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作者：程洁安徽医科大学

学位级别：硕士

背景micro RNAs(mi RNAs)是一类新型非编码小RNA,在转录后水平调节靶基因的表达,参与各种病理生理过程。已报道mi RNA可以参与调节心肌细胞凋亡、心肌梗死、心肌重塑、心肌缺血再灌注损伤、药物预处理等过程。本课题组前期利用mi RNA芯... 详细信息

背景micro RNAs(mi RNAs)是一类新型非编码小RNA,在转录后水平调节靶基因的表达,参与各种病理生理过程。已报道mi RNA可以参与调节心肌细胞凋亡、心肌梗死、心肌重塑、心肌缺血再灌注损伤、药物预处理等过程。本课题组前期利用mi RNA芯片技术发现mi R-133b-5p在心力衰竭大鼠心肌细胞中表达量明显降低,而经历吗啡预处理(morphine preconditioning,MPC)后,mi R-133b-5p水平显著升高。本课题拟在前期研究基础上,进一步研究mi R-133b-5p介导MPC心肌细胞保护效应的作用及机制。方法*** R-133b-5p inhibitor转染效率验证。对数期生长的H9c2心肌细胞长至40-50%细胞融合度时转染mi R-133b-5p inhibitor(FAM标记),48 h后荧光显微镜下观察绿色荧光标记的细胞占总细胞的比例,q RT-PCR验证细胞内mi R-133b-5p下降水平。*** R-133b-5p在心肌细胞凋亡中的作用及其机制。对数期生长的H9c2心肌细胞随机分为3组:正常对照组(CON)、抑制剂组(mi R-133b-5p inhibitor)、抑制剂对照组(inhibitor-NC)。CON正常培养,mi R-133b-5p inhibitor在细胞长至40-50%融合度时转染mi R-133b-5p inhibitor,inhibitor-NC在细胞长至40-50%融合度时转染mi R-133b-5p inhibitor-NC。48 h后收集培养液上清检测乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性,收集细胞利用流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率,最后利用q RT-PCR和Western Blot检测各组凋亡相关分子Fas的表达情况。*** R-133b-5p在吗啡预处理减轻心肌细胞缺氧再给氧损伤中的作用及其机制。对数期生长的H9c2心肌细胞随机分为5组:正常对照组(CON)、缺氧再给氧组(hypoxia/reoxygenation,H/R)、吗啡预处理组(MPC)、吗啡预处理+抑制剂组(MPC+mi R-133b-5p inhibitor)、吗啡预处理+抑制剂对照组(MPC+inhibitor-NC)。CON细胞正常培养。H/R细胞给予缺氧5h、复氧1h处理。MPC细胞在H/R之前给予1mmol/L吗啡预处理10 min。MPC+mi R-133b-5p inhibitor细胞在吗啡预处理前24 h转染mi R-133b-5p inhibitor。MPC+inhibitor-NC细胞在吗啡预处理前24 h转染mi R-133b-5p inhibitor。吸取各组细胞培养液上清检测LDH活性,细胞计数试剂盒8(cell counting kit-8,CCK-8)检测心肌细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,最后利用q RT-PCR和Western Blot检测各组凋亡相关分子Fas的表达情况。结果*** R-133b-5p inhibitor转染效率验证。H9c2心肌细胞转染mi R-133b-5p inhibitor(FAM标记)48后,荧光显微镜下观察发现大于80%的细胞带有绿色荧光标记,q RT-PCR检测发现细胞转染mi R-133b-5p inhibitor后mi R-133b-5p表达水平明显降低,即转染效率满意。*** R-133b-5p在心肌细胞凋亡中的作用及其机制。与CON组相比,mi R-133b-5p inhibitor组细胞mi R-133b-5p表达明显下降,培养液LDH活性增多,细胞凋亡率升高(P吗啡预处理减轻心肌细胞缺氧再给氧损伤中的作用及其机制。与CON相比,H/R、MPC MPC+mi R-133b-5p inhibitor和MPC+inhibitor-NC组细胞活力下降,LDH水平增加,凋亡率增加,mi R-133b-5p表达下调(P<0.05)。与H/R组相比,MPC组mi R-133b-5p表达明显上调,细胞活力增加,LDH水平减少,细胞凋亡率减少,Fas表达下调(P<0.05)。与MPC组相比,MPC+mi R-133b-5p inhibitor组mi R-133b-5p表达明显下调,细胞活力降低,LDH水平增加,细胞凋亡率增加,Fas表达上调(P<0.05),而MPC+in

