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牛免疫缺陷病毒反式激活因子作用机理的研究

病毒学报 1995年第4期11卷 327-335页

作者：梁臣耿运琪南开大学生命科学学院

牛免疫缺陷病毒（Ｂｏｖｉｎｅｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙｖｉｒｕｓ，ＢＩＶ）基因组编码的反式激活因子（ｔｒａｎｓａｃｔｉｖａｔｏｒ，Ｔａｔ）可以提高ＢＩＶ长末端重复区（ｌｏｎｇｔｅｒｍｉｎａｌｒｅｐｅａｔ，ＬＴＲ... 详细信息

牛免疫缺陷病毒（Ｂｏｖｉｎｅｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙｖｉｒｕｓ，ＢＩＶ）基因组编码的反式激活因子（ｔｒａｎｓａｃｔｉｖａｔｏｒ，Ｔａｔ）可以提高ＢＩＶ长末端重复区（ｌｏｎｇｔｅｒｍｉｎａｌｒｅｐｅａｔ，ＬＴＲ）启动子的表达。为研究ＢＩＶＴａｔ蛋白的作用机理，分别从ＢＩＶＬＴＲ５′端及３′端构建不同的缺失，从荧光素酶基因（ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ，Ｌｕｃ）为报道基因，通过共转染小牛肺细胞检测ＢＩＶＬＴＲ中与Ｔａｔ蛋白反式激活作用相关的序列。转染结果表明ＢＩＶＬＴＲ启动子始于－５２位的上游区不显著影响Ｔａｔ蛋白的激活作用，转录起始点下游的序列与Ｔａｔ蛋白的激活作用密切相关；并且－２－＋３２间的序列为ＢＩＶＴａｔ蛋白靶序列的一部分。将ＢＩＶＬＴＲ启动子下游序列（－２－＋２０４）亚克隆到ＨＩＶ－１ＬＴＲ启动子－５位之后，ＢＩＶＴａｔ蛋白可极大地提高该杂合启动子表达，进一步说明ＢＩＶＴａｔ蛋白的靶序列存在于－２－＋２０４的范围内；同时将ＢＩＶＬＴＲ启动子上游序列（－４１０－－３）接于ＨＩＶ－１ＬＴＲ下游序列（－２－＋７８）之前，ＨＩＶ－１Ｔａｔ蛋白可以激活该杂合启动子表达，说明ＢＩＶＬＴＲ上游序列可以支持ＨＩＶ－?

关键词：牛免疫缺陷病毒反式激活因子牛病毒

牛泡沫病毒LTR的反式激活因子靶序列研究(英文)

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南开大学学报（自然科学版） 1999年第2期32卷 87-92页

作者：刘佳建耿运琪南开大学生命科学学院

牛泡沫病毒（ＢＦＶ）是反转录病毒科泡沫病毒属成员之一．其基因组除编码ｇａｇ，ｐｏｌ，ｅｎｖ三个结构基因外，在ｅｎｖ和３＇ＬＴＲ之间有２个ＯＲＦ（ＯＲＦ－１和ＯＲＦ－２），编码自身的反式激活因子Ｔａｓ等调节蛋白．本研究... 详细信息

牛泡沫病毒（ＢＦＶ）是反转录病毒科泡沫病毒属成员之一．其基因组除编码ｇａｇ，ｐｏｌ，ｅｎｖ三个结构基因外，在ｅｎｖ和３＇ＬＴＲ之间有２个ＯＲＦ（ＯＲＦ－１和ＯＲＦ－２），编码自身的反式激活因子Ｔａｓ等调节蛋白．本研究利用我们实验室分离鉴定的ＢＦＶ３０２６中国毒株［１２］为材料，克隆Ｏｒｆ－１基因，构建ｐＢＦＶＯＲＦ－１表达质粒，通过带有ｌｕｃ基因的ＬＴＲ系列缺失质粒与ｐＢＦＶＯＲＦ－１共转染，瞬时表达分析结果将ＢＦＶＬＴＲ上Ｔａｓ应答元件（ＴＲＥ）定位于－９８３／－６６８（ＴＲＥＩ），－４７０／－１４０（ＴＲＥＩ）和ＲＵ５区．其中ＴＲＥＩ、ＴＲＥＩＩ为正调控区域，ＲＵ５为负调控区域，并进一步证明ＲＵ５在异源启动子（ＢＩＶＬＴＲ）上具有抑制其下游基因表达的功能．这些结果表明ＢＦＶＴａｓ作用机理与慢病毒（Ｔａｔ）。

