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乙型肝炎病毒X蛋白反式激活基因XTP8的克隆

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世界华人消化杂志 2003年第12期11卷 1883-1888页

作者：王春花郎振为成军刘妍王建军杨倩纪冬党晓燕中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心首都医科大学佑安医院病理科北京市100054

目的:应用抑制性消减杂交技术筛选乙型肝炎病毒 X 蛋白(HBxAg)反式激活基因差异表达的 cDNA,克隆 HBxAg 反式激活相关靶基因.方法:以 HBxAg 表达质粒 pcDNA3.1(-)-X 转染 HepG2细胞,以空载体 pcDNA3.1(-)为对照;制备转染后的细胞裂解液... 详细信息

目的:应用抑制性消减杂交技术筛选乙型肝炎病毒 X 蛋白(HBxAg)反式激活基因差异表达的 cDNA,克隆 HBxAg 反式激活相关靶基因.方法:以 HBxAg 表达质粒 pcDNA3.1(-)-X 转染 HepG2细胞,以空载体 pcDNA3.1(-)为对照;制备转染后的细胞裂解液,提取 mRNA 并逆转录为 cDNA,经 RsaI 酶切后,将实验组 cDNA 分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组 cDNA 进行两次消减杂交及两次抑制性 PCR,将产物与 T/A 载体连接,构建 cDNA 消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆 PCR 扩增后进行测序及同源性分析,发现其中之一为未知基因片段,与GenBank 中注册的已知功能基因序列没有同源性.通过序列同源性搜索比对,电子拼接成功,根据基因起始密码子的Kozak 规则和终止密码子下游保守的多聚腺苷酸信号序列,初步确定新型基因序列.从转染了 pcDNA3.1(-)的 HepG2细胞提取总 RNA,以 RT-PCR 技术扩增获得该新基因的全长序列,并测序加以证实.结果:发现新基因,命名为 XTP8,在 GenBank 中注册,注册号为 ***8基因的编码序列全长为1590个核苷酸(nt),编码产物由530个氨基酸残基(aa)组成.结论:应用抑制性消减杂交技术成功筛选与克隆 HBxAg 反式激活新型靶基因 XTP8,为进一步阐明 HBxAg 反式调节作用及其在 HBV 感染中的分子生物学机制提供理论依据和研究方法.

关键词：乙型肝炎病毒X蛋白反式激活基因 XTP8基因基因克隆抑制性消减杂交技术

抑制性消减杂交技术克隆乙型肝炎病毒前-S1蛋白反式激活蛋白2的反式激活基因

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中华传染病杂志 2008年第5期26卷 279-281页

作者：郭江成军张黎颖纪冬赵龙凤刘妍高学松北京地坛医院传染病研究所 100011 山西医科大学第一临床医学院

HBV为带包膜的嗜肝DNA病毒属，其基因组由松弛环状、部分双链DNA（rcDNA）组成。负链较长，约为3200个核苷酸（nt），其5’端共价结合病毒多聚酶；正链较短，长度可变，为1700～2800nt，在其5’端有寡聚核糖核苷酸帽。HBV基因组具有4个... 详细信息

HBV为带包膜的嗜肝DNA病毒属，其基因组由松弛环状、部分双链DNA（rcDNA）组成。负链较长，约为3200个核苷酸（nt），其5’端共价结合病毒多聚酶；正链较短，长度可变，为1700～2800nt，在其5’端有寡聚核糖核苷酸帽。HBV基因组具有4个开放读码框（ORF），通过不同的起始密码子（ATG）编码至少7个蛋白，包括3个表面抗原：

关键词：乙型肝炎病毒抑制性消减杂交技术反式激活基因蛋白反式激活蛋白2 嗜肝DNA病毒核糖核苷酸克隆

丙型肝炎病毒核心蛋白反式激活基因TAHCCP2的克隆

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世界华人消化杂志 2003年第12期11卷 1893-1896页

作者：王建军成军刘妍杨倩纪冬党晓燕王春花中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心

目的:筛选与克隆 HCV 核心蛋白反式激活新型靶基因.方法:以 HCV 核心蛋白表达质粒 pcDNA3.1(-)-core 转染HepG2细胞,以空载体 pcDNA3.1(-)为平行对照,提取 mRNA 并进行抑制性消减杂交(SSH)分析.对于所获基因片段序列分析表明,其中之一... 详细信息

