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可可球二孢(Botryodiplodia theobromae)细胞壁降解酶对杧果果实致病作用

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果树学报 2011年第6期28卷 1054-1058页

作者：李敏高兆银胡美姣周铄杨冬平杨波易建学杨凤珍中国热带农业科学院环境与植物保护研究所海南省热带农业有害生物监测与控制重点实验室海南省热带作物病虫害生物防治工程技术研究中心海南大学环境与植物保护学院海南儋州571737

为明确可可球二孢(Botryodiplodia theobromae Pat.)产细胞壁降解酶在侵染杧果果实过程中的作用,研究了可可球二孢在离体培养和接种条件下分泌的5种细胞壁降解酶活性变化特点,以及可可球二孢(***)、胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeospor... 详细信息

为明确可可球二孢(Botryodiplodia theobromae Pat.)产细胞壁降解酶在侵染杧果果实过程中的作用,研究了可可球二孢在离体培养和接种条件下分泌的5种细胞壁降解酶活性变化特点,以及可可球二孢(***)、胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides Penz.)、杧果拟茎点霉(Phomopsis mangiferae Ahmad)和小穴壳菌(Dothiorella do-minicana *** Cif.)4种杧果采后主要蒂腐病菌分泌细胞壁降解酶的能力。结果表明,可可球二孢在离体培养条件下或接种杧果果实后均可产生多聚半乳糖醛酸酶(PG)、果胶甲基半乳糖醛酸酶(PMG)、多聚半乳糖醛酸反式消除酶(PGTE)、果胶甲基反式消除酶(PMTE),以及纤维素酶(Cx)。其中PG、PMG和Cx活性较高,PGTE和PMTE活性极低。在大量分泌的3种细胞壁降解酶中,PG和Cx活性高峰出现较早,PMG活性高峰出现较迟。可可球二孢的致病力显著高于胶孢炭疽菌、杧果拟茎点霉和小穴壳菌。其可可球二孢分泌果胶酶的能力也显著高于其他3种病菌。

关键词：杧果可可球二孢细胞壁降解酶致病力

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可可球二孢调色橡胶木的制备及性能研究

可可球二孢调色橡胶木的制备及性能研究

作者：赵博识北京林业大学

学位级别：硕士

木材变色普遍被认为是一种木材材性的缺陷,降低木材的经济价值。很少有学者利用微生物使木材变色,从而改变木材的装饰效果,实现木材变色的逆利用。相比于传统的以物理和化学过程为主的木材调色方法,生物调色方法能耗小、无污染、调色效... 详细信息

木材变色普遍被认为是一种木材材性的缺陷,降低木材的经济价值。很少有学者利用微生物使木材变色,从而改变木材的装饰效果,实现木材变色的逆利用。相比于传统的以物理和化学过程为主的木材调色方法,生物调色方法能耗小、无污染、调色效果自然多样,是一种绿色的木材加工方式。橡胶木(Hevea brasiliensis)蓝变是常见的变色现象,本文以常见的蓝变菌可可球二孢(Lasiodiplodia theobromae)为“染料”,制备可可球二孢调色橡胶木,并对其理化性能进行研究,拓宽木材生物加工的应用范围。本文利用改良察式培养基探究可可球二孢的适宜生长环境;探究在适宜液体察式培养基中可可球二孢对橡胶木表面性能的影响,以及在固体PDA培养基条件下可可球二孢对橡胶木物理力学性能的影响;初步探究了可可球二孢对橡胶木的调色机理。实验结果表明:可可球二孢的适宜生长环境为葡萄糖20 g/L、酵母膏9 g/L、p H值为4、氯化钾0.3 g/L、硫酸镁1.0 g/L、硫酸亚铁0.02 g/L以及琼脂15 g/L;可可球二孢在适宜察式培养基中的生长速度是PDA培养基中的1.5倍,其在察式培养基中分泌物呈点状或块状,分泌不均匀且生长后期易受杂菌污,PDA培养基中分泌物呈射线状向四周分泌,生长更加稳定;菌落在两种培养基条件下均能对橡胶木产生较好的装饰效果,在察式培养基中的颜色调节的效率较高,PDA培养基中的菌落生长状态稳定,调色效果均匀;可可球二孢菌落对橡胶木的物理力学性能整体影响不大;通过EDS分析、XRD分析和FTIR等实验方法,测定调色木材的相对结晶度变大,对纤维素、半纤维素有一定降解作用,对木质素的影响不大。可可球二孢能够对橡胶木产生较好的调色效果,可用于室内装饰材料、家具等木制品的生产制造,有较为广泛的应用前景。