关键词：心肌细胞微小 RNAs 凋亡缺氧再给氧损伤吗啡预处理

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吗啡预处理调控NGF诱导的神经细胞TRPV1通道敏化的作用及信号机制

吗啡预处理调控NGF诱导的神经细胞TRPV1通道敏化的作用及信号机制

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作者：马振晓安徽医科大学

学位级别：硕士

目的:研究吗啡预处理对神经生长因子(Nerve growth factor,NGF)诱导的神经细胞瞬态电压感受器离子通道1(Transient receptor potential vanilloid1,TRPV1)敏化的抑制作用及信号通路,以探讨其调控心肌缺血伤害感受信号传导的可能机制。方... 详细信息

目的:研究吗啡预处理对神经生长因子(Nerve growth factor,NGF)诱导的神经细胞瞬态电压感受器离子通道1(Transient receptor potential vanilloid1,TRPV1)敏化的抑制作用及信号通路,以探讨其调控心肌缺血伤害感受信号传导的可能机制。方法:原代培养2日龄SD大鼠背根神经节(Dorsal root ganglia,DRG)神经元或大鼠嗜铬瘤细胞(Pheochromocytoma cell,PC12),接种于24孔板或6孔板中,均随机分为8组:对照组(CON组)、辣椒素刺激组(CAP组)、NGF敏化组(NGF组)、不同浓度吗啡预处理组(MPC0.3组、MPC1.0组、MPC3.0组)、TRPV1通道阻断剂组(I-RTX组)、TRPV1阻断剂+NGF敏化组(I-RTX+NGF组)。CON组细胞正常培养,CAP组细胞予以100nmol/L辣椒素刺激,NGF组细胞加入100ng/m L NGF孵育1h,不同浓度MPC组细胞于NGF孵育前分别予以终浓度为0.3、1.0、3.0?mol/L的含吗啡培养液孵育10分钟,洗脱30分钟,I-RTX组及I-RTX+NGF组细胞分别在CAP组及NGF组细胞的基础上予以100nmol/L I-RTX共同孵育。各组DRG神经元在100nmol/L辣椒素刺激后,即刻采用全细胞膜片钳技术检测辣椒素诱发内向电流;免疫荧光双标染色法观察P物质(Substance P,SP)及降钙素基因相关肽(Calcitonin gene-related peptide,CGRP)蛋白共表达情况;各组PC12细胞均予以Western blot法检测TRPV1、磷酸化TRPV1(Phosphorylated TRPV1,p TRPV1)、磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(Phosphorylated extracellular signal-regulated kinase1/2,p ERK1/2)及磷酸化蛋白激酶B(Phosphorylated protein kinase B,p AKT)相对表达水平。结果:DRG神经元膜片钳结果显示,与CON组比较,CAP组的辣椒素诱发内向电流幅度增加(P吗啡预处理组及I-RTX均可以对其产生抑制作用(P吗啡预处理可以抑制这种表达;I-RTX+NGF组SP及CGRP共表达量较其他各组均明显减少。PC12神经细胞Western blot结果显示,与CON组相比,CAP组TRPV1蛋白、p TRPV1蛋白、p ERK1/2蛋白及p AKT蛋白表达均上调(P吗啡预处理可能通过抑制NGF诱导的TRPV1通道敏化及下游信号通路活化,调控心肌缺血伤害感受信号的传导。

关键词：吗啡预处理背根神经节神经生长因子全细胞膜片钳瞬态电压感受器离子通道1

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应变率成像评价吗啡预处理兔心肌缺血再灌注左室长轴功能

应变率成像评价吗啡预处理兔心肌缺血再灌注左室长轴功能

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作者：赵白桦中南大学

学位级别：硕士

研究背景：心肌缺血／再灌注损伤(MIRI)是指心肌血供短时间中断,一定时间内恢复血供,原缺血心肌发生较血供恢复前更严重的损伤。随着心脏体外循环、冠状动脉搭桥术及大血管外科手术等技术的推广应用,MIRI已成为阻碍临床疗效的主要难题... 详细信息

