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可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体在***中的表达、纯化及其生物学活性

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中国生物制品学杂志 2015年第10期28卷 1028-1032页

作者：王少华郑海锋王宇涛杨利军杨涛山西医科大学生物化学与分子生物学教研室细胞生理学省部共建教育部重点实验室山西太原030001

目的表达纯化可溶性肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosisinducing ligand,TRAIL)蛋白,并测定其生物学活性。方法利用***中表达C-端带有6×His标签的可溶性TRAIL蛋白,并优化诱导时间(4、6和8 h)和诱导剂IPTG的浓度(0.06、0.125、0.25、0.5、1 mmol/L)。表达产物经Ni亲和层析和离子交换层析纯化后,采用MTT法测定不同浓度TRAIL(终浓度分别为100、200、400 ng/ml)的活性,并检测亲和层析过程中两种洗脱方式(洗脱液4℃留柱过夜后进行洗脱和洗脱液进柱后直接收集流出液)及纯化过程中两次透析的时间(均为24和48 h)对TRAIL活性的影响。结果最佳诱导时间为6 h,最佳IPTG诱导浓度为0.5 mmol/L。表达产物的表达量占菌体总蛋白的20%,相对分子质量为20 000,可与兔抗人TRAIL单克隆抗体发生特异性结合。TRAIL终浓度为100、200和400 ng/ml的实验组的抑制率分别约为36%、53%和73%。亲和层析的两种洗脱方式的TRAIL活性差异无统计学意义(P>0.05),透析48 h比透析24 h获得的TRAIL活性显著降低(P肿瘤细胞生长的作用,优化后的TRAIL诱导条件和纯化方法可进一步大量生产高TRAIL蛋白的活性,满足了TRAIL的基础及临床相关研究的要求。

关键词：可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体大肠埃希菌基因表达纯化生物学活性

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中华肝脏病杂志 2005年第9期13卷 689-691页

作者：郑临杨益大吕国才阮冰盛吉芳陈亚岗浙江大学医学院附属第一医院传染病科杭州310003

目的探讨脂多糖(LPS)、巨噬细胞表达肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)和肝细胞凋亡的相互关系。方法LPS刺激巨噬细胞后,以流式细胞仪测定细胞表面的TRAIL表达,用酶联免疫吸附法(ELISA)法检测培养上清中可溶性TRAIL的表达;以(?)铬释... 详细信息

目的探讨脂多糖(LPS)、巨噬细胞表达肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)和肝细胞凋亡的相互关系。方法LPS刺激巨噬细胞后,以流式细胞仪测定细胞表面的TRAIL表达,用酶联免疫吸附法(ELISA)法检测培养上清中可溶性TRAIL的表达;以(?)铬释放试验测定可溶性TRAIL和膜性TRAIL 对HepG2细胞的毒性作用,并用Annexin V染色法验证凋亡细胞的产生。结果经100 ng/ml LPS刺激后, 只有9.8%的巨噬细胞有TRAIL的表达,而培养上清中可溶性TRAIL达(67.4±5.1)ng/ml,有明显增加。巨噬细胞培养上清液中可溶性TRAIL能溶解HepG2细胞,经Annexin V染色法证实为细胞凋亡,此作用可被特异性TRAIL抗体阻断。结论LPS能增加巨噬细胞可溶性TRAIL表达,并诱导肝细胞凋亡,提示TRAIL在病毒性肝炎发病机制中有重要作用。

关键词：脂多糖类细胞凋亡肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 HepG2细胞可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体脂多糖(LPS) 肝细胞凋亡巨噬细胞可溶性TRAIL 细胞培养上清液

强直性脊柱炎患者血清可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的表达及其临床意义

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第二军医大学学报 2008年第1期29卷 68-71页

作者：杨再兴梁艳朱烨李畅仲人前第二军医大学长征医院实验诊断科上海200003

目的:探讨血清可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(sTRAIL)在强直性脊柱炎(AS)患者、类风湿性关节炎(RA)患者及健康对照间的表达差异及其临床意义。方法:60例AS患者按HLA-B27抗原测定结果分为阳性38例,阴性22例;按Bath活动指标分为活动... 详细信息