关键词：可可球二孢橡胶木表面装饰物理力学性能调色机理

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蓝变木材基底可可球二孢菌丝复合材料的性能

木材科学与技术 2023年第1期37卷 61-67页

作者：林晓莉周海洋高振忠吕世豪孙瑾华南农业大学材料与能源学院广东广州510642

为了提高易蓝变木材的利用率,利用蓝变菌可可球二孢(Lasiodiplodia theobromae)和蓝变的欧洲赤松(Pinus sylvestris)、橡胶木(Hevea brasiliensis)碎料以及两者混合物制成的基底制备菌丝复合材料,并探讨含水率变化对菌丝复合材料性能的... 详细信息

为了提高易蓝变木材的利用率,利用蓝变菌可可球二孢(Lasiodiplodia theobromae)和蓝变的欧洲赤松(Pinus sylvestris)、橡胶木(Hevea brasiliensis)碎料以及两者混合物制成的基底制备菌丝复合材料,并探讨含水率变化对菌丝复合材料性能的影响。结果表明:培养14 d后,三种基底表面均被菌丝覆盖,颜色显著变黑。增加板坯含水率促进了菌丝复合材料内发生木质素再聚合和美拉德反应,提高了菌丝复合材料的弯曲强度。蓝变欧洲赤松基底、蓝变橡胶木基底以及混合基底菌丝复合材料的弯曲强度分别提高了64%、221%和74%。与蓝变欧洲赤松基底相比,蓝变橡胶木基底更适合可可球二孢菌丝的生长,因此橡胶木基菌丝复合材料的弯曲强度更高,可以达到ANSI A208.1-2016“Particleboard”对轻质刨花板的弯曲强度要求。菌丝表面的疏水蛋白使材料表面接触角增大,疏水性增加,而板坯含水率的提高对材料的疏水性和耐水性有削弱作用。

关键词：可可球二孢蓝变木材菌丝复合材料弯曲强度

海南省芒果可可球二孢对多菌灵的敏感性及菌株适合度研究

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农药学学报 2017年第3期19卷 298-306页

作者：赵磊杨叶王萌贺瑞陈绵才海南大学热带农林学院海口570228 海南省农业科学院植物保护研究所海南省植物病虫害防控重点实验室海口571100

针对中国海南地区芒果蒂腐病致病菌可可球二孢对多菌灵的抗性水平及菌株的适合度进行了研究。采用区分剂量法,测定了2016年从海南省芒果园采集、分离的90株可可球二孢对多菌灵的敏感性,并对抗性及敏感菌株在菌丝生长、致病力、渗透压及... 详细信息

针对中国海南地区芒果蒂腐病致病菌可可球二孢对多菌灵的抗性水平及菌株的适合度进行了研究。采用区分剂量法,测定了2016年从海南省芒果园采集、分离的90株可可球二孢对多菌灵的敏感性,并对抗性及敏感菌株在菌丝生长、致病力、渗透压及相对渗率等方面进行了比较。结果表明:海南地区芒果可可球二孢对多菌灵的抗性频率为65.56%,且以高抗菌株为主(8个中抗菌株,51个高抗菌株);该病菌对芒果危害甚大,其中具强致病力的菌株达65株,占72.22%。高抗菌株的菌丝生长优于敏感菌株,存在极显著差异(P可可球二孢对多菌灵的抗性水平较高,且抗性菌株适合度高于敏感菌株,易形成优势群体。

