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双重实时荧光pcr快速鉴别人参和西洋参

世界科学技术-中医药现代化 2022年第8期24卷 2986-2994页

作者：孙涛周林滕少娜何玲陈亭旭任风鸣潘英文孔德英重庆海关技术中心重庆400020 国家中药材物种鉴定及质量安全检测重点实验室重庆400020 重庆市药物种植研究所特色生物资源研究与利用川渝共建重点实验室重庆408435 海口海关热带植物隔离检疫中心海口570311

目的建立一种能够快速鉴定人参和西洋参的双重实时荧光pcr方法。方法通过对人参属及其近似种基因序列的分析比对,设计特异性的引物探针,建立双重实时荧光pcr检测方法。pcr反应体系为Premix Ex Taq(Probe qpcr)10μL,人参上下游引物各0.5... 详细信息

目的建立一种能够快速鉴定人参和西洋参的双重实时荧光pcr方法。方法通过对人参属及其近似种基因序列的分析比对,设计特异性的引物探针,建立双重实时荧光pcr检测方法。pcr反应体系为Premix Ex Taq(Probe qpcr)10μL,人参上下游引物各0.5μL,西洋参上下游引物各0.3μL,人参与西洋参特异性探针各0.4μL,DNA模板2μL,灭菌去离子水补至20μL。反应条件为95℃预变性30 s;然后以95℃变性5 s,60℃退火延伸30 s进行40个循环。应用该方法测试了27份DNA样品,包括7份人参、6份西洋参、4份人参与西洋参混合样、10份其他人参属样品及其他常见中药材样品的DNA,以确定该方法的特异性。将人参与西洋参样品DNA混合后10倍稀释成不同浓度后进行检测,用以确定该方法的灵敏度。结果人参及西洋参样品均在特定的荧光通道下出现典型的阳性扩增曲线,人参与西洋参混合样品均同时出现两条阳性扩增曲线,其它对照样品及空白对照均没有出现阳性扩增曲线。灵敏度检测结果显示该方法检测人参及西洋参的最低检测限均为2 pg DNA/反应。结论本实验建立的双重实时荧光pcr方法能够同时快速、准确、灵敏地鉴别出人参和西洋参。

关键词：人参西洋参双重实时荧光pcr 快速鉴别

双重实时荧光pcr定量检测动物产品中牛源性成分

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生物技术通报 2018年第9期34卷 190-194页

作者：高志强汪琳蒲静尹羿张伟赵相鹏姚震宇北京出入境检验检疫局技术中心北京100026

旨在建立一种定量检测动物产品中牛源性成分含量的双重实时荧光pcr方法。以牛卫星IV DNA为检测靶基因,以肌肉生长抑制素基因作为内对照合成引物探针,采用基于TaqMan的双重实时荧光pcr技术对已知牛肉添加比例的冻干混合肉粉标准品进行检... 详细信息

旨在建立一种定量检测动物产品中牛源性成分含量的双重实时荧光pcr方法。以牛卫星IV DNA为检测靶基因,以肌肉生长抑制素基因作为内对照合成引物探针,采用基于TaqMan的双重实时荧光pcr技术对已知牛肉添加比例的冻干混合肉粉标准品进行检测并建立线性模型,并应用模拟样品和送检样品进行了验证检测。结果显示,该方法可检出牛源成分含量为0.1%的冻干肉粉,不与其他种动物组织发生交叉反应,重复性试验的相对标准偏差小于5%,方法的扩增效率为93.6%。该方法适用于肉品中牛源性成分的定量检测,可用于测定市场上动物产品中的牛源性成分含量。