关键词：牛病毒泡沫病毒长末端重复序列反式激活因子

Borf-1蛋白是牛泡沫病毒的反式激活因子

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科学通报 1999年第8期44卷 844-847页

作者：刘佳建刘淑红陈启民耿运琪南开大学生命科学学院天津300071

以近来分离并鉴定的BFV30 2 6中国毒株为材料 ,用PCR方法扩增BFV5′全长LTR( - 983/+ 32 2 )及非结构基因Orf 1 ,Orf 2 ,构建带不同长度LTR的克隆质粒及Borf_1 ,Borf_2等非结构蛋白表达质粒 ,引入Luc基因为报告基因做瞬时表达分析 .首... 详细信息

以近来分离并鉴定的BFV30 2 6中国毒株为材料 ,用PCR方法扩增BFV5′全长LTR( - 983/+ 32 2 )及非结构基因Orf 1 ,Orf 2 ,构建带不同长度LTR的克隆质粒及Borf_1 ,Borf_2等非结构蛋白表达质粒 ,引入Luc基因为报告基因做瞬时表达分析 .首次证明BFV编码的 2 49个氨基酸的Borf_1蛋白即为自身的反式激活因子 ,并且发现Borf_1反式激活作用的正调控元件位于LTR的U3区 - 1 40上游 ( + 1为转录起点 ) ,负调控元件位于转录起点下游 + 2 9/+ 32 3(RU5区 ) .

关键词：牛泡沫病毒 Borf-1蛋白反式激活因子

MHCⅡ类分子反式激活因子基因多态性与慢性乙型肝炎易感性的关联

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现代免疫学 2019年第3期39卷 184-188页

作者：苏明宽郑锦利杨虹陈宏斌黄建成郭建峰陈勇福建医科大学附属闽东医院检验科

反式激活因子(classⅡtransactivator,CⅡTA)是调控MHCⅡ类基因表达水平的限速因子,故将CⅡTA作为慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B, CHB)候选基因,分析其单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism, SNP)与CHB易感性的关联。以福建医科大学附属闽东医院汉族患者为基础进行病例对照研究,其中596例CHB患者为病例组,313例HBV自限性感染者为对照组。采用Haploview 4.2软件筛选出CⅡTA基因的15个标签SNP,再用多重高温连接酶检测反应对所选标签SNP进行基因型检测。结果显示,CⅡTA基因内含子rs13333382[TT+TA vs AA:P=0.003,OR=0.65, 95%可信区间(confidence interval,CI)为0.49~0.87]和rs4780335(CC+CG vs GG:P=9.40×10-5,OR=0.55, 95%CI为0.41~0.74)多态性与HBV自限性感染呈正相关,而3’非翻译区rs1139564 (TT+TC vs CC:P=0.002,OR=1.61, 95%CI为1.19~2.16)多态性可增加CHB风险。因此,作者认为CⅡTA基因多态性与HBV感染结局存在关联。

关键词：乙型肝炎病毒慢性乙型肝炎反式激活因子单核苷酸多态性表达数量性状位点

草莓镶脉病毒侵染性克隆鉴定及其反式激活因子功能分析

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草莓镶脉病毒侵染性克隆鉴定及其反式激活因子功能分析

作者：胡亚会安徽农业大学

学位级别：硕士

草莓镶脉病毒(Strawberry vein banding virus,SVBV)中国分离物侵染性克隆pSVBV-SY可以侵染森林草莓,但是叶片划伤接种侵染率较低,阻碍了侵染性克隆的研究。为了改进接种方法,本研究利用农杆菌真空抽滤法接种草莓,可显著提高接种效率,pS... 详细信息

