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变性高效液相色谱分析检测人类糖皮质激素受体基因变异

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北京大学学报（医学版） 2003年第4期35卷 394-398页

作者：叶建伟丁洁陈彦黄建萍杨霁云北京大学第一医院儿科北京100034

目的 :以变性高效液相色谱分析 (DHPLC)检测糖皮质激素受体基因 (NR3C1)在中国人群中的变异情况。方法 :提取 6 4例中国人基因组DNA ,参照文献所报道的引物序列 ,PCR方法扩增糖皮质激素受体基因编码区(2～ 9α外显子 )及其邻近的部分内... 详细信息

目的 :以变性高效液相色谱分析 (DHPLC)检测糖皮质激素受体基因 (NR3C1)在中国人群中的变异情况。方法 :提取 6 4例中国人基因组DNA ,参照文献所报道的引物序列 ,PCR方法扩增糖皮质激素受体基因编码区(2～ 9α外显子 )及其邻近的部分内含子序列 ,琼脂糖凝胶电泳鉴定产物后 ,以DHPLC检测PCR产物 ,对洗脱曲线异常者进行DNA测序。结果 :经DHPLC分析和DNA测序证实 ,研究人群的NR3C1基因中存在 8处变异 ,5处为新发现 ;其中有 2组变异呈紧密连锁的单倍型 ,均为首次报道 ,它们在人群中的基因型频率达 3.1%与 14 .1% ;另一处变异出现频率相对较低。结论 :成功地建立了以DHPLC检测NR3C1基因变异的方法及技术参数 ,证实在中国人群中NR3C1基因存在变异 ,其中 2种频率较高的单倍型为新发现。

关键词：变性高效液相色谱分析检测人类糖皮质激素受体基因变异

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变性高效液相色谱分析的技术特征及其应用

肾脏病与透析肾移植杂志 2003年第2期12卷 197-200页

作者：叶建伟丁洁北京大学第一医院儿科北京100034

近年来建立并得以迅速发展的变性高效液相色谱分析(denaturing high-performance liquid chromatograply,DHPLG）可自动检测单碱基替代及小片段核苷酸的插入或缺失，已被证实际应用过程中注意事项作一简述。

关键词：变性高效液相色谱分析技术特征临床应用基因检测反应体系

单链构象多态性分析和变性高效液相色谱分析技术检测hMLH1和hMSH2基因突变的比较

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中华胃肠外科杂志 2008年第5期11卷 462-464页

作者：魏广辉赵博王振军首都医科大学附属北京朝阳医院外科 100020

目的比较单链构象多态性分析（SSCP）和变性高效液相色谱分析技术（DHPLC）应用于遗传性非息肉病性结直肠癌（HNPCC）分子遗传学诊断的灵敏性和特异性。方法应用PCR-SSCP和DHPLC方法分析经测序验证有序列变异的7个家系的所有成员的相应... 详细信息

目的比较单链构象多态性分析（SSCP）和变性高效液相色谱分析技术（DHPLC）应用于遗传性非息肉病性结直肠癌（HNPCC）分子遗传学诊断的灵敏性和特异性。方法应用PCR-SSCP和DHPLC方法分析经测序验证有序列变异的7个家系的所有成员的相应PCR扩增产物，分别计算SSCP和DHPLC的灵敏度和特异度。结果应用SSCP对hMLH1和hMSH2进行基因突变筛查的敏感性和特异性分别为51．6％和66．6％；而应用DHPLC进行基因突变筛查的敏感性和特异性则分别为100％和93．3％；两种方法进行基因突变筛查的结果差异有统计学意义（P〈0．05）。结论DHPLC进行基因突变筛查的敏感性和特异性均高于SSCP，是理想的分子遗传学检测方法。

关键词：变性高效液相色谱分析多态现象单链构象 MLH1 MSH2 突变分析结直肠肿瘤遗传性非息肉性

高血压定位区域犬尿氨酸酶基因多态性与高血压病相关

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中华心血管病杂志 2005年第7期33卷 588-591页

作者：张怡张奎星何鑫袁文涛王谷亮茅守玉高平进黄薇朱鼎良上海第二医科大学附属瑞金医院上海市高血压研究所医学基因组学国家重点实验室上海市血管生物学重点实验室现在山东省立医院心内科200025 国家人类基因组南方研究中心