目的:探讨血清可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(sTRAIL)在强直性脊柱炎(AS)患者、类风湿性关节炎(RA)患者及健康对照间的表达差异及其临床意义。方法:60例AS患者按HLA-B27抗原测定结果分为阳性38例,阴性22例;按Bath活动指标分为活动组41例,非活动组19例;另设20例RA患者和30例健康体检者作为对照。应用ELISA法检测上述研究对象血清sTRAIL的浓度,应用ESR自动化分析仪和特定蛋白分析仪测定红细胞沉降率(ESR)和血清C反应蛋白(CRP)含量。结果:HLA-B27阳性和阴性AS患者血清sTRAIL无统计学差异,均明显高于RA组和健康对照组(P相关(r=0.609,P=0.000),而阴性患者无显著相关;HLA-B27阳性和阴性AS患者血清sTRAIL与ESR均无明显相关。结论:血清sTRAIL水平在AS中明显上调,且与HLA-B27状态无关,但AS患者血清sTRAIL与CRP的相关性受HLA-B27状态的影响。

关键词：强直性脊柱炎类风湿性关节炎可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 HLA—B27抗原

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中国医药导报 2023年第29期20卷 116-120页

作者：张长洪张志华姬泽萱河北北方学院附属第一医院呼吸与危重症医学科河北张家口075000

目的探讨血清中可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(s TRAIL)、半乳凝素3、摄食抑制因子-1与慢性阻塞性肺疾病(COPD)合并抑郁的相关性。方法选取2019年7月至2021年5月河北北方学院附属第一医院收治的COPD急性加重期住院患者173例,其中... 详细信息

目的探讨血清中可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(s TRAIL)、半乳凝素3、摄食抑制因子-1与慢性阻塞性肺疾病(COPD)合并抑郁的相关性。方法选取2019年7月至2021年5月河北北方学院附属第一医院收治的COPD急性加重期住院患者173例,其中单纯COPD组103例,COPD合并抑郁组70例,记录并比较两组临床资料及血清s TRAIL、半乳凝素3、摄食抑制因子-1水平。采用logistic回归模型分析COPD合并抑郁的影响因素,进一步绘制受试者操作特征(ROC)曲线评估预测效能。结果COPD合并抑郁组COPD评估测试评分、治疗依从性差占比、合并慢性病占比、独居占比及血清s TRAIL、半乳凝素3、摄食抑制因子-1水平均高于单纯COPD组,第1秒用力呼气量占用力肺活量百分率(FEV_(1)/FVC)、第1秒用力呼气容积占预计值百分率(FEV_(1)pred)、职工医疗保险占比均低于单纯COPD组,差异有统计学意义(P因子-1均为COPD合并抑郁的影响因素(P因子-1三者单独及联合均对COPD合并抑郁有一定的预测价值(P因子-1联合检测对COPD患者合并抑郁诊断有一定价值。

关键词：慢性阻塞性肺疾病抑郁可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体半乳凝素3 摄食抑制因子-1

TRAIL增强低剂量阿霉素高效诱导人骨肉瘤细胞凋亡的实验研究

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中华肿瘤杂志 2005年第10期27卷 595-597页

作者：杨迪生苗旭东叶招明徐玉生浙江大学医学院附属第二医院骨科杭州310009

目的探讨可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)与阿霉素(ADM)联用是否存在协同性杀伤人骨肉瘤细胞的作用以及分子机制。方法TRAIL、ADM或两药联用24h,MTT法测试细胞毒作用,吖啶橙染色荧光显微镜和透射电镜下观察细胞及亚细胞结构... 详细信息