研究背景：心肌缺血／再灌注损伤(MIRI)是指心肌血供短时间中断,一定时间内恢复血供,原缺血心肌发生较血供恢复前更严重的损伤。随着心脏体外循环、冠状动脉搭桥术及大血管外科手术等技术的推广应用,MIRI已成为阻碍临床疗效的主要难题。目前,关于心肌保护的研究尤为广泛,其中包括经典缺血预处理、缺血后处理、药物预处理、药物后处理以及远距缺血预处理或后处理等。吗啡是一种非选择性阿片受体激动剂,广泛应用于麻醉、镇痛、心肌梗塞和急性左心衰竭的治疗。作为多种心肌保护方法之一,吗啡对心肌缺血再灌注损伤心肌的保护作用已研究得较为深入,大量研究者从整体或离体器官,以及组织细胞不同层次入手,探求其机制,并通过心肌细胞的超微结构、心肌梗死面积等对其保护作用进行证实。心肌缺血时,室壁已出现节段性的运动减弱,但普通二维超声心动图只能估测整体心脏运动,不能有效地评价局部心肌运动。由组织多普勒技术衍生而来的应变率成像技术(SRI)克服了周围心肌牵拉和心脏整体运动的干扰,能准确有效地评价整个心动周期内局部心肌,尤其是缺血心肌的收缩舒张功能。目的：建立新西兰大白兔心肌缺血再灌注动物模型,应用应变率成像技术(strain rate imaging, SRI)对心肌缺血再灌注前后4周内不同时间点局部心肌收缩功能的变化进行分析,探讨SRI技术在心肌缺血再灌注局部左心功能无创估测中的价值,以及结合SRI技术评价吗啡预处理对心肌缺血再灌注损伤的弱化作用。方法：雄性新西兰大白兔40只,随机分为假手术组(SH组,n=10)、吗啡预处理缺血再灌注组(MF组,n=15)和生理盐水预处理缺血再灌注组(NS组,n=15)。所有实验动物于手术前1d(天),手术后ld、3d、7d、14d以及28d行超声心动图检查,常规测量心率、左室舒张末期内径、左室射血分数及短轴收缩率,同时采集左心室长轴切面、心尖四腔切面及心尖二腔切面动态TDI图像,随后行脱机分析,测定左室各壁二尖瓣环处、基底段、中间段收缩期峰值速度(Vs),测定左室各壁基底段、中间段收缩期峰值收缩期峰值应变率(SRs)。结果：MF组和NS组术后1天左室射血分数和短轴缩短率较术前和SH组减低,差异有显著意义(p0.05);左室同一水平游离壁的收缩期峰值运动速度高于室间隔的收缩期峰值运动速度(P0.05)。心肌缺血再灌注之后,SH组术后1天至28天各时间点左心室长轴6个壁二尖瓣环处、基底段、中间段收缩期峰值速度较术前无明显改变(p>0.05)。术后1天,MF组和NS组左室前壁和前间隔二尖瓣环处、基底段、中间段收缩期峰值速度较术前和SH组明显减低,差异有极显著性意义(P0.05)。术后1天,MF组和NS组左室前壁和前间隔基底段、中间段收缩期峰值应变率术较术前和SH组明显减低,差异有极显著性意义(P吗啡预处理组和生理盐水预处理组的左室长轴整体与局部收缩功能均比假手术组显著减退,且生理盐水预处理组减退更显著。吗啡预处理对兔心肌缺血再灌注损伤存在明显的弱化作用。SRI技术能够无创、客观、准确地发现局部心功能的变化,为心肌缺血再灌注局部心功能评估提供了一种可靠的方法。

关键词：应变率成像心肌缺血再灌注吗啡预处理

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Cav-3/ERK1/2通路在吗啡预处理减轻心衰大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用机制研究

Cav-3/ERK1/2通路在吗啡预处理减轻心衰大鼠心肌缺血再灌注损伤中...

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作者：郭成晓安徽医科大学

学位级别：硕士

背景慢性心力衰竭(chronic heart failure,CHF)是多种心脏疾病的终末阶段,具有发病率高、预后差,医疗费用高昂等特点。临床研究表明,手术治疗可能是提高缺血性心脏病及心瓣膜病等慢性心力衰竭患者远期生存率的最有效手段之一。然而,当... 详细信息