目的检测中国汉族人群高血压病定位区域2q14-q23内犬尿氨酸酶基因(kynureninase,KYNU)调控区和编码区的单核苷酸多态性(singlenucleotidepolymorphism,SNP)及与高血压病的相关性。方法采用直接测序法检测KYNU基因启动子区和外显子序列中... 详细信息

目的检测中国汉族人群高血压病定位区域2q14-q23内犬尿氨酸酶基因(kynureninase,KYNU)调控区和编码区的单核苷酸多态性(singlenucleotidepolymorphism,SNP)及与高血压病的相关性。方法采用直接测序法检测KYNU基因启动子区和外显子序列中的SNP。应用变性高效液相色谱分析(DHPLC)技术对位于编码区且改变氨基酸编码的Lys412Glu(A/G)多态在456例高血压病患者和430例正常对照者中进行分型和关联研究。结果共检测得KYNU基因的16个SNP,其中启动子区6个,编码区2个(均改变氨基酸编码)。Lys412Glu多态基因型分布(χ2=6·693,P=0·035)和等位基因频率分布(χ2=4·188,P=0·041)在高血压病组和正常对照组间差异均有统计学意义,Lys412Glu等位基因频率分布在男性高血压病组和正常对照组间差异有统计学意义(χ2=4·424,P=0·035)。结论中国汉族高血压病定位区域内KYNU基因Lys412Glu多态可能与高血压病相关。

关键词：高血压基因多态性,单核苷酸高血压病患者酶基因多态性犬尿氨酸相关性变性高效液相色谱分析中国汉族人群基因启动子区

应用变性高效液相色谱检测马凡综合征原纤维蛋白1突变

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中华检验医学杂志 2009年第5期32卷 531-534页

作者：伍严安朱爱兰黄肖利陈喜军黄毅陈同福建医科大学省立临床医学院福建省立医院检验科福州350001 福建医科大学省立临床医学院福建省立医院心外科福州350001

目的应用变性高效液相色谱（DHPLC）结合DNA测序法检测分析马凡综合征（MFS）原纤维蛋白1（fibrillin-1）基因（FBN1）突变状况。方法提取22例MFS患者全血DNA，PCR增扩FBN1的65个外显子，用DHPLC筛查DNA突变，对DHPLC图形异常的PCR产物... 详细信息

目的应用变性高效液相色谱（DHPLC）结合DNA测序法检测分析马凡综合征（MFS）原纤维蛋白1（fibrillin-1）基因（FBN1）突变状况。方法提取22例MFS患者全血DNA，PCR增扩FBN1的65个外显子，用DHPLC筛查DNA突变，对DHPLC图形异常的PCR产物用DNA测序分析突变分布。结果在9例MFS患者FBN1中发现10种突变。其中有4种错义突变[5015G〉C（C1672S）、5309G〉A（C1770Y）、7241G〉A（A2414G）与7769G〉A（C2590Y）]，4种无义突变[3295G〉T（E1099X）、4307insTCGT（G1441X）、4621C〉T（R1541X）与8080C〉T（A2694X）]，2种剪切位点突变（IVS29＋4A〉T与IVS50＋1G〉A）。结论DHPLC结合DNA测序法是一种快速有效的FBN1突变检测法，可用于MFS的基因诊断。

关键词：马凡综合征原纤维蛋白-1 基因突变变性高效液相色谱分析

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小儿泌尿系统疾病诊治进展

中国实用儿科杂志 2006年第5期21卷 331-333页

作者：姚勇杨霁云北京大学第一医院儿科北京100034

现将2005年我国小儿泌尿系统疾病诊治进展总结如下。1原发性肾病综合征（NS）有关激素耐药的研究受到临床关注，中南大学湘雅二院观察糖皮质激索受体（GR）2种亚型GRα和GRβ在外周血单个核细胞及肾组织中的表达，发现耐药者GRβ表达显... 详细信息