目的探讨可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)与阿霉素(ADM)联用是否存在协同性杀伤人骨肉瘤细胞的作用以及分子机制。方法TRAIL、ADM或两药联用24h,MTT法测试细胞毒作用,吖啶橙染色荧光显微镜和透射电镜下观察细胞及亚细胞结构形态,流式细胞术检测细胞凋亡比例。RT-PCR和Westernblot分别检测药物作用前后cFLIPmRNA和cFLIP蛋白的表达。结果(1)人骨肉瘤U2OS细胞对TRAIL不敏感,IC50>1mg/L。U2OS细胞对ADM相对敏感,存在剂量依赖性细胞毒效应。(2)TRAIL与ADM联用呈现高效协同作用,表现为亚毒性浓度TRAIL(0.1mg/L)与亚毒性浓度ADM(1.0μmol/L)联用可杀伤49.54%±2.79%的U2OS细胞。(3)流式细胞术、透射电镜及荧光显微镜观察证实,协同性杀伤作用主要通过诱导细胞凋亡实现。(4)cFLIPmRNA和cFLIP蛋白的表达下调促进了药物协同诱导凋亡的发生。结论TRAIL与亚毒性浓度ADM联用表现出的高效杀灭肿瘤细胞作用主要由凋亡介导实现,cFLIPmRNA下调和cFLIP蛋白的表达减少可能参与这一过程。

关键词：细胞凋亡可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体阿霉素骨肉瘤

慢病毒载体介导人sTRAIL对胃癌SGC-7901细胞凋亡的诱导作用

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四川大学学报（医学版） 2013年第3期44卷 348-351,392页

作者：李莉曹江刘玲朱祖安吴克俭费素娟徐州医学院附属医院消化科徐州221002 徐州医学院附属医院血液科徐州221002

目的构建携带人可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(sTRAIL)基因的自身失活型慢病毒载体,观察sTRAIL对人胃癌SGC-7901细胞的诱导凋亡作用,探讨其基因治疗功效。方法构建含人sTRAIL基因及内部核糖体进入位点序列(IRES)和绿色荧光蛋白(G... 详细信息

目的构建携带人可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(sTRAIL)基因的自身失活型慢病毒载体,观察sTRAIL对人胃癌SGC-7901细胞的诱导凋亡作用,探讨其基因治疗功效。方法构建含人sTRAIL基因及内部核糖体进入位点序列(IRES)和绿色荧光蛋白(GFP)基因的双顺反子慢病毒载体。采用脂质体转染法将慢病毒三质粒包装系统包装出的携带人sTRAIL的重组慢病毒,在体外感染人胃癌SGC-7901细胞、正常人肝细胞HL-7702、人胚肺成纤维细胞HLF-1。应用流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率,酶联免疫吸附实验(ELISA)评价sTRAIL蛋白在胃癌细胞中的表达。结果成功构建了慢病毒表达质粒pXZ208-sTRAIL,包装的重组慢病毒滴度可达106 IU/mL,可有效感染体外培养的细胞;含sTRAIL的重组慢病毒感染SGC-7901细胞,细胞凋亡率随病毒感染复数(MOI)的增加而升高,呈剂量依赖性;在MOI为6.0、作用24h时,细胞凋亡率最高,可达(29.12±2.87)%,细胞上清中sTRAIL表达量为(34.08±3.43)ng/mL;而在HL-7702、HLF-1等人正常细胞未见明显细胞凋亡。结论含有sTRAIL基因的重组慢病毒载体在体外能够有效地感染胃癌SGC-7901细胞并使其分泌有生物活性的sTRAIL蛋白,可诱导SGC-7901细胞的凋亡,而对正常细胞无显著影响。

关键词：慢病毒载体可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体基因治疗

慢性乙型重型肝炎患者血清sTRAIL的检测及临床意义

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实用医学杂志 2010年第2期26卷 252-254页

作者：李金强蒋道荣周光耀陈立长沙市第一医院肝病科 410011 南通大学附属医院感染疾病科 226001 温州医学院附属第二医院感染科 325027

目的:探讨慢性乙型重型肝炎患者血清可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(sTRAIL)的变化及其临床意义。方法:采用双抗体夹心酶联免疫吸附法对50例慢性乙型重型肝炎患者和30例正常人血清sTRAIL水平进行测定。对50例慢性乙型重型肝炎患者... 详细信息

