检索结果-南通市图书馆

作者：王宁青岛农业大学

学位级别：硕士

A型塞尼卡病毒(Senecavirus A,SVA)是一种可引起猪的水疱病的新发病毒。这种病毒被归为小RNA病毒科塞尼卡病毒属。它的基因组是一个正义的,单链的不分节段RNA,长度大约为7300个核苷酸(nt)。小RNA病毒基因组本质上是一种m RNA,尽管它未经... 详细信息

A型塞尼卡病毒(Senecavirus A,SVA)是一种可引起猪的水疱病的新发病毒。这种病毒被归为小RNA病毒科塞尼卡病毒属。它的基因组是一个正义的,单链的不分节段RNA,长度大约为7300个核苷酸(nt)。小RNA病毒基因组本质上是一种m RNA,尽管它未经5’帽结构修饰,但仍然可以通过内部核糖体进入位点(IRES)启动蛋白表达。SVA CH-LX-01-2016(Gen Bank:KX751945.1)是我国具有代表性的分离株。已有研究确定该毒株3’poly(A)尾巴的上游具有一个668 nt 5’非编码区(UTR)和一个68 nt 3’UTR。本课题组基于该毒株建立了一个反向遗传系统,以拯救增强型绿色荧光蛋白(e GFP)标记的SVA,从而促进病毒分子机制的研究。SVA基因组5’UTR包含丙型肝炎病毒(HCV)样的IRES,该结构包括一个位于起始密码子上游的RNA假结,且有研究预测在3’UTR中包含一个吻环结构。假结结构在启动蛋白表达中起重要作用。试验一:本研究中构建了一组SVA(CH-LX-01-2016毒株)的微型基因组,该微型基因组具有所有假结茎II(PKS-II)点突变组合。结果表明,任何点突变组合都不能显著干扰IRES启动蛋白表达。进一步构建了全长SVA c DNA克隆,其中形成PKS-II的c DNA基序被定点突变,完全破坏了IRES中PKS-II的结构。将这种突变的SVA c DNA克隆转染到BSR-T7/5细胞中,结果表明,全突变后的PKS-II不会显著影响反义基因组复制,但是无法从此c DNA克隆中拯救出有活性的SVA。推测突变基序可能破坏了病毒粒子组装的包装信号,从而导致SVA的拯救失败。试验二:推测SVA的假结区域包含两个关键结构即假结茎I和假结茎II(PKS-I和-II)。PKS-I由两部分碱基配对的基序(PKS-Ia和-Ib)组成,它们之间有一个未配对的间距(Up S)。在本研究中,构建了5组PKS-I基序定点突变的SVA微型基因组。双荧光素酶报告基因检测显示,PKS-I基序突变对IRES活性并无显著影响,更不会显著干扰蛋白表达的启动。相应地,构建了5个点突变的SVA c DNA克隆。将这些经基因修饰的c DNA克隆分别转染到BSR-T7/5细胞中,试图拯救具有生物学活性的SVA。结果表明SVA完全能够耐受病毒基因组中的PKS-Ia或Up S区域的突变,相比之下,PKS-Ib的高保真序列可能是病毒拯救所必需的,因为本试验未能从其只有3个点突变的c DNA克隆中成功拯救SVA-IV。试验三:在本实验中,共构建了7个e GFP标记的SVA c DNA克隆,这些克隆在其3’UTR部位均具有不同的突变吻环形成基序(KLFMs)。病毒拯救试验表明,7个e GFP标记的SVA均可从其c DNA克隆中成功拯救,并且所有突变KLFMs经10代病毒传代后均保持遗传稳定性。该试验结果表明,SVA 3’UTR即使含有一个假定的吻环结构,但此结构对病毒复制是不必要的。

关键词：反向遗传学 A型塞尼卡病毒内部核糖体进入位点假结吻环

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A型塞尼卡病毒3′非编码区潜在吻环基序突变对微型基因组蛋白表达的影响

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青岛农业大学学报（自然科学版） 2022年第2期39卷 90-95页

作者：刘拂晓王宁赵地李静孟海蓝李紫薇于永乐董雅琴尼博青岛农业大学动物医学院山东青岛266109 内蒙古农业大学兽医学院内蒙古呼和浩特010018 青岛市黄岛区市场监督管理局山东青岛266500 中国动物卫生与流行病学中心山东青岛266032

A型塞尼卡病毒(Senecavirus A,SVA),可导致猪的口吻部、口腔黏膜、蹄冠部出现水疱样病变,其临床症状与其他水疱型疫病所导致的症状难以区分。该病毒属于小RNA病毒科(Picornaviridae)、塞尼卡病毒属(Senecavirus)成员,其基因组含有5′非... 详细信息

A型塞尼卡病毒(Senecavirus A,SVA),可导致猪的口吻部、口腔黏膜、蹄冠部出现水疱样病变,其临床症状与其他水疱型疫病所导致的症状难以区分。该病毒属于小RNA病毒科(Picornaviridae)、塞尼卡病毒属(Senecavirus)成员,其基因组含有5′非编码区(5′untranslated region,5′UTR)、多聚蛋白的开放阅读框及3′非编码区(3′untranslated region,3′UTR)。过去有报道预测该病毒的3′UTR含有一个三碱基配对的潜在RNA吻环结构,但未被试验证实。构建了7个不同吻环基序突变的SVA微型基因组,将其分别与另一荧光报告质粒共转染细胞后,进行双荧光素酶报告分析。结果证明潜在吻环结构的破坏未能干扰5′UTR启动蛋白的表达。

关键词： A型塞尼卡病毒 3′非编码区吻环微型基因组双荧光素酶报告分析

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