平,B细胞,辅助性T细胞17(Th17)和调节性T细胞(Treg)的数量,分析其相互关系,探讨AhR对SLE疾病B细胞异常活化及Th17/Treg失衡的影响机制,为SLE的治疗和机制研究提供理论基础。方法:纳入兰州大学第一医院诊断为SLE患者30名和健康对照者12名,查阅病例收集相关临床基本资料和实验室检测指标,同时收集外周血全血。根据系统性红斑狼疮疾病活动指数(SLE disease activity index 2000,SLEDAI-2K)评分标准来评估SLE患者的疾病活动度。采用流式细胞术分析参与者外周血B细胞中AhR的表达、Th17细胞和Treg细胞的表达。用蛋白印迹法检测患者和健康对照组的外周血淋巴细胞中AhR和MST1蛋白表达水平;同时选取雌性C57BL/6J小鼠(n=6)设为正常对照组,雌性MRL/lpr小鼠(n=18)分为三组:模型组、Vehicle组和FICZ组。通过观察小鼠肾脏病理切片、脾脏长度、脾脏重量和脾指数来鉴定小鼠模型的建立和疾病炎症程度。采用流式细胞术分析小鼠Th17细胞和Treg细胞的表达。运用蛋白印迹法检测小鼠脾脏组织中AhR和Mst1蛋白表达水平。采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR,q RT-PCR)方法来检测脾脏组织中细胞因子的表达水平。结果:1.SLE患者外周血B淋巴细胞数量(P样变化,并且脾脏中Th17细胞数量显著增高(P<0.01),Treg细胞数量显著下降(P<0.01),Th17/Treg显著性增高(P<0.01),此外,MRL/lpr小鼠中AhR和Mst1的蛋白表达水平增高,差异具有统计学意义(P<0.05);7.与Vehicle相比,FICZ组小鼠脾脏中Th17细胞明显增高(P<0.01),Treg细胞显著下降(P<0.001),Th17/Treg显著性增高(P<0.01),AhR在Th17细胞(P<0.01)以及Treg细胞(P<0.05)中表达明显增高;8.与Vehicle相比,FICZ组小鼠脾脏组织中AhR和Mst1的蛋白表达水平增高(P<0.05);9.与Vehicle相比,FICZ组小鼠脾脏中促炎细胞因子IL-2 m RNA(P<0.05)、IL-4m RNA(P<0.05)和TNF-αm RNA(P<0.001)水平表达增高,抑炎细胞因子IL-10 m RNA(P<0.01)水平表达降低,炎症加重。结论:1.SLE患者外周血B细胞中AhR的表达水平与SLE疾病活动度相关,其可能是预测SLE合并肾损害的潜在指标;2.在SLE中,Th17/Treg失衡与疾病活动度具有相关性;3.AhR可能通过MST1诱导Th17/Treg失衡,进而参与SLE进展过程。

关键词：系统性红斑狼疮芳烃受体哺乳动物不育系20样激酶1 B细胞辅助性T细胞调节性T细胞

叶酸和维生素B12在同型半胱氨酸诱导人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用

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中国病理生理杂志 2019年第11期35卷 1951-1956页

作者：马鹏俊张鸣号郭伟马胜超孙磊李桂忠姜怡邓宁夏医科大学临床学院宁夏银川750004 宁夏血管损伤与修复研究重点实验室宁夏银川750004 宁夏医科大学基础学院宁夏银川750004

目的:探讨叶酸和维生素B12在同型半胱氨酸(Hcy)通过哺乳动物不育系20样激酶1(MST1)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡中的作用及机制。方法:将HUVECs分为3组,分别为对照组(0μmol/L Hcy)、Hcy组(100μmol/L Hcy)和干预组(100μmol/L Hcy... 详细信息

目的:探讨叶酸和维生素B12在同型半胱氨酸(Hcy)通过哺乳动物不育系20样激酶1(MST1)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡中的作用及机制。方法:将HUVECs分为3组,分别为对照组(0μmol/L Hcy)、Hcy组(100μmol/L Hcy)和干预组(100μmol/L Hcy+30μmol/L叶酸+30μmol/L维生素B12)。细胞处理72 h后,流式细胞术检测HUVECs的凋亡率;荧光倒置显微镜观察DNA甲基转移酶1(DNMT1)过表达腺病毒转染的效率;RT-qPCR和Western blot分别检测MST1及DNMT1的mRNA和蛋白表达水平;巢式甲基化特异性PCR法检测MST1启动子区的甲基化水平。结果:与正常对照组比较,Hcy组HUVECs的凋亡率升高(P样硬化的发病机制提供理论依据。