背景慢性心力衰竭(chronic heart failure,CHF)是多种心脏疾病的终末阶段,具有发病率高、预后差,医疗费用高昂等特点。临床研究表明,手术治疗可能是提高缺血性心脏病及心瓣膜病等慢性心力衰竭患者远期生存率的最有效手段之一。然而,当这类病人行心脏手术时,将不可避免地经历心肌缺血与再灌注过程。研究表明,合并慢性心衰的患者,在体外循环下行心脏手术时,心脏更容易发生缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤,即使在行非心脏手术时,由于术中血流动力学可能出现的剧烈变化也会引起心肌功能的损伤,造成心肌顿抑,进而影响围术期病人的生存率以及患者的远期预后。缺血预处理(ischemic preconditioning,IPC)是经典的内源性心肌保护措施之一,阿片受体是IPC发挥心肌保护作用的重要作用靶点。在正常心脏中,阿片类药物预处理可通过激活阿片受体模拟IPC的心肌保护作用,但在高龄及糖尿病等病理状态下,心肌对包括IPC以及阿片药物预处理等保护措施的敏感性显著减弱或消失。尽管如此,系列地临床研究表明阿片类药物仍可以有效预防心力衰竭后心脏缺血后损伤,降低慢性心力衰竭患者心血管相关事件发生率。本课题前期研究发现,阿片类药物预处理减轻慢性心衰大鼠心肌的缺血再灌注损伤的机制与慢性心衰心脏中μ阿片受体(mu-opioid receptor,MOR)表达上调,并通过调节ERK-GSK3β信号通路有关。研究表明,阿片受体主要位于细胞膜的微囊部分,特别是与微囊上特征性微囊蛋白-3(Cav-3)存在密切关联。阿片受体介导的心肌保护作用依赖于Cav-3的表达,当体内Cav-3过表达,可以显著增强阿片预处理的心肌保护作用;而敲除Cav-3基因后,阿片预处理则不能有效激活ERK等蛋白激酶,继而减轻缺血后心肌的再灌注损伤。吗啡作为经典的阿片类镇痛药物,广泛应用于心血管手术中,发挥镇痛、镇静作用,同时也可减轻心脏负荷及心肌缺血后再灌注损伤。但Cav-3是否参与介导吗啡预处理减轻心衰心脏缺血后再灌注损伤及其作用机制仍不明确?本研究利用梗死后慢性心力衰竭大鼠,通过建立离体全心缺血再灌注损伤模型,联合心肌原位腺病毒注射及多种分子病理学等实验探讨Cav-3/ERK1/2在吗啡预处理减轻慢性心力衰竭大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用及机制。方法1.慢性心力衰竭模型的制备和腺相关病毒心脏原位注射健康成年雄性大鼠,体重200-250 g,通过结扎冠状动脉左前降支制备慢性心力衰竭模型。另取部分大鼠于冠状动脉左前降支结扎后于左心室壁原位注射AAV9-Cav3sh RNA-GFP和AAV9-GFP,饲养4周后用于进一步研究。2.离体心脏全心缺血再灌注损伤模型的建立取慢性心力衰竭模型制备成功的大鼠心脏,快速悬挂于Langendorff灌注架上,逆行灌注K-H液。在平衡15 min后,心脏予以全心停止K-H液灌注30 min后再恢复灌注120 min制备离体心脏全心缺血再灌注模型。3.实验分组及处理慢性心力衰竭大鼠心脏55个,采用随机数字表法分5组(n=11):对照组(Sham组)、心肌缺血再灌注组(IR组)、吗啡预处理组(MPC组)、吗啡预处理+甲基-β-环糊精组(MPC+MβCD组)、甲基-β-环糊精对照组(MβCD组)。Sham组给予持续灌注K-H液。MPC组于平衡灌注15 min后灌注含1μmol/L吗啡的K-H液进行预处理,灌注5 min后改为K-H液灌注5 min,3个循环共计30 min,随后建立IR模型。MPC+MβCD组于吗啡预处理前10 min灌注含200μmol/L甲基-β-环糊精的K-H液,其余操作同MPC组。MβCD组:于全心缺血前40 min灌注含200μmol/L甲基-β-环糊精的K-H液,其余操作同IR组。另取注射AAV9-Cav3sh RNA-GFP和AAV9-GFP的慢性心力衰竭大鼠心脏22个(n=11),分别实施1μmol/L吗啡预处理,处理结束后建立IR模型。4.指标检测于平衡15 min末、再灌注5与10 min时收集冠状动脉流出液,采用化学比色法检测LDH活性。再灌注120 min末留取心脏行TTC染色,测定心肌梗死体积(IS)、缺血危险区体积(AAR),计算IS/AAR;采用TUNEL染色法检测细胞凋亡;提取再灌注末的心肌组织,采用Western blot法检测心肌组织Cav-3、ERK1/2、p-ERK1/2表达水平,计算p-ERK1/2/ERK1/2比值。结果1.慢性心力衰竭模型与离体心脏全心缺血再灌注损伤模型的评估与同期正常大鼠心脏相比,心衰组大鼠左心室心腔明显扩大,左心室收缩期/舒张期心腔内径显著增加,EF下降约45%(P<0.05),表明慢性心力衰竭模型制备成功。在全心缺血再灌注损伤模型中,IR组较s

