丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5A反式激活基因NS5ATP5的克隆

作     者：张健 刘妍 成军 王琳 邵清 梁耀东 刘敏 

作者机构：中国人民解放军第302医院传染病研究所基因治疗研究中心 

出 版 物：《世界华人消化杂志》 (World Chinese Journal of Digestology)

年 卷 期：2003年第11卷第12期

页      面：1901-1904页

学科分类：07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 090102[农学-作物遗传育种] 0710[理学-生物学] 1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金攻关项目 No.C03011402 No.C30070689 军队"九 五"科技攻关项目 No.98D063 军队回国留学人员启动基金项目 No.98H038 军队"十 五"科技攻关青年基金项目 No.01Q138 军队"十 五"科技攻关项目 No.01MB135 

主　　题：丙型肝炎病毒 非结构蛋白 NS5A 反式激活基因 NS5ATP5 基因克隆 

摘      要：目的:应用抑制性消减杂交技术及生物信息学技术筛选并克隆丙型肝炎病毒非结构蛋白5A(HCV NS5A)反式激活新型靶基因.方法:以 HCV NS5A 表达质粒 pcDNA3.1(-)-NS5A 转染HepG2细胞,以空载体 pcDNA3.1(-)为平行对照,提取mRNA 并进行抑制性消减杂交(SSH)分析.对于所获基因片段序列分析表明,其中之一为新型基因片段,与 GenBank中注册的已知功能基因序列没有同源性,利用表达序列标签(EST)序列的搜索和比对,进行电子拼接,根据基因起始密码子的 Kozak 规则和终止密码子下游保守的多聚腺苷酸信号序列,确定新型基因序列.从 HepG2细胞提取总 RNA,以逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术扩增获得该新基因的全长序列,并测序证实.结果:NS5ATP5基因的编码序列全长为1191个核苷酸(nt),编码产物由396个氨基酸残基(aa)组成.命名为NS5ATP5,在 GenBank 中注册,注册号为 AF529366.结论:HCV NS5A 反式激活新型靶基因 NS5ATP5的筛选与克隆,为进一步研究 HCV NS5A 反式激活作用的分子生物学机制和探索新型治疗技术奠定基础.