草莓镶脉病毒(Strawberry vein banding virus,SVBV)中国分离物侵染性克隆pSVBV-SY可以侵染森林草莓,但是叶片划伤接种侵染率较低,阻碍了侵染性克隆的研究。为了改进接种方法,本研究利用农杆菌真空抽滤法接种草莓,可显著提高接种效率,pSVBV-SY在森林草莓上实现高效侵染且表现出典型镶脉症状。SVBV病毒载体pSVBV-MCS同法接种森林草莓,可验证其侵染性。已有研究发现花椰菜花叶病毒科病毒P6蛋白能够反式激活多顺反子mRNA的翻译,本研究鉴定SVBV P6蛋白是病毒的翻译反式激活因子(transactivator),能够高效激活人工构建双顺反子第2个基因的表达。预测反式激活因子P6功能域,构建系列P6突变体,发现P6各突变体均不能反式激活双顺反子第2个基因的表达。1 SVBV侵染性克隆的侵染性鉴定和检测比较划伤接种法和真空抽滤法接种草莓的接种效率,SVBV沈阳分离物侵染性克隆pSVBV-SY接种森林草莓,均接种15株,35d后检测侵染率,划伤接种侵染率仅在20%-40%之间,真空抽滤法接种侵染率在86%-100%之间。显症植株PCR均能够检测到pSVBV-SY基因组ORF IV和ORF VI基因。Southern blot(DNA杂交)检测显症森林草莓DNA,进一步验证侵染性克隆pSVBV-SY侵染性,能够检测到病毒基因组DNA。结果表明,侵染性克隆pSVBV-SY具有侵染性,且能够在森林草莓上出现典型镶脉症状,真空抽滤法接种草莓可以显著提高病毒侵染性克隆接种效率。2 SVBV病毒载体的侵染性鉴定SVBV美国分离物病毒载体pSVBV-MCS真空抽滤法接种森林草莓,接种后55 d,森林草莓系统幼叶表现出典型的镶脉症状。PCR检测发现,pSVBV-MCS成功侵染森林草莓。与SVBV美国分离物侵染性克隆pSVBV-US相比,接种pSVBV-MCS病毒载体,侵染率降低,寄主显症时间延缓,镶脉症状表型减轻。3 SVBV侵染性克隆能够反式激活双顺反子表达克隆CaMV、SVBV-US和SVBV-SY完整ORF VII基因和ORF I基因5'端51 nts片段,分别插入载体pCAM-GFP,构建含有双顺反子的表达载体p35S-Ca71GFP、pUSFlt-US71GFP和pSYFlt-SY71GFP,第1个顺反子是完整ORF VII基因,第2个顺反子是ORF I基因5'端51 nts与绿色荧光蛋白报告基因(gfp)形成的融合基因。SVBV美国分离物侵染性克隆pSVBV-US和pCAM-2b与双顺反子p35S-Ca71GFP共浸润本氏烟,结果表明病毒侵染性克隆能够反式激活双顺反子表达。4 SVBV病毒反式激活因子的鉴定为了鉴定SVBV反式激活作用的功能蛋白,构建含有SVBV美国分离物6个ORF的表达载体,pCAM-USP1、pCAM-USP2、pCAM-USP3、pCAM-USP4、pCAM-USP5和pCAM-USP6,分别与双顺反子p35S-Ca71GFP共浸润本氏烟,只有pCAM-USP6能够反式激活双顺反子表达,其余ORF均不具有反式激活功能。实验表明P6蛋白即为SVBV的反式激活因子,协助病毒mRNA的翻译。pCAM-USP6分别与p35S-Ca71GFP、pUSFlt-US71GFP和pSYFlt-SY71GFP 3种双顺反子共浸润本氏烟,发现pCAM-USP6能够反式激活3种双顺反子表达。同理,利用SVBV沈阳分离物pCAM-SYP6与3种双顺反子共浸润本氏烟得到了同样的结果,pCAM-SYP6也能够反式激活3种双顺反子表达。进一步证明P6蛋白的反式激活功能,SVBV不同分离物P6蛋白均可以反式激活双顺反子表达。5 P6蛋白反式激活核心功能域的探究为了探究P6蛋白反式激活核心功能域,根据P6蛋白的三维结构以及P6的核定位信号预测其功能域,构建P6的系列突变体pCAM-P6(1-300)、pCAM-P6(301-515)、pCAM-P6(1-113)、pCAM-P6(114-429)、pCAM-P6(430-515)、pCAM-P6(Δ193-223)和pCAM-P6(Δ402-426)。P6各个突变体分别与双顺反子pUSFlt-US71GFP共浸润本氏烟,利用激光共聚焦实验观察微观荧光表达情况。结果表明,P6各个突变体反式激活双顺反子表达荧光极为微弱,均不能有效反式激活双顺反子表达。