现将2005年我国小儿泌尿系统疾病诊治进展总结如下。1原发性肾病综合征（NS）有关激素耐药的研究受到临床关注，中南大学湘雅二院观察糖皮质激索受体（GR）2种亚型GRα和GRβ在外周血单个核细胞及肾组织中的表达，发现耐药者GRβ表达显著高于激素敏感者，过表达的GRβ可导致GRα核转位能力下降，影响糖皮质激素效应的发挥，从而导致耐药。该院还成功地构建了稳定高表达和低表达GRβ的肾小球系膜细胞株，在此株上观察到高表达者对地塞米松敏感性降低也证实其上述观点。有关糖皮质激素受体基因（NR3C1）多态性与激素效应之间的关系，北京大学第一医院用变性高效液相色谱分析耐药者、敏感者及参照人群NR3C1的多态性，发现了12种多态性，有3组成紧密连锁的单倍型，其中2种为新发现者，且他们在耐药者的基因型频率（约1／4）明显高于敏感者（约1／10），故认为NR3C1多态性可能与部分耐药有关。南京医科大学第二附属医院从细胞信号转导及核转录因子水平探讨Ns激素耐药问题。他们以免疫组化法检测肾组织激活蛋白-1（AP-1）、转化生长因子β（TGF-β），发现耐药者肾组织中二指标无论在肾小球还是在肾小管均明显高于敏感者，认为耐药与肾内AP-1和TGF-β表达增强有关，此外还发现二者之表达水平与肾小管间质病理损害相关。中南大学湘雅二院研究NS肾组织中转录共激活因子（coactivator）P300，发现耐药者应用激素后肾组织中P300蛋白的表达明显低于敏感者，提示P300表达下降是导致肾皮质激素耐药的重要原因之一。

关键词：泌尿系统疾病诊治进展肾病综合征(NS) 糖皮质激素受体基因小儿变性高效液相色谱分析敏感性降低外周血单个核细胞小管间质病理损害激素耐药

汉族马凡综合征患者基因突变及临床特征的研究

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汉族马凡综合征患者基因突变及临床特征的研究

作者：王雪涛福建医科大学

学位级别：硕士

目的对汉族马凡综合征（Marfan syndrome，MFS）患者的原纤维蛋白－1（fibrillin-1，FBN1）基因，转化生长因子受体1（Transforming Growth Factor BetaReceptor Type Ⅰ，TGFBR1）和转化生长因子受体2（Transforming Growth FactorBeta Receptor Type Ⅱ，TGFBR2）进行基因突变筛查，明确相应MFS患者的发病原因，并研究其临床特征。方法提取29例汉族MFS患者的基因组DNA，PCR扩增FBN1的65个外显子，TGFBR1的9个外显子，TGFBR2的7个外显子，应用DHPLC-DNA测序方法检测基因突变，对未发现突变的病人，应用多重连接探针扩增技术(MultiplexLigation-dependent Probe Amplification;MLPA)检测FBN1和TGFBR2是否存在缺失突变。结果1、在29例MFS患者中发现12种FBN1基因突变，其中有7种错义突变，2种无义突变，2种剪切位点突变，1种移码突变。12种突变中，有8种为新发现的突变，分别为2359A>T (S787C)、3380G>T (G1127V)、4151T>C (M1384T)、4244G>A(C1415Y)、6071G>T (C2024F)、IVS2+1G>T、IVS37+5G>A和7970C>G+7971delC;在FBN1中发现11种多态性，其中6种为新发现的多态性：IVS43-30delCCT、IVS45-63G>T、IVS47-28C>T、IVS52+127T>C、IVS52-23G>C、IVS57+63A>C。2、TGFBR1发现4种多态性，其中3种为新发的多态性：IVS6+109A>C、1032T>C(N344N)和1216T>C(L406L);TGFBR2发现4个多态性均已报道。3.、MLPA未检测出FBN1和TGFBR2的缺失突变。4、本研究小组2004年至今共发现的25例汉族MFS FBN1突变患者。临床表现的比较分析显示：本组MFS患者骨骼系统主要标准发生率和晶状体异位发生率低于西方MFS患者（12%vs32%;P <0.05和12%vs54%;P<0.01），升主动脉夹层发生率高于西方MFS患者(48%vs14%;p<0.01)。结论1、DHPLC-DNA测序是一种快速有效的FBN1突变检测法，可用于MFS的基因诊断;2、FBN1基因突变可能是12例MFS患者的致病因素;3、汉族MFS患者与西方MFS患者的临床表现存在某些差异。