关键词：同型半胱氨酸叶酸维生素B12 哺乳动物不育系20样激酶1 DNA甲基化

MST1在帕金森细胞模型中的作用及其机制研究

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药物流行病学杂志 2023年第6期32卷 655-661页

作者：张君李永乐刘洁荆门市第二人民医院神经内科湖北荆门448000 荆门市第二人民医院病理科湖北荆门448000

目的探讨沉默哺乳动物不育系20样激酶1(MST1)基因对帕金森病中多巴胺能神经元细胞作用的影响。方法培养PC12细胞并诱导分化为神经元,将神经元分为对照组、1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)组、MST1 SiRNA+MPP+组、MST1SiRNA组,转染后培养48... 详细信息

目的探讨沉默哺乳动物不育系20样激酶1(MST1)基因对帕金森病中多巴胺能神经元细胞作用的影响。方法培养PC12细胞并诱导分化为神经元,将神经元分为对照组、1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)组、MST1 SiRNA+MPP+组、MST1SiRNA组,转染后培养48 h,采用Western blot法检测神经元细胞MST1、自噬启动蛋白1(ULK1)、核糖体蛋白S6激酶1(S6K1)的蛋白表达;采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖试剂盒检测细胞内丙二醛(MDA)、还原性谷胱甘肽(GSH)含量以及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)的活性。结果转染后,MST1 SiRNA组神经元细胞中MST1蛋白表达明显减少(P<0.001)。与对照组相比,MPP+处理后能够明显抑制PC12细胞的增殖(P<0.01),增加MDA含量,抑制SOD、CAT活性并降低GSH含量(P<0.01),增加MST1和ULK1蛋白表达,抑制p-S6K1蛋白表达(P<0.01)。与MPP+组相比,MST1 SiRNA转染后能够有效改善MPP+对PC12细胞增殖的抑制作用(P<0.05),同时降低MDA的含量,增加GSH含量和SOD、GSH、CAT的活性(P<0.01),降低MST1和ULK1的蛋白表达,增加p-S6K1的蛋白表达(P<0.05或P<0.01)。结论沉默MST1基因能够抑制氧化应激、促进细胞增殖以及发挥神经元的保护作用。

关键词：哺乳动物不育系20样激酶1 自噬启动蛋白1 核糖体蛋白S6激酶1 多巴胺能神经元帕金森病

亚砷酸钠对小鼠肝细胞AML12氧化应激、凋亡及MST1、MST2蛋白表达的影响

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贵州医科大学学报 2022年第1期47卷 7-12页

作者：赵哲仪王正蓉方兴艳王甜罗昭逊谢婷婷贵州医科大学附属医院临床检验中心贵州贵阳550004 贵州医科大学医学检验学院贵州贵阳550004 贵州医科大学附属医院产前诊断中心贵州贵阳550004 山东省立第三医院检验科山东济南250031 贵州医科大学儿科学院贵州贵阳550004

目的探讨亚砷酸钠(NaAsO_(2))对小鼠肝细胞AML12氧化应激、凋亡及哺乳动物不育系20样激酶1(MST1)、MST2蛋白表达的影响。方法取对数生长期的小鼠正常肝细胞AML12,分为对照组(不含NaAsO_(2))及实验组(10、15、20、25及30μmol/L NaAsO_(2... 详细信息

目的探讨亚砷酸钠(NaAsO_(2))对小鼠肝细胞AML12氧化应激、凋亡及哺乳动物不育系20样激酶1(MST1)、MST2蛋白表达的影响。方法取对数生长期的小鼠正常肝细胞AML12,分为对照组(不含NaAsO_(2))及实验组(10、15、20、25及30μmol/L NaAsO_(2)处理24 h),采用荧光探针染色法和化学比色法分别检测各组小鼠AML12细胞内活性氧(ROS)含量和超氧化物歧化(SOD)活性水平,采用Western blot检测各组小鼠AML12细胞的MST1、MST2、磷酸化MST1/2(p-MST1/2)及半胱氨酸蛋白酶3剪接体(c-caspase 3)蛋白相对表达量。结果与对照组相比,随着NaAsO_(2)浓度的增加,各实验组小鼠AML12细胞内ROS含量逐渐升高(P20-30μmol/L NaAsO_(2)组小鼠AML12细胞内为MST1蛋白相对表达量降低、c-caspase 3蛋白相对表达量升高(P<0.05),15-30μmol/L NaAsO_(2)组小鼠AML12细胞内MST1蛋白相对表达量升高(P<0.05)。结论NaAsO_(2)可促进小鼠肝细胞AML12发生氧化应激、凋亡及p-MST1/2、MST1、MST2蛋白表达异常。

关键词：细胞凋亡亚砷酸钠肝细胞AML12 氧化应激哺乳动物不育系20样激酶1 哺乳动物不育系20样激酶2