关键词：草莓镶脉病毒侵染性克隆病毒载体森林草莓反式激活因子双顺反子

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乙型肝炎病毒反式激活因子的研究进展

肝脏病杂志 1995年第2期3卷 118-120页

作者：杨林张定凤重庆医科大学病毒性肝炎研究所

乙型肝炎病毒反式激活因子的研究进展杨林，张定凤基因转录受顺式作用元件和反式作用因子的控制。所谓反式激活是指病毒或细胞基因编码的蛋白质对基因转录的激活作用，该蛋白质称反式激活因子（ｔｒａｎｓａｃｔｉｖａｔｏｒ）。反式激... 详细信息

乙型肝炎病毒反式激活因子的研究进展杨林，张定凤基因转录受顺式作用元件和反式作用因子的控制。所谓反式激活是指病毒或细胞基因编码的蛋白质对基因转录的激活作用，该蛋白质称反式激活因子（ｔｒａｎｓａｃｔｉｖａｔｏｒ）。反式激活不仅是基因转录激活的重要方式，也...

关键词：反式激活因子 HBV 分子生物学反式激活靶

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牛免疫缺陷病毒反式激活因子功能域的研究

中国病毒学 2000年第1期15卷 88-91页

作者：荣丽玮王世珍刘淑红陈启民耿运琪 C.Wood 南开大学生命科学院天津300071 美国Nebraska大学生命科学院

Transactivator (Tat) of bovine immunodeficiency virus (BIV) is a virus encoded regulatory protein, which activates gene expression directed by BIV long terminal repeat (LTR), and plays an important role in BIV replicative cycle. With methods of fusion protein expression and deletion mutation, a set of BIV Tat deletion mutants was constructed, and co transfected into FBL cells with BIV LTR. Using luciferase gene as a reporter, the function of BIV Tat mutants was detected and it showed that: 17/96 aa region of BIV Tat peptide contains full activity; auxiliary amino acids exist in N terminal 17/34 aa region; Cys rich region and basic region are essential to BIV Tat activity. Computer prediction of BIV Tat secondary structure was showed, and mechanism how it functions was analyzed.

关键词：牛免疫缺陷病毒反式激活因子缺失突变

MHCⅡ类分子反式激活因子(CⅡTA)的研究进展

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国外医学（免疫学分册） 2000年第4期23卷 224-227页

作者：欧启水周光炎陆佩华上海市免疫学研究所上海200025 上海市免疫研究所

MHCⅡ类分子反式激活蛋白 (CⅡTA ,classⅡtransactivator)的发现是近年来国际免疫学研究的一项重大突破 ,CⅡTA及其突变体在免疫调节和免疫治疗中具有诱人前景。本文对CⅡTA的结构、功能及其反式激活MHCⅡ类分子的机制作一综述 ,并对C... 详细信息

MHCⅡ类分子反式激活蛋白 (CⅡTA ,classⅡtransactivator)的发现是近年来国际免疫学研究的一项重大突破 ,CⅡTA及其突变体在免疫调节和免疫治疗中具有诱人前景。本文对CⅡTA的结构、功能及其反式激活MHCⅡ类分子的机制作一综述 ,并对CⅡTA及其突变体的应用前景作一简要介绍。

关键词： MHCⅡ类分子反式激活因子研究进展 CⅡTA

HIV－1反式激活因子（Tat）作用机理的研究进展

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生命的化学 1994年第5期14卷 34-36页

作者：梁臣耿运琪南开大学生命科学学院

ＨＩＶ－１反式激活因子（Ｔａｔ）作用机理的研究进展梁臣，耿运琪（南开大学生命科学学院，天津３０００７１）关键词ＨＩＶ－１，Ｔａｔ，ＴＡＲ人免疫缺陷病毒－１（ＨＩＶ－１）属反转录病毒科，慢病毒亚科，为艾滋病的重要病原体... 详细信息

ＨＩＶ－１反式激活因子（Ｔａｔ）作用机理的研究进展梁臣，耿运琪（南开大学生命科学学院，天津３０００７１）关键词ＨＩＶ－１，Ｔａｔ，ＴＡＲ人免疫缺陷病毒－１（ＨＩＶ－１）属反转录病毒科，慢病毒亚科，为艾滋病的重要病原体。该病毒可长期潜伏于人体内，但在某...

关键词： TAR 艾滋病毒反式激活因子艾滋病