关键词：马凡综合征原纤维蛋白-1 基因突变变性高效液相色谱分析多重连接探针扩增

LHON家系线粒体DNA突变与发病和预后的关系

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LHON家系线粒体DNA突变与发病和预后的关系

作者：杜利平郑州大学

学位级别：硕士

目的：在家系调查的基础上，运用PCR、限制性酶切、dHPLC分析和DNA测序等方法检测mtDNA突变及突变率，探讨mtDNA突变与LHON发病、预后的关系。材料方法：收集来自中国河南的7个LHON家系(包括母系成员101人)，进行家系调查，抽取先证... 详细信息

目的：在家系调查的基础上，运用PCR、限制性酶切、dHPLC分析和DNA测序等方法检测mtDNA突变及突变率，探讨mtDNA突变与LHON发病、预后的关系。材料方法：收集来自中国河南的7个LHON家系(包括母系成员101人)，进行家系调查，抽取先证者外周静脉血样2.00～4.00 ml。蛋白酶K裂解和酚—氯仿抽提法提取基因组DNA，基因测序确定各家系LHON线粒体突变位点。构建携带正常位点线粒体基因片段和突变位点基因片段的重组质粒，包括正常及突变的3460和11778位点的基因片段，培养4种携带重组质粒的细菌克隆。分别用携带同一位点的正常和突变基因片段的质粒，混合成不同比例，PCR扩增，应用限制性内切酶酶切后，采用dHPLC 50℃非变性模式进行梯度洗脱，构建各个峰线下百分比面积的比值与mtDNA突变率的拟合曲线。在此基础上，对母系成员及家系内对照目的基因片段进行PCR扩增，得到每一个样本的线粒体突变率。SPSS统计软件分析线粒体突变率与LHON的外显率、视力之间的关系。结果： 1．7个临床确诊的LHON家系中，5个携带点突变G11778A，1个携带点突变G3460A，另一个家系不携带G3460A、G11778A和T14484C三个突变中的任何一个。

关键词： Leber遗传性视神经病变线粒体突变率外显性变性高效液相色谱分析

韧带样型纤维瘤病Wnt通路中APC/β-catenin基因异常

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中国癌症杂志 2006年第10期16卷 859-863页

作者：杨吉龙王坚周晓燕侯英勇朱雄增复旦大学附属肿瘤医院病理科复旦大学上海医学院肿瘤学系上海200032 复旦大学附属中山医院病理科上海200032

背景与目的:APC和β-caten in基因作为W nt通路上重要的成员,其异常在肿瘤的发生、发展过程中起着重要作用。本研究分析了韧带样型纤维瘤病中APC和-βcaten in基因突变,探讨W nt通路中APC/β-caten in基因异常在肿瘤发生中的作用。方法... 详细信息

背景与目的:APC和β-caten in基因作为W nt通路上重要的成员,其异常在肿瘤的发生、发展过程中起着重要作用。本研究分析了韧带样型纤维瘤病中APC和-βcaten in基因突变,探讨W nt通路中APC/β-caten in基因异常在肿瘤发生中的作用。方法:采用PCR-DHPLC-Sequence的方法分析韧带样型纤维瘤病中APC和-βcaten in基因的突变,免疫组织化学EnV ision+两步法检测β-caten in、cyc linD1和c-myc蛋白的表达。结果:APC基因发生碱基置换突变,均为体系突变,突变率为26.1%(18/69),突变不产生截短APC蛋白。β-caten in基因发生碱基转换,突变率为18.8%(13/69),导致第3外显子的codon41处苏氨酸磷酸化位点转变为丙氨酸。-βcaten in蛋白异常表达阳性率为47.8%(33/69),在APC、β-caten in基因突变阳性和阴性病例间,其异常表达阳性率没有显著差异。β-caten in异常表达阳性病例的c-myc蛋白阳性率(69.7%,23/33)显著高于阴性病例的c-myc阳性率(22.2%,8/36),两者之间有正相关关系(Pearson's r=0.477),而cyc linD1的表达没有显示出这种相关性和差异。结论:韧带样型纤维瘤病中APC、β-caten in基因存在体系突变,β-caten in蛋白存在异常表达,可能引起c-myc表达增加。韧带样型纤维瘤病中W nt通路存在异常,可能在肿瘤发生中起重要作用。

关键词：韧带样型纤维瘤病 APC基因 β-catenin 基因变性高效液相色谱分析