关键词：吗啡预处理慢性心力衰竭缺血/再灌注损伤小窝蛋白-3 细胞外调节蛋白激酶

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RISK信号通路在吗啡预处理减轻心力衰竭大鼠离体心脏缺血—再灌注损伤中的作用机制

RISK信号通路在吗啡预处理减轻心力衰竭大鼠离体心脏缺血—再灌注...

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作者：金世云安徽医科大学

学位级别：硕士

背景慢性心力衰竭(chronic heart failure,CHF)是各种心血管疾病如:高血压、心瓣膜病、扩张型心肌病等的终末阶段。研究表明,合并CHF的患者行心脏或非心脏手术时,更容易发生心肌的缺血-再灌注损伤(ischemia-reperfusion injury,IRI)。... 详细信息

背景慢性心力衰竭(chronic heart failure,CHF)是各种心血管疾病如:高血压、心瓣膜病、扩张型心肌病等的终末阶段。研究表明,合并CHF的患者行心脏或非心脏手术时,更容易发生心肌的缺血-再灌注损伤(ischemia-reperfusion injury,IRI)。缺血预处理(ischemic preconditioning,IPC)是目前已知最强的内源性心肌保护机制,可以显著减轻心肌的IRI。然而,在高龄、糖尿病以及高血脂等病理状态下,IPC的心肌保护作用显著减弱或消失,这可能与病理状态下某些信号蛋白激酶发生改变有关。再灌注损伤补救激酶(Reperfusion injury salvage kinase,RISK)通路主要包括磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(phosphatidylinositol-3-kinase/protein kinase B,PI3K/Akt)及细胞外信号调节激酶(extracellular signal regulated kinase,ERK)等。在再灌注早期,RISK信号通路的活化,可通过磷酸化下游糖原合酶激酶-3b(glycogen synthase kinase-3b,GSK-3b)。而抑制GSK-3b活性,是IPC介导心肌保护作用的关键环节。本课题组前期研究表明,当大鼠合并CHF时,IPC的心肌保护作用显著减弱,而吗啡预处理(morphine preconditioning,MPC)仍然可以发挥心肌保护作用,但其具体机制还不清楚。本研究利用盐酸多柔比星长期注射诱导大鼠CHF模型,并以正常大鼠作对照,研究RISK信号通路即PI3K/Akt和ERK通路在MPC减轻CHF大鼠心肌IRI中的作用机制。方法1.大鼠CHF模型的制备雄性SD大鼠,体重200±30 g,随机分为两个大组,盐酸多柔比星注射组(Doxorubicin,DOX)和生理盐水注射组(Normal saline,NS),DOX组大鼠尾静脉注射盐酸多柔比星2 mg/kg,每周一次,连续6周,总量达12mg/kg,NS组注射等量的生理盐水。在注射第8周末,行超声心动图检测,评价心脏功能,随机选取部分大鼠的心肌组织行HE染色,观察组织结构。2.在正常大鼠中研究RISK信号通路介导MPC心肌保护作用的机制将正常大鼠随机分为8个组:假手术组(sham,n=9)、缺血再灌注组(IR,n=9)、缺血预处理组(IPC,n=9)、1μmol/L的吗啡预处理(MPC,n=9)、MPC+wortmannin(MWT,n=9)、MPC+PD98059(MPD,n=9)以及抑制剂对照组wortmannin(WT,n=6)和PD98059(PD,n=6)组。Sham组只缝线,不结扎LAD,持续灌注K-H液。IR组灌注K-H液45 min后,并进行30 min局部缺血后120 min再灌注,制备心脏IRI模型。IPC组在IRI模型前行5 min短暂的缺血,5 min再灌注,共三个循环。MPC组先灌注15 min K-H液后,改为灌注含吗啡的K-H液(1μmol/L)进行预处理,灌注5 min,再次灌注K-H液5 min,共3个循环,然后制备心肌IRI模型。抑制剂PD98059(10μmol/L)以及wortmannin(100 nmol/L)于MPC前10 min,用溶解有抑制剂的K-H液进行灌注,至缺血开始后5 min,共45 min。各组收集冠脉流出液检测乳酸脱氢酶(LDH)活性,再灌注末取下心脏行TTC染色检测梗死面积(n=6-7),另取再灌注10 min时缺血危险区的心室肌组织,采用western blot法检测p-ERK/ERK、p-Akt/Akt、p-GSK-3β/GSK-3β及β-actin的蛋白表达(n=3)。3.在CHF大鼠中研究RISK信号通路介导MPC心肌保护作用的机制第一系列研究:观察不同浓度MPC对CHF大鼠离体心脏IRI的保护作用。将CHF大鼠随机分成8组:Sham组(n=9)、IR组(n=10)、IPC组(n=10)、MPC五个剂量组(0.1、1、3、10、30μmol/L,n=6-9)。第二系列研究:研究RISK信号通路在MPC减轻CHF大鼠离体心脏IRI中的作用机制。CHF大鼠随机分为4组:MPC+wortmannin(MWT,n=9)、MPC+PD98059(MPD,n=9)、wortmannin(WT,n=6)、和PD98059(PD,n=6)。各组处理方式和冠脉流出液收取的时间点同前。另取再灌注10 min时缺血危险区的心室肌组织,采用western blot法检测p-ERK/ERK、p-Akt/Akt、p-GSK-3β/GSK-3β及β-actin的蛋白表达,q RT-PCR检测Bax/Bcl-2的基因