关键词：双重实时荧光pcr 定量检测牛源性成分

双重实时荧光pcr法检测食品和饲料中的鸡源性成分

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生物技术通报 2012年第1期28卷 134-138页

作者：汪永信安虹程坚程潇刘娟娟张波国家农副加工食品质量监督检验中心、安徽国家农业标准化与监测中心合肥230051

根据鸡线粒体DNA细胞色素b基因序列和内参照基因PUC18质粒基因序列设计特异性引物和以不同荧光素标记的TaqMan探针。通过对反应条件的优化筛选,建立能同时扩增鸡源性成分和内参照基因成分的双重实时荧光pcr检测方法。设置内参照反应是... 详细信息

根据鸡线粒体DNA细胞色素b基因序列和内参照基因PUC18质粒基因序列设计特异性引物和以不同荧光素标记的TaqMan探针。通过对反应条件的优化筛选,建立能同时扩增鸡源性成分和内参照基因成分的双重实时荧光pcr检测方法。设置内参照反应是为了监控反应体系中是否含有pcr反应的抑制物,避免出现假阴性结果。分别以鸡、鸭、鹅、火鸡、牛、羊、猪、鱼、兔、驴、鹿、狗、马、鸽子、大豆、玉米、小麦、大米、马铃薯及番茄的线粒体DNA作为模板进行特异性试验,结果表明该方法仅能特异性扩增鸡源性成分,而对其它物种未见有效扩增。通过灵敏度测试,该方法检出限达0.01%。所制定的方法特异性高,灵敏度好,可以作为食品和饲料中鸡源性成分的高效检测方法。

关键词：双重实时荧光pcr 细胞色素b基因鸡源性成分内参照检测方法

双重实时荧光pcr对流感病毒检测及分型方法的研究

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中国卫生检验杂志 2013年第1期23卷 1-4,8页

作者：沃恩康王怡婷吴海波尤金彪王巧刚郭潮潭浙江省医学科学院生物工程研究所杭州310013

目的:建立双重实时荧光pcr方法用于流感病毒检测,实现对新甲型H1N1流感病毒,H1和H3亚型季节性流感病毒,H5和H9亚型禽流感病毒的亚型区分。方法:根据GenBank公布的基因序列,针对M基因保守区设计引物和探针,用于流感病毒检测和定量;针对H... 详细信息

目的:建立双重实时荧光pcr方法用于流感病毒检测,实现对新甲型H1N1流感病毒,H1和H3亚型季节性流感病毒,H5和H9亚型禽流感病毒的亚型区分。方法:根据GenBank公布的基因序列,针对M基因保守区设计引物和探针,用于流感病毒检测和定量;针对HA基因设计引物和探针,用于病毒分型。建立和优化双重实时荧光pcr反应体系,进行敏感度和特异性评价,同时对32份已知亚型的流感病毒样本进行检测,验证所建方法的实用性。结果:基于M基因的实时荧光pcr方法定量范围为5×101到5×108个目的拷贝。经优化的双重实时荧光pcr方法对不同亚型流感病毒的检测灵敏度在50～500拷贝之间,各亚型之间没有交叉反应。建立的方法能够检测出本研究涉及的所有流感病毒标本,分型准确率达到96.9%。结论:建立的双重实时荧光pcr方法具有敏感度高,特异性好等优点,实现对流感病毒样本准确分型,适用于流感的鉴别诊断及病毒载量测定。

关键词：流感病毒双重实时荧光pcr 分型

双重实时荧光pcr法鉴别大西洋鲑鱼和虹鳟鱼

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食品安全质量检测学报 2019年第13期10卷 4145-4151页

作者：周露丁清龙杨晨杨丹婷苏章庭广东省食品检验所

目的建立双重实时荧光pcr法同时鉴别大西洋鲑鱼和虹鳟鱼的检测方法。方法在现有单一物种检测方法的基础上,应用多重实时荧光pcr检测技术对大西洋鲑鱼和虹鳟鱼同时进行检测,并对pcr反应时间和反应温度进行优化。结果该方法通过1管pcr反... 详细信息