关键词：芒果蒂腐病可可球二孢多菌灵抗药性适合度

海南芒果可可球二孢的致病力及其对多菌灵抗性

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植物保护 2019年第3期45卷 174-178页

作者：曾耿狄符可芯刘乐余东王靖冼欣唯杨叶海南大学热带农林学院海口570228

从海南5个芒果主产区采集分离芒果蒂腐病菌可可球二孢菌株,采用室内人工接种的方法对110个可可球二孢菌株进行致病力测定,采用区分剂量法和菌丝生长速率法测定其中106个菌株对多菌灵的抗性。结果表明:芒果蒂腐病自然发病率29.37%;人工... 详细信息

从海南5个芒果主产区采集分离芒果蒂腐病菌可可球二孢菌株,采用室内人工接种的方法对110个可可球二孢菌株进行致病力测定,采用区分剂量法和菌丝生长速率法测定其中106个菌株对多菌灵的抗性。结果表明:芒果蒂腐病自然发病率29.37%;人工接种的发病率100.00%,110株可可球二孢菌株中强致病力、中等致病力及弱致病力菌株分别占64.55%、25.45%和10.00%;在106株可可球二孢菌株中,抗性菌株发生频率为52.83%,其中高抗菌株可在含100 mg/L多菌灵培养基上生长,发生频率为45.28%,中抗菌株在含100 mg/L多菌灵培养基上不能正常生长,抗性频率为7.55%;没有发现低抗菌株。多菌灵对可可球二孢田间分离菌株EC_(50)的频率分布为不连续分布,研究结果表明海南地区危害芒果的可可球二孢对多菌灵抗性非常严重。

关键词：芒果可可球二孢致病力多菌灵抗药性

海南芒果蒂腐病可可球二孢抗药性及遗传多样性分析

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热带作物学报 2016年第7期37卷 1363-1369页

作者：王萌陈小莉赵磊卜小莉王莉巧曾宇松杨叶海南大学环境与植物保护学院海南海口570228 海南省农业科学院植物保护研究所海南省植物病虫害防控重点实验室海南海口571100

探索海南芒果蒂腐可可球二孢（Botryodiplodia theobromae）的抗药性、培养特性及遗传多样性的关系。以区分剂量法检测30个菌株对10种杀菌剂的敏感性,采用RAPD技术对菌株的遗传多样性进行分析。研究表明,芒果可可球二孢菌株对多菌灵、... 详细信息

探索海南芒果蒂腐可可球二孢（Botryodiplodia theobromae）的抗药性、培养特性及遗传多样性的关系。以区分剂量法检测30个菌株对10种杀菌剂的敏感性,采用RAPD技术对菌株的遗传多样性进行分析。研究表明,芒果可可球二孢菌株对多菌灵、甲基硫菌灵、醚菌酯、嘧菌酯、吡唑醚菌酯、苯醚甲环唑和咪鲜胺锰盐7种杀菌剂产生了抗药性,抗性菌株比率（MR和HR）分别为66.67%、70.00%、90.00%、76.67%、53.33%、20.00%和16.67%。供试菌株的培养特性存在明显差异。应用6个随机引物对共扩增出64条带,DNA多态率高达90.6%,遗传距离在0.58-0.86,芒果蒂腐病菌遗传分化较大。在遗传距离为0.65时,可分为两个群,群Ⅰ分成3个类群,共有26个菌株,群Ⅱ分成2个类群。聚合类型与菌株的抗药性表现一致。菌株的致死温度与聚合类型、抗药性有一定的关联。

关键词：芒果可可球二孢抗药性 RAPD分析培养特性

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海南芒果可可球二孢对多菌灵抗性机制的研究

海南芒果可可球二孢对多菌灵抗性机制的研究

作者：曾耿狄海南大学

学位级别：硕士

芒果（Mangfera indica L.）是热带地区重要的经济作物,海南省是我国芒果的主产区。苯并咪唑类杀菌剂由于作用位点单一的特点,加上这类药在海南施用频率高很容易产生抗药性。在前期研究基础上选取3株MBC-S、4株MBC-MR和5株MBC-HR芒果可... 详细信息