关键词：心力衰竭缺血再灌注损伤吗啡预处理磷脂酰肌醇-3 激酶/蛋白激酶 B 细胞外信号调节激酶糖原合酶激酶-3β

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ERK信号通路与microRNA-133b-5p在吗啡预处理减轻心力衰竭大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用及其机制

ERK信号通路与microRNA-133b-5p在吗啡预处理减轻心力衰竭大鼠心...

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作者：潘永露安徽医科大学

学位级别：硕士

背景与目的心力衰竭(心衰,heart failure,HF)患者在接受心脏或非心脏手术时,易发生围术期心肌缺血再灌注(ischemia reperfusion,I/R)损伤,是临床麻醉医师需要面对的一个棘手问题。本课题组前期研究发现,细胞外信号调节激酶(extracellula... 详细信息

背景与目的心力衰竭(心衰,heart failure,HF)患者在接受心脏或非心脏手术时,易发生围术期心肌缺血再灌注(ischemia reperfusion,I/R)损伤,是临床麻醉医师需要面对的一个棘手问题。本课题组前期研究发现,细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)信号通路活化在吗啡预处理(morphine preconditioning,MPC)减轻离体心衰大鼠心肌I/R损伤中发挥重要作用。同时在心衰心肌细胞中miR-133b-5p下调最明显,且这种下调可被MPC所拮抗。Fas是miR-133b-5p的关键靶基因,MPC减轻心肌I/R损伤可能是通过上调mi R-133b-5p后抑制Fas介导的心肌细胞凋亡。受体相互作用蛋白(the receptor-interacting protein,RIP)是细胞应激的重要调节因子,与死亡域受体Fas相互作用,调控心肌细胞凋亡及坏死。鉴于以上研究背景,本研究进一步探讨ERK信号通路与mi R-133b-5p靶向调控Fas及RIP信号在MPC减轻心力衰竭大鼠心肌I/R损伤中的作用机制,以及两者之间的相互作用,为研究MPC在心力衰竭大鼠心肌保护机制中提供新的理论依据。方法1.在体水平健康成年雄性SD大鼠,200-230g,尾静脉注射盐酸多柔比星2mg/kg,1周1次,连续6周,制备慢性心力衰竭模型,在第8周末将造模成功的50只大鼠随机分为5组(n=10):(1)假手术组(Sham组)、(2)缺血再灌注组(I/R组)、(3)吗啡预处理组(MPC组)、(4)ERK抑制剂PD98059+吗啡预处理组(MPD组)、(5)PD98059对照组(PD组)。采用开胸结扎左冠状动脉前降支(LAD)缺血30 min、再灌注2 h的方法制备大鼠I/R损伤模型。除Sham组只缝线,不结扎LAD外,其余各组均进行LAD结扎。MPC组于缺血前股静脉输注吗啡0.1mg/kg,输注5 min后停止输注5 min,重复3次进行后进行I/R损伤。MPD组于吗啡预处理前15 min股静脉输注PD98059 0.5mg/kg至缺血开始后5 min,共50 min,然后制备I/R损伤模型。PD组持续输注0.5mg/kg PD98059至缺血开始后5 min,共50 min,然后制备心脏I/R损伤模型。以上各组分别于基础值、再灌注5和10 min时取静脉血测乳酸脱氢酶(LDH)活性;再灌注结束后TTC染色检测梗死区体积(IS)、缺血危险区体积(AAR)及IS/AAR比值;qRT-PCR检测miR-133b-5p及Fas;Western blot检测Fas、ERK、GSK-3β和RIP1/RIP3蛋白表达。