目的建立双重实时荧光pcr法同时鉴别大西洋鲑鱼和虹鳟鱼的检测方法。方法在现有单一物种检测方法的基础上,应用多重实时荧光pcr检测技术对大西洋鲑鱼和虹鳟鱼同时进行检测,并对pcr反应时间和反应温度进行优化。结果该方法通过1管pcr反应实现对大西洋鲑鱼和虹鳟鱼的同时鉴别,反应时间缩短至1 h以内,方法的特异性好,灵敏度可达到0.1%(DNA质量分数)。结论该方法检测效果好、时间短、成本低,可为监管部门解决三文鱼市场监管问题提供技术手段。

关键词：大西洋鲑鱼虹鳟鱼双重实时荧光pcr

双重实时荧光pcr快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌方法的建立

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蚌埠医学院学报 2011年第12期36卷 1388-1390页

作者：倪勇孙余婕安徽省芜湖市中医院检验科 241000 安徽省临床检验中心pcr实验室安徽合肥233001

目的:建立一种能快速检测金黄色葡萄球菌,同时能快速鉴别是否具有耐甲氧西林基因的双重实时荧光pcr方法。方法:以金黄色葡萄球菌特异NUC基因的保守区为靶区域设计特异引物和TaqMan荧光探针,同时针对耐甲氧西林特异MecA基因设计另一对引... 详细信息

目的:建立一种能快速检测金黄色葡萄球菌,同时能快速鉴别是否具有耐甲氧西林基因的双重实时荧光pcr方法。方法:以金黄色葡萄球菌特异NUC基因的保守区为靶区域设计特异引物和TaqMan荧光探针,同时针对耐甲氧西林特异MecA基因设计另一对引物和探针;2条探针的5'端标记不同荧光报告基团(FAM和HEX),3'端标记荧光淬灭基团,建立双重实时荧光pcr方法,检测样本中的金黄色葡萄球菌以及鉴别其是否具有耐甲氧西林基因,并对双重实时荧光pcr方法的的特异性和灵敏度进行评价。结果:双重荧光pcr方法可对金黄色葡萄球菌及耐甲氧西林基因分别进行特异扩增,两者均为阳性时可判为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌;金黄色葡萄球菌特异基因特异扩增阳性而耐甲氧西林基因特异扩增阴性可判为甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌;对同种属的表皮葡萄球菌、粪链球菌、藤黄微球菌等病原体均无扩增;双重实时荧光pcr方法的灵敏度最低可检测至100个菌体。结论:建立的实时荧光pcr检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的方法不仅能实现对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌社区感染和临床感染的监控,同时也可为临床上耐甲氧西林葡萄球菌感染患者的用药提供必要的依据。

关键词：耐甲氧西林基因金黄色葡萄球菌双重实时荧光pcr 快速检测

农作物中Cry1A(c)和CP4-EPSPS转基因成分双重实时荧光pcr检测方法的建立

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江苏农业科学 2022年第5期50卷 23-28页

作者：罗建兴刘国强其勒木格郭梁锡林郭勒职业学院内蒙古锡林浩特026000 锡林郭勒生物工程研究院内蒙古锡林浩特026000 锡林郭勒食品检验检测和风险评估中心内蒙古锡林浩特026000

采用羧基荧光素(FAM)和六氯荧光素(HEX)荧光基团标记探针,建立针对农作物中常见抗虫和抗除草剂基因的双重实时荧光pcr检测方法,通过特异性、检出限以及模拟掺假试验验证此方法在转基因检测中的适用性。特异性检测试验中仅转基因作物(转... 详细信息

采用羧基荧光素(FAM)和六氯荧光素(HEX)荧光基团标记探针,建立针对农作物中常见抗虫和抗除草剂基因的双重实时荧光pcr检测方法,通过特异性、检出限以及模拟掺假试验验证此方法在转基因检测中的适用性。特异性检测试验中仅转基因作物(转基因棉花、转基因水稻、转基因大豆)和阳性质粒检测出相应转基因成分,其余样品均未出现明显pcr扩增曲线;检出限结果表明,双重实时荧光pcr方法对Cry1A(c)、CP4-EPSPS基因的检出限分别为1、0.1 ng,所建立的标准曲线r^(2)值均大于0.98,具有对农作物中的转基因成分进行定量检测的能力;模拟掺假检测显示此方法可检测到1%的Cry1A(c)和5%的CP4-EPSPS转基因成分。综上所述,本试验建立的双重实时荧光pcr法适用于对Cry1A(c)和CP4-EPSPS转基因成分的快速检测和定量分析。