芒果（Mangfera indica L.）是热带地区重要的经济作物,海南省是我国芒果的主产区。苯并咪唑类杀菌剂由于作用位点单一的特点,加上这类药在海南施用频率高很容易产生抗药性。在前期研究基础上选取3株MBC-S、4株MBC-MR和5株MBC-HR芒果可可球二孢分别进行菌株抗性的遗传稳定性、对温度的敏感性、高渗溶液的敏感、菌丝电导率及相关酶活性检测,旨在探讨菌株可能的抗性特性及抗性生化机制。克隆并分析比对抗感多菌灵芒果可可球二孢菌株的β-微管蛋白基因序列;及β-微管蛋白基因表达量与多菌灵敏感性的关系,探讨抗药性产生的分子机制;根据MBC-HR和MBC-MR菌株中β-微管蛋白基因第198位和200位的密码子的点突变,根据ASO-PCR法设计了 PCR引物LYT-R/LYT-Z和YT-R1/YT-Z1尝试芒果可可球二孢对多菌灵的抗性快速检测技术。研究结果表明:1.12株抗感多菌灵芒果可可球二孢的抗性可以稳定遗传,高温及低温均会抑制菌株的生长,抗性菌株存在低温敏感性。12株抗感多菌灵可可球二孢菌株菌丝的生长随着葡萄糖和NaCl的浓度增加先促进后抑制,MBC-S敏感菌株高盐环境比MBC-HR和MBC-MR菌株更敏感。2.12株抗感多菌灵芒果可可球二孢的相对电导率呈现一个先上升后趋于平缓的趋势。50 mg/L的多菌灵药剂处理后,敏感菌株的相对电导率明显提高且始终大于抗性菌株,也说明敏感菌株对多菌灵敏感,受药剂的破坏细胞内物质渗漏严重。测定抗感多菌灵芒果可可球二孢菌丝中甘油的含量,结果表明抗感菌株菌丝中甘油含量没有差异。3.可可球二孢抗、感多菌灵菌株的菌丝内的CAT酶活性存在明显差异,抗性菌株中的酶活性较高;高抗菌株CAT酶活性约是敏感菌株的4倍。抗性菌株中的GST酶的活性也比敏感菌高;抗感菌株的POD酶活性没有显著性差异。4.通过克隆抗感多菌灵可可球二孢菌株的β-微管蛋白的基因序列的比对分析,发现MBC-HR高抗菌株第198氨基酸的密码子谷氨酸（GAG（Glu））突变为丙氨酸GCG（Ala）,发生碱基突变,MBC-MR中抗菌株第200位氨基酸密码子200位TTC（Phe）变为酪氨酸TAC（Tyr）。β-微管蛋白基因序列的cDNA全长行447个氨基酸,MBC-HR高抗菌株β-微管蛋白的基因相对表达量大于MBC-MR中抗菌株大于MBC-S敏感菌株。***-PCR法设计了 PCR引物LYT-R/LYT-Z能使MBC-MR中抗菌株扩增出700 bp左右的条带,其他菌株不能不增出来。而YT-R1/YT-Z1能使MBC-HR高抗菌株扩增出700 bp左右的条带,其他菌株不能不增出来。结论:芒果蒂腐病菌可可球二孢对多菌灵产生抗药性的田间菌株β-微管蛋白基因发生点突变、抗性菌株具有稳定性及高适合度,抗性风险高。除了基因突变,菌株在细胞膜透性及酶活性均与抗性产生机制的有关。

关键词：芒果可可球二孢多菌灵 β-微管蛋白基因抗性机制

芒果采后蒂腐菌可可球二孢毒性分化与遗传多样性分析

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芒果采后蒂腐菌可可球二孢毒性分化与遗传多样性分析

作者：陈小莉海南大学

学位级别：硕士

芒果(.Mangifera indica L.)是一种著名的热带水果,被誉为热带水果之王。中国是芒果主产国之一,芒果主要分布在海南、广东、广西、云南、四川、福建和台湾。芒果蒂腐病是芒果采后最为严重的病害之一,主要危害芒果果实,发病部位最初在果... 详细信息