2.心肌细胞水平乳鼠原代心肌细胞给予阿霉素处理24 h,采用随机数字表法将细胞分为7组(n=4):(1)空白组(Control组)、(2)缺氧复氧组(H/R组)、(3)吗啡预处理组(MPC组)、(4)miR-133b-5p过表达+缺氧复氧组(agomiR-133b+H/R组)、(5)过表达阴性对照+缺氧复氧组(agomiR-NC+H/R组)、(6)miR-133b-5p抑制剂+吗啡预处理+缺氧复氧组(ant-miR-133b+MPC组)、(7)抑制剂阴性对照+吗啡预处理+缺氧复氧组(ant-miR-NC+MPC组)。除Control组细胞正常培养外,其余各组均行缺氧4 h复氧2 h处理;MPC组细胞于缺氧前用含1mmol/L吗啡的培养液孵育10 min;agomiR-133b+H/R组和agomiR-NC+H/R组分别于H/R前24 h转染终浓度均为50 nmol/L的miR-133b-5p agomir或agomir-NC;ant-miR-133b+MPC组和ant-miR-NC+MPC组分别于MPC前24 h转染终浓度均为100 nmol/L的miR-133b-5p antagomir或antagomir-NC。各组按照上述处理结束后,采用CCK-8法测定细胞活力;LDH试剂盒测定细胞培养液中LDH活性;FITC Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡及坏死;qRT-PCR检测miR-133b-5p与Fas表达;Western blot检测Fas、ERK、GSK-3β和RIP1/RIP3蛋白表达。结果1.在体水平与I/R组比较,MPC组IS和IS/AAR减少,再灌注5和10 min时LDH活性降低,mi R-133b-5p、p-ERK1/2及p-GSK3β蛋白表达上调,Fas mRNA/蛋白及RIP1/3蛋白水平降低(P0.05);与MPC组比较,MPD组IS和IS/AAR增加,再灌注5和10 min时LDH活

关键词：心力衰竭吗啡预处理心肌缺血再灌注损伤 MicroRNA-133b-5p Fas 细胞外信号调节激酶受体相互作用蛋白

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应变率成像技术评价吗啡预处理对兔心肌缺血再灌注损伤时左室功能的影响

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现代生物医学进展 2016年第29期16卷 5610-5615页

作者：赵白桦刘明辉刘成晓蒲大容戴茜中南大学湘雅二医院超声科湖南长沙410001 山东省立医院麻醉科山东济南250021 重庆医科大学附属第一医院超声科重庆400016 黄山市人民医院超声科安徽黄山245000

目的:应用应变率成像技术(SRI)动态观察和评价吗啡预处理对兔心肌缺血再灌注损伤时左室长轴功能的影响。方法:建立新西兰大白兔心肌缺血再灌注模型,随机分为假手术组(SH组)、吗啡预处理组(MF组)和生理盐水预处理组(NS组)。于手术前1天... 详细信息

目的:应用应变率成像技术(SRI)动态观察和评价吗啡预处理对兔心肌缺血再灌注损伤时左室长轴功能的影响。方法:建立新西兰大白兔心肌缺血再灌注模型,随机分为假手术组(SH组)、吗啡预处理组(MF组)和生理盐水预处理组(NS组)。于手术前1天及手术术后28天内不同时间点测量超声心动图常规数据及左室各壁收缩期峰值速度与应变率参数。结果:术后1天,MF组与NS组左室整体与局部心肌收缩功能较术前和SH组明显减低(P吗啡预处理对兔心肌缺血再灌注损伤存在明显的弱化作用。

关键词：心肌缺血再灌注吗啡预处理应变率成像

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