目的:筛选与克隆 HCV 核心蛋白反式激活新型靶基因.方法:以 HCV 核心蛋白表达质粒 pcDNA3.1(-)-core 转染HepG2细胞,以空载体 pcDNA3.1(-)为平行对照,提取 mRNA 并进行抑制性消减杂交(SSH)分析.对于所获基因片段序列分析表明,其中之一为新型基因片段,从转染 pcDNA3.1(-)-core 的 HepG2细胞提取总 RNA,以逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术扩增获得该新基因的全长序列,并测序证实.结果:新基因命名为 TAHCCP2,编码序列全长为429个核苷酸(nt),编码产物由142个氨基酸残基(aa)组成,测序证实 TAHCCP2克隆正确.在 GenBank 中注册,注册号为 AY039043.结论:筛选与克隆 HCV 核心蛋白反式激活新型靶基因TAHCCP2,为进一步研究 HCV 核心蛋白反式激活作用的分子生物学机制和探索新型治疗技术奠定基础.

关键词：丙型肝炎病毒核心蛋白反式激活基因 TAHCCP2基因克隆逆转录多聚酶链反应分子生物学机制

乙型肝炎病毒X蛋白反式激活基因XTP12的克隆化

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世界华人消化杂志 2004年第11期12卷 2572-2575页

作者：宫嫚成军纪冬刘妍郭江王建军戴久增李筠中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心全军病毒性肝炎防治研究重点实验室北京市100039

目的:应用基因表达谱芯片技术及生物信息学技术筛选并克隆乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白反式激活新型靶基因,进一步阐明HBV感染相关性疾病的发病机制. 方法:以HBV X蛋白表达质粒pcDNA3.1(-)-X转染HepG2 细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为平行对照,... 详细信息

目的:应用基因表达谱芯片技术及生物信息学技术筛选并克隆乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白反式激活新型靶基因,进一步阐明HBV感染相关性疾病的发病机制. 方法:以HBV X蛋白表达质粒pcDNA3.1(-)-X转染HepG2 细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为平行对照,提取总RNA 进行逆转录,对产物行基因表达谱芯片分析.应用分子生物学技术,结合生物信息学技术,克隆HBV X反式激活作用的新的靶基因. 结果:对于所获基因片段序列分析表明,其中之一为新型基因片段.从HepG2细胞提取总RNA,以逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术扩增获得该新基因的全长序列,并测序证实,因其可以被X蛋白反式激活,故命名为X蛋白反式激活蛋白12(XTPl2),已在GenBank中注册,注册号: ***2TP1基因的编码序列全长为731个核苷酸(nt),编码产物由230个氨基酸残基(aa)组成. 结论:HBV X反式激活新靶基因被成功克隆,为进一步研究HBV X蛋白的分子生物学机制和探索新型治疗技术奠定基础.

关键词：乙型肝炎病毒 X蛋白反式激活基因 XTP12 克隆

乙型肝炎病毒X蛋白反式激活基因XTP7的克隆

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世界华人消化杂志 2003年第12期11卷 1878-1882页

作者：王春花成军郎振为刘妍王建军杨倩纪冬党晓燕中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心首都医科大学佑安医院病理科北京市100054

目的:应用抑制性消减杂交(SSH)技术筛选乙型肝炎病 X蛋白(HBxAg)反式激活基因差异表达的 cDNA,克隆 HBxAg反式激活相关靶基因.方法:以 HBxAg 表达质粒 pcDNA3.1(-)-X 转染 HepG2细胞,以空载体 pcDNA3.1(-)为对照;制备转染后的细胞裂解液... 详细信息

目的:应用抑制性消减杂交(SSH)技术筛选乙型肝炎病 X蛋白(HBxAg)反式激活基因差异表达的 cDNA,克隆 HBxAg反式激活相关靶基因.方法:以 HBxAg 表达质粒 pcDNA3.1(-)-X 转染 HepG2细胞,以空载体 pcDNA3.1(-)为对照;制备转染后的细胞裂解液,提取 mRNA 并逆转录为 cDNA,经 RsaI 酶切后,将实验组 cDNA 分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组 cDNA 进行两次杂交消减及两次抑制性 PCR,将产物与 T/A 载体连接,构建 cDNA 消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆 PCR 扩增后进行测序及同源性分析,发现其中之一为未知基因片段,与 GenBank中注册的已知功能基因序列没有同源性.通过序列同源性搜索比对,电子拼接成功,根据基因起始密码子的 Kozak 规则和终止密码子下游保守的多聚腺苷酸信号序列,初步确定新型基因序列.从转染了 pcDNA3.1(-)的 HepG2细胞提取总RNA,以 RT-PCR 技术扩增获得该新基因的全长序列,并测序加以证实.结果:发现新基因,命名为 XTP7,在 GenBank 中注册,注册号为 ***7基因的编码序列全长为588个核苷酸(nt),编码产物由196个氨基酸残基(aa)组成.结论:应用 SSH 成功筛选与克隆 HBxAg 反式激活新型靶基因 XTP7,为进一步阐明 HBxAg 反式调节作用及其在 HBV感染中的分子生物学机制提供理论依据和研究方法.