芒果(.Mangifera indica L.)是一种著名的热带水果,被誉为热带水果之王。中国是芒果主产国之一,芒果主要分布在海南、广东、广西、云南、四川、福建和台湾。芒果蒂腐病是芒果采后最为严重的病害之一,主要危害芒果果实,发病部位最初在果蒂周围先出现褐色斑点,然后病斑迅速扩展,最后整个芒果出现褐变并发出酸臭味,导致芒果在贮藏、运输期间腐烂并造成严重的经济损失。目前,芒果蒂腐病的研究远远滞后于芒果炭疽病!这与芒果蒂腐在芒果采后保鲜中的重要影响所不符,而缺乏重视与缺少研究技术也导致了芒果蒂腐病害危害加剧及病原菌抗药性的产生。因此,本研究从2013至2014年期间,对海南三亚、乐东、东方和昌江等海南芒果主产区的芒果蒂腐病菌进行采集分离,重点在于对芒果蒂腐菌可可球二孢(Botryodiplodia theobromae Pat.)的毒性分化、抗药性差异及遗传多样性分析,通过形态学和药剂学以及分子生物学方法寻找可可球二孢病菌毒性分化、抗药性及遗传分化之间的关系,以期更深入地了解病菌自然群体的遗传多样性和遗传分化情况;另外,为评价目前海南主要芒果品种对于蒂腐病菌株入侵、定植的风险,为芒果蒂腐菌的流行动态预测提供依据,也为芒果大田病害防治及采后的防腐保鲜选择高效的杀菌剂提供了依据。主要研究结果如下：1.从海南省不同地区不同芒果品种的自然发病的病果中分离并鉴定出大量的芒果蒂腐菌可可球二孢、拟茎点、炭疽等病菌共132株,其中,可可球二孢B. theobromae菌株124株,占93.9%。研究表明,芒果蒂腐可由多种病菌侵染所致,但海南芒果蒂腐病主要由可可球二孢B. theobromae引起。2.根据对124株可可球二孢B. theobromae菌株的致病力测定结果,选出5个致病力较高的菌株：SYTN31605、SYTN21610、LDJH21611、LDJH21608、LDYM11601,针对海南常见的11个芒果品种进行抗病性测定。结果表明：除‘白象牙’1个品种为高感(HS)外,其余10个品种均表现为感病(S),本次测定并未发现对供试5个菌株均表现出抗性的品种3.生物学特性测定结果发现：30个芒果蒂腐可可球二孢B. theobromae菌株生长的最适培养基为PDA,其次是高氏培养基,麦芽汁培养基不利于菌丝生长,最佳培养条件是12h光照,12h黑暗的培养方式,最适pH为6-8,孢子萌发最适温度是30℃,4h,菌丝生长的最适宜温度是30℃,菌丝的致死温度是65℃,10min。4.13种杀菌剂对62个可可球二孢B. theobromae菌株进行室内毒力测定,以10m/L为鉴别剂量进行抗药性初步检测,供试菌株对多种杀菌剂表现出抗药性,对多菌灵和甲基托布津的抗性频率分别为87.1%和83.9%,对嘧菌酯和醚菌酯的抗性频率分别为79.0%和87.1%,对吡唑醚菌酯、苯醚甲环唑、戊唑醇、丙环唑、咪鲜胺、异菌脲、咯菌腈、百菌清、代森锰锌的抗性频率分别为82.3%、83.9%、87.1%、83.9%、54.8%、19.4%、56.5、1.6%、0、83.9%、87.1%,对从中筛选出表现出较高抗性的6种杀菌剂针对15株可可球二孢菌株进行精密毒力测定。研究表明：用于防治芒果蒂腐可可球二孢菌株的最佳药剂是咯菌腈,其次是异菌脲,6种药剂中药性效果最差的是多菌灵,EC50值范围大小为3.23-33113.11mg/L,平均抗性水平2479.16,多菌灵与甲基硫菌灵存在明显的交叉抗性,表明海南大多数地区的芒果蒂腐病菌可可球二孢已对苯并咪唑类杀菌剂和甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂产生极大的抗性。5.利用分子标记RAPD方法对30个芒果蒂腐可可球二孢B. theobromae病菌遗传多样性分析,针对30个菌株,从21条引物中筛选出6条随机引物,根据6条引物扩增的结果,一共扩增出64条谱带,集中在250-2500bp,多态性条带58条,DNA多态率高达90.6%,遗传相似性系数在0.58-0.86之间,表明这30个芒果蒂腐病菌遗传分化大,群体之间的结构多样性丰富,在相似系数为0.594时,所有菌株可聚合为2大类,群I有26个菌株,占全部菌株的86.7%,群II有4个菌株,聚合类型与菌株的地理来源不一致,抗药性结果结合RAPD结果分析发现,抗药性强的菌株一般与其他抗药性低的菌株亲缘关系较远,推测这可能是遗传物质基础的改变才导致了抗药性的发生。