目的:探讨慢性乙型重型肝炎患者血清可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(sTRAIL)的变化及其临床意义。方法:采用双抗体夹心酶联免疫吸附法对50例慢性乙型重型肝炎患者和30例正常人血清sTRAIL水平进行测定。对50例慢性乙型重型肝炎患者用荧光定量PCR法检测HBVDNA载量、全自动生化分析仪检测肝功能。结果:慢性乙型重型肝炎患者血清sTRAIL水平明显高于健康对照组(P相关(r=0.32,P相关性(r=0.78,P0.05)。结论:sTRAIL参与了慢性乙型重型肝炎的肝损伤过程,并与患者病情程度有一定的相关性,但与乙型肝炎病毒的复制水平无相关。

关键词：肝炎乙型慢性可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体血清

血清中血管相关生成因子的表达对贝伐珠单抗治疗晚期结直肠癌疗效预测价值

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血清中血管相关生成因子的表达对贝伐珠单抗治疗晚期结直肠癌疗效...

作者：吴倩中国人民解放军医学院

学位级别：硕士

目的回顾性分析我院晚期结直肠癌一线治疗患者的临床特点以及生存情况，检测患者血清VEGF-A、VEGF-B、VEGFR-2、sTRAIL和VEGF的浓度，探讨上述各细胞因子之间的相互关系及其与结直肠癌临床病理特征、治疗疗效的关系,寻找预测贝伐珠单抗... 详细信息

目的回顾性分析我院晚期结直肠癌一线治疗患者的临床特点以及生存情况，检测患者血清VEGF-A、VEGF-B、VEGFR-2、sTRAIL和VEGF的浓度，探讨上述各细胞因子之间的相互关系及其与结直肠癌临床病理特征、治疗疗效的关系,寻找预测贝伐珠单抗治疗结直肠癌效果的细胞因子。方法回顾性分析2010年12月至2013年3月在我院接受一线治疗的晚期结直肠癌病例，对其临床特征、病理特征及治疗特点及生存情况进行分析。根据患者治疗方法分为贝伐组和单纯化疗组，采用酶联免疫吸附试验检测上述患者接受一线治疗前及治疗6周后血清VEGF-A、VEGF-B、VEGFR-2、sTRAIL和VEGF的浓度。统计分析血清VEGF-A、VEGF-B、VEGFR-2、sTRAIL和VEGF浓度与临床病理特征之间的相互关系。比较全部患者治疗前后血清VEGF-A、VEGF-B、VEGFR-2、sTRAIL和VEGF的浓度差异，比较贝伐组及单纯化疗组之间VEGF-A、VEGF-B、VEGFR-2、sTRAIL和VEGF的浓度差异，分析各细胞因子之间的相互关系，及其浓度变化与患者预后的关系。结果1、截至2013年3月30日，入选90例患者，51例（56.7%）出现疾病进展，10例（11.1%）死亡，一线治疗后34例（37.8%）获PR,34例（37.8%）获SD，RR为37.8%，DCR为75.6%。贝伐组32例患者中14例（43.7%）获PR，13例（40.6%）达SD，5例（15.6%）PD;单纯化疗组58例患者20例（34.5%）获PR，21例（36.3%）达SD，17例（29.3%）PD。无进展生存期（PFS）为8.37个月，中位生存期尚未达到。 2、90例患者中贝伐组32例，中位PFS分别为11.73个月，单纯化疗组58例，中位PFS为8.00个月，差异有统计学意义（P=0.042）。淋巴结转移、KRAS基因状态是影响PFS的独立预后因素（P＜0.05）。 3、90例患者接受一线治疗前血清VEGF-A、VEGF-B、VEGFR-2、sTRAIL和VEGF浓度分别为316.9±16.21ng/l、268.2±10.3ng/l、10.3±0.5ng/ml、1521.1±76.3ng/l及924.2±46.3ng/l;一线治疗6周后血清VEGF-A、VEGF-B、VEGFR-2、sTRAIL和VEGF浓度分别为323.6±15.5ng/L、238.5±10.6ng/L、10.0±0.5ng/ml、1494.8±61.7ng/L和956.1±50.9ng/L，治疗前后上述各因子的浓度差别无统计学意义（P＞0.05）。 4、贝伐组治疗6周后血清VEGF-A、VEGF-B、VEGFR-2、sTRAIL和VEGF浓度分别为300.3±25.4ng/L、246.1±16.7ng/L、9.73±0.68ng/ml、1461.3±116.4ng/L和974.9±85.5ng/L;单纯化疗组治疗6周后血清VEGF-A、VEGF-B、VEGFR-2、sTRAIL和VEGF浓度分别为338.8±19.2ng/L、233.6±13.9ng/L、10.6±0.72ng/ml、1516.6±113.6ng/L和913.8±64.7ng/L，两组比较上述各因子的浓度差别无统计学意义（p＞0.05）;5、根据贝伐组患者治疗后疗效评价将其分为疾病进展（PD）及疾病控制（PR+SD）两个亚组，其中疾病控制亚组治疗前血清sTRAIL浓度为1423.2±111.2ng/l，治疗后血清sTRAIL浓度为1696.9±149.1ng/l，治疗后患者血清sTRAIL浓度较治疗前明显升高（P=0.048），提示血清sTRAIL的动态变化趋势可能与贝伐治疗疗效有关;而其血清VEGF-A、VEGF-B、VEGFR-2、VEGF浓度治疗前后无统计学意义（p＞0.05）。 6、分析治疗前后各细胞因子浓度与贝伐组疗效的关系。治疗前血清sTRAIL浓度低的患者有效率较治疗前血清sTRAIL浓度高的患者高，差距有统计学意义（P=0.036）。提示治疗前低浓度的血清sTRAIL可能与贝伐珠单抗治疗获益相关。而治疗前后血清VEGF-A、VEGF-B、VEGFR-2、VEGF浓度与贝伐组疗效无统计学意义（p＞0.05）。结论1、贝伐珠单抗联合化疗治疗转移性结直肠癌较单纯化疗能够延长PFS;2、血清VEGF-A、VEGF-B、VEGFR-2、sTRAIL和VEGF浓度与晚期结直肠癌各临床病理特征无关;3、贝伐珠单抗疾病控制组治疗后血清sTRAIL浓度较治疗前明显上升，提示血清sTRAIL的动态变化趋势可能与贝伐珠单抗治疗疗效相关（P＜0.05）;4、治疗前血清sTRAIL浓度低的患者