关键词：乙型肝炎病毒X蛋白反式激活基因 XTP7基因克隆分子生物学抑制性消减杂交技术

乙型肝炎病毒 X 蛋白反式激活基因6的克隆和鉴定

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世界华人消化杂志 2003年第12期11卷 1874-1877页

作者：纪冬成军刘妍王建军杨倩党晓燕王春花中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心

目的:乙型肝炎病毒(HBV)X 蛋白(HBxAg)是一种具有反式激活作用的病毒蛋白质.为了探索 HBxAg 蛋白反式激活作用的新的靶基因,利用抑制性消减杂交(SSH)技术对于表达和不表达 HBxAg 蛋白的 HepG2细胞进行研究,以期发现HBxAg 蛋白反式激活... 详细信息

目的:乙型肝炎病毒(HBV)X 蛋白(HBxAg)是一种具有反式激活作用的病毒蛋白质.为了探索 HBxAg 蛋白反式激活作用的新的靶基因,利用抑制性消减杂交(SSH)技术对于表达和不表达 HBxAg 蛋白的 HepG2细胞进行研究,以期发现HBxAg 蛋白反式激活作用的新靶点,为阐明 HBxAg 蛋白的反式激活作用分子生物学机制,以及 HBV 相关的肝细胞癌(HCC)形成的分子生物学机制开辟新的研究方向.方法:以 HBxAg 表达质粒 pcDNA3.1(-)-HBxAg 转染 HepG2细胞,以空载体 pcDNA3.1(-)为平行对照,提取 mRNA 并进行抑制性消减杂交(SSH)分析.对于所获基因片段序列分析表明,其中之一为新型基因片段,与 GenBank 中注册的已知功能基因序列没有同源性,利用表达序列标签(EST)序列的搜索和比对,进行电子拼接,根据基因起始密码子的Kozak 规则和终止密码子下游保守的多聚腺苷酸信号序列,克隆、鉴定新型基因.结果:在16种 HBxAg 蛋白上调的靶基因中,其中包括未知功能基因,利用生物信息学技术,获得 HBxAg 蛋白反式激活作用的新型靶基因,开放读码框架(ORF)长度为237个核苷酸(nt),编码产物由78个氨基酸残基(aa)组成,命名为XTP6,在 GenBank 中注册,注册号为 AF490255.结论:HBxAg 蛋白是一种具有反式激活作用的蛋白,应用抑制性消减杂交技术成功筛选与克隆 HBxAg 蛋白反式激活新型靶基因 XTP6,为进一步阐明 HBxAg 蛋白反式调节作用及其在 HBV 感染中的分子生物学机制提供理论依据和研究方法.

关键词：乙型肝炎病毒X蛋白反式激活基因克隆鉴定生物信息学技术

丙型肝炎病毒非结构蛋白5A反式激活基因6的反式激活基因的筛选

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世界华人消化杂志 2004年第1期12卷 54-57页

作者：王建军刘妍成军杨倩纪冬党晓燕王春花中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心全军病毒性肝炎防治研究重点实验室北京市100039

目的:筛选与克隆:NS5A反式激活的新型靶基因NS5ATP6 的反式激活基因,探讨其可能存在的调节功能. 方法:应用抑制性消减杂交(SSH)技术及生物信息学(bioin- formatics)技术筛选并克隆NS5ATP6反式激活的新型靶基因.以NS5ATP6表达质粒pcDNA3.... 详细信息