关键词：转基因 Cry1A(c)基因 CP4-EPSPS基因双重实时荧光pcr 特异性检出限模拟掺假

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恙虫病东方体与莫氏立克次体双重实时荧光pcr检测方法建立及其在鼠类检测中的应用

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口岸卫生控制 2019年第1期24卷 55-60页

作者：高玉峰孔文罗佳程晓兰王萍米伟惠大连海关辽宁大连116001 满洲里市妇幼保健所内蒙古满洲里021400

目的建立一种基于TaqMan-MGB探针技术的双重实时荧光pcr检测方法,用于鼠类携带恙虫病东方体和莫氏立克次体的检测工作开展。方法依据恙虫病东方体56-kDa蛋白基因序列设计恙虫病东方体引物及Taqman-MGB探针,参照文献合成莫氏立克次体引物... 详细信息

目的建立一种基于TaqMan-MGB探针技术的双重实时荧光pcr检测方法,用于鼠类携带恙虫病东方体和莫氏立克次体的检测工作开展。方法依据恙虫病东方体56-kDa蛋白基因序列设计恙虫病东方体引物及Taqman-MGB探针,参照文献合成莫氏立克次体引物及Taqman-MGB探针,建立恙虫病东方体及莫氏立克次体双重实时荧光pcr检测方法。结果利用本文建立的双重实时荧光pcr检测方法对288份鼠肺脏组织样品进行检测,检测结果与普通pcr检测结果一致。结论本文建立的双重实时荧光pcr检测方法,具有较好的特异性、敏感性及重复性,满足国境口岸鼠类携带恙虫病东方体及莫氏立克次体的监测检测工作需要。

关键词：双重实时荧光pcr 恙虫病东方体莫氏立克次体检测

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两种锥虫双重实时荧光pcr检测方法的建立

中国口岸科学技术 2022年第2期4卷 4-8页

作者：王渊刘永杰金子懿王文博付强王爽高毅陕西国际旅行卫生保健中心(西安海关口岸门诊部) 西安710000 西安海关西安710000

通过比较美洲锥虫和非洲锥虫基因组的保守性与特异性,设计2套锥虫特异性引物和探针用于核酸检测,美洲锥虫和非洲锥虫分别使用HEX和FAM荧光基团标记探针,建立美洲锥虫和非洲锥虫的双重实时荧光pcr检测方法,并对建立的方法进行灵敏度、特... 详细信息

通过比较美洲锥虫和非洲锥虫基因组的保守性与特异性,设计2套锥虫特异性引物和探针用于核酸检测,美洲锥虫和非洲锥虫分别使用HEX和FAM荧光基团标记探针,建立美洲锥虫和非洲锥虫的双重实时荧光pcr检测方法,并对建立的方法进行灵敏度、特异性和重复性分析。结果显示,新建立的双重实时荧光pcr检测方法只对2种锥虫阳性对照模板有特异性扩增,与健康人血液、健康人尿液、钩端螺旋体、丝虫阳性对照样本均无交叉反应。2套引物和探针的检测灵敏度均可达到最低10^(-4)拷贝/mL。美洲锥虫和非洲锥虫阳性对照模板的2种稀释度重复检测10次均有较好的重复性。结果表明,建立的2种锥虫双重实时荧光pcr检测方法灵敏度高,特异性强,重复性好,可用于对我国口岸输入性锥虫病例的早期检测和分型鉴别。

关键词：美洲锥虫非洲锥虫双重实时荧光pcr