关键词：芒果芒果蒂腐菌可可球二孢毒性分化遗传多样性 RAPD

芒果可可球二孢对多菌灵抗性检测及抗性机制初步探讨

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芒果可可球二孢对多菌灵抗性检测及抗性机制初步探讨

作者：赵磊海南大学

学位级别：硕士

芒果(Martgiferci indica L.)为著名热带水果。中国是芒果主要生产国,每年产值达数百万吨,海南是我国种植面积最大的芒果产区。芒果蒂腐病是海南第二大采后病害,可造成贮藏与运输中的极大损耗。可可球二孢(Botryodiplodia theobromae)... 详细信息

芒果(Martgiferci indica L.)为著名热带水果。中国是芒果主要生产国,每年产值达数百万吨,海南是我国种植面积最大的芒果产区。芒果蒂腐病是海南第二大采后病害,可造成贮藏与运输中的极大损耗。可可球二孢(Botryodiplodia theobromae)是引起芒果蒂腐病的主要真菌之一,该菌具有潜伏侵染特性,病菌在田间就侵入芒果。芒果种植期间大量频繁使用杀菌剂防治各种病害,使海南芒果可可球二孢(***)对多菌灵等杀菌剂存在产生抗性的风险。为了确定海南芒果可可球二孢对多菌灵的抗性现状、抗性菌的特性及产生抗性的生化机制,从以下几方面开展研究。于2016年从海南16个芒果种植区采集芒果,大量分离及保存芒果蒂腐病菌可可球二孢菌株;检测了芒果可可球二孢对多菌灵的抗性水平,通过抗敏菌株的生物学特性、适合度、渗透压、菌丝电渗率及酶活力之间的差异探讨了可能的抗性机制。研究结果表明:1.从海南各芒果产区共采回522个芒果,发生芒果蒂腐病的病果137个,发病率为26.2 %;共分离得到共259个菌株,通过形态及分子鉴定有139株为可可球二孢,检出率为53.7%,确证可可球二孢是海南芒果蒂腐病的主要致病菌。2.针对90个菌株进行致病力水平测定,发现强致病力菌株65株,占72.22%,中致病力菌株14株,占15.56%,弱致病力和无致病性菌株为11株,占12.22%。3.病菌对多菌灵的抗药性检测结果显示,90个菌株中有51个高抗菌株,8个中抗菌株,31个敏感菌株;抗性菌株比率为65.56%,高抗性菌株比率达56.67%。测定了部分菌株的EC50值,敏感菌株EC50范围在0.03mg/mL左右,而高抗性水平菌株,在多菌灵高达2000 mg/mL时仍然能正常生长,抗性倍数可达数万倍;可可球二孢菌株的孢子对多菌灵有极高抗性。抗性菌株对多菌灵的抗性具有遗传稳定性,连续转代培养15代后仍能保持高水平抗性。4.比较抗性不同的菌株之间的生物学特性及生理适合度,发现高抗性的菌株菌丝生长速度比敏感和中等抗性的菌株快,不同抗性菌株之间致病力和对温度的敏感性并未有明显差异。5.研究表明,抗性菌株对葡萄糖和氯化钠的较高渗透压比敏感菌株更为敏感,表明敏感菌株的渗透压调节能力要高于抗性菌株。敏感菌株的相对渗率高于抗性菌株,显示敏感菌株的细胞膜透性大,胞内电解质渗出较多,而抗性菌株较敏感菌株的细胞膜透性小,这可能与菌株抗药性有关。6.实验中抗敏菌株体内CAT与GST两种酶的活性无显著差异。

关键词：芒果蒂腐病可可球二孢抗药性检测抗药性机理