目的:筛选与克隆:NS5A反式激活的新型靶基因NS5ATP6 的反式激活基因,探讨其可能存在的调节功能. 方法:应用抑制性消减杂交(SSH)技术及生物信息学(bioin- formatics)技术筛选并克隆NS5ATP6反式激活的新型靶基因.以NS5ATP6表达质粒pcDNA3.1(-)-NS5ATP6转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为平行对照,制备转染后的细胞裂解液,提取mRNA并逆转录为cDNA,经Rsa Ⅰ酶切后,将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性聚合酶链反应(PCR),将产物与T/A载体连接, 构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析. 结果:成功构建人NS5ATP6反式激活基因差异表达的cDNA 消减文库.文库扩增后得到33个阳性克隆,进行菌落PCR 分析,均得到200-2 000 bp插入片段.对插入片段测序, 并通过生物信息学分析获得其全长基因序列,结果共获得26种编码基因,包括24种已知基因和2种未知基因. 结论:筛选到的cDNA全长序列,包括一些与细胞生长调节、信号转导、肿瘤免疫发生及细胞凋亡密切相关的蛋白编码基因,推测了NS5ATP6可能存在的调控机制的线索,尚需进一步的实验证明.

关键词：丙型肝炎病毒非结构蛋白5A反式激活基因6 反式激活基因筛选

丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5A反式激活基因NS5ATP5的克隆

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世界华人消化杂志 2003年第12期11卷 1901-1904页

作者：张健刘妍成军王琳邵清梁耀东刘敏中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心

目的:应用抑制性消减杂交技术及生物信息学技术筛选并克隆丙型肝炎病毒非结构蛋白5A(HCV NS5A)反式激活新型靶基因.方法:以 HCV NS5A 表达质粒 pcDNA3.1(-)-NS5A 转染HepG2细胞,以空载体 pcDNA3.1(-)为平行对照,提取mRNA 并进行抑制性... 详细信息

目的:应用抑制性消减杂交技术及生物信息学技术筛选并克隆丙型肝炎病毒非结构蛋白5A(HCV NS5A)反式激活新型靶基因.方法:以 HCV NS5A 表达质粒 pcDNA3.1(-)-NS5A 转染HepG2细胞,以空载体 pcDNA3.1(-)为平行对照,提取mRNA 并进行抑制性消减杂交(SSH)分析.对于所获基因片段序列分析表明,其中之一为新型基因片段,与 GenBank中注册的已知功能基因序列没有同源性,利用表达序列标签(EST)序列的搜索和比对,进行电子拼接,根据基因起始密码子的 Kozak 规则和终止密码子下游保守的多聚腺苷酸信号序列,确定新型基因序列.从 HepG2细胞提取总 RNA,以逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术扩增获得该新基因的全长序列,并测序证实.结果:NS5ATP5基因的编码序列全长为1191个核苷酸(nt),编码产物由396个氨基酸残基(aa)组成.命名为NS5ATP5,在 GenBank 中注册,注册号为 AF529366.结论:HCV NS5A 反式激活新型靶基因 NS5ATP5的筛选与克隆,为进一步研究 HCV NS5A 反式激活作用的分子生物学机制和探索新型治疗技术奠定基础.

关键词：丙型肝炎病毒非结构蛋白 NS5A 反式激活基因 NS5ATP5 基因克隆

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三氧化二砷反式激活基因1的克隆化

中国公共卫生 2005年第8期21卷 947-948页

作者：吴顺华郑玉建成军张跃新刘妍王国荃新疆医科大学公共卫生学院乌鲁木齐830054 北京地坛医院传染病研究所解放军第302医院基因治疗研究中心

目的克隆三氧化二砷反式激活靶基因1(AsTP1)。方法从构建的三氧化二砷差异表达的肝HepG2细胞、T淋巴细胞cDNA消减文库筛选,利用RT-PCR和生物信息学分析相结合的方法获得新基因AsTP1的编码序列,对其氨基酸序列进行分析比较,并对其进行克... 详细信息

目的克隆三氧化二砷反式激活靶基因1(AsTP1)。方法从构建的三氧化二砷差异表达的肝HepG2细胞、T淋巴细胞cDNA消减文库筛选,利用RT-PCR和生物信息学分析相结合的方法获得新基因AsTP1的编码序列,对其氨基酸序列进行分析比较,并对其进行克隆化研究。结果AsTP1基因编码区为243个核苷酸(nt),编码产物为80个氨基酸残基(aa)。经核苷酸序列数据库(GenBank)和蛋白质一级结构序列数据库(SwissProt)同源序列的搜寻,与已知基因序列之间没有显著同源性,说明克隆的AsTP1基因属于未知功能新基因。结论发现三氧化二砷反式激活靶基因AsTP1,为进一步研究三氧化二砷的反式激活作用和揭示慢性砷中毒的分子机制提供新线索。

关键词：三氧化二砷反式激活基因克隆化