关键词：转移性结直肠癌血管内皮生长因子-A 血管内皮生长因子-B 血管内皮生长因子受体-2 可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体预后

强直性脊柱炎患者Toll样受体4表达和sTRAIL、TNF-α、IL-12水平的研究

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临床输血与检验 2010年第4期2卷 302-305页

作者：苏虹常微微徐胜前王忱诚徐志伟韩琴单晓伟何莉赵科伕安徽医科大学流行病与卫生统计学系合肥230032 安徽医科大学附属医院

目的探讨Toll样受体(toll-like receptor,TLR)4、可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(soluble TNF-related apoptosis-inducing ligand,sTRAIL)、白介素(interleukin,IL)-12、肿瘤坏死因子(tumornecrosis factor,TNF)-α在强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)发病中的作用。方法采用ELISA双抗体夹心法检测110例AS患者和60例正常对照的血清IL-12、TNF-α及sTRAIL水平,并采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测两组对象外周血单个核细胞TLR4基因水平,同时采用两点终点法测定C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、Wintnobe法检测红细胞沉降率(erythrocyte sedimentation rate,ESR),分析各指标与AS的关联。结果 AS患者TLR4 mRNA表达、血清sTRAIL含量均明显高于正常对照组,差异有统计学意义(P相关性无统计学意义(P>0.05)。AS患者组中,血清sTRAIL与CRP(r=0.445,P相关。结论 TLR4通路异常及sTRAIL水平增高可能在AS的发病及炎症反应中发挥一定的作用。

关键词：强直性脊柱炎 Toll样受体4 可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体肿瘤坏死因子α 白细胞介素12 人类白细胞抗原B27