检索结果-南通市图书馆

生物学教学 2020年第7期45卷 73-74页

作者：吴浩钦广东省汕头市潮南区东山中学汕头515144

本文对没有内质网和高尔基体等细胞器的原核细胞中,蛋白质合成后的加工与分泌机制进行了概述。

关键词：原核细胞蛋白质加工分泌

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“原核细胞和真核细胞”相关概念解析

生物学教学 2016年第6期41卷 70-71页

作者：赵锦程刘馨内蒙古北方重工业集团有限公司第三中学

本文对＂原核细胞是否有染色体＂＂原核细胞分裂方式是否属于无丝分裂＂＂原核细胞的光合作用与有氧呼吸的场所＂和＂原核细胞壁成分＂等问题进行阐述,并与真核细胞相关概念进行比较。

关键词：原核细胞真核细胞相关概念比较

原核细胞microRNA特性及其作用机制研究进展

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中国人兽共患病学报 2017年第5期33卷 449-453页

作者：张新蔚黄燕颖严杰孙爱华温州医科大学检验医学院温州325035 杭州医学院基础医学部杭州310053 浙江大学医学院病原生物学系杭州310058

microRNA为一类非编码小RNA,主要通过其种子序列(seed sequence,SS)与靶mRNA位于5′端的SS结合序列特异性结合后抑制靶mRNA转录或降解靶mRNA,从而在转录后水平负调控靶基因表达。microRNA首先发现于秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegan... 详细信息

microRNA为一类非编码小RNA,主要通过其种子序列(seed sequence,SS)与靶mRNA位于5′端的SS结合序列特异性结合后抑制靶mRNA转录或降解靶mRNA,从而在转录后水平负调控靶基因表达。microRNA首先发现于秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans),此后发现各种真核细胞均存在大量各种microRNA。真核细胞首先转录出microRNA前体,经剪切后成为21~23nt有功能的microRNA,大多与靶mRNA的3′端序列结合后引起靶mRNA翻译抑制或降解。近年不少细菌等原核细胞microRNA被发现,但原核细胞microRNA不需剪切即有活性,大小为50~400nt,其特性、作用位点和机制等也与真核细胞有一定差异。本文简要介绍真核和原核细胞基因表达调控主要机制、microRNA特点及其调控基因表达的机制,以期为深入研究原核细胞型病原微生物基因表达调控与致病机制奠定基础。

关键词：原核细胞基因表达调控 microRNA 作用机制

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“原核细胞与真核细胞的最大区别”教学设计

生物学通报 2021年第9期56卷 11-14页

作者：盛国跃金华市教育教学研究中心浙江金华321017

在“原核细胞与真核细胞的最大区别”一节的教学中,将课程标准所呈现的概念细化为下位概念,并以此为起点展开教学。教学过程以情境—问题—任务—活动的方式展开,通过创设情境,引导学生提出指向概念的问题,通过实验探究、列表比较、科... 详细信息

在“原核细胞与真核细胞的最大区别”一节的教学中,将课程标准所呈现的概念细化为下位概念,并以此为起点展开教学。教学过程以情境—问题—任务—活动的方式展开,通过创设情境,引导学生提出指向概念的问题,通过实验探究、列表比较、科学论证等环节帮助学生解决问题、构建概念,通过应用概念环节促成学生内化概念。

关键词：概念教学设计原核细胞

人烯醇化酶1在原核细胞中的可溶性表达及纯化

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湖北科技学院学报（医学版） 2022年第5期36卷 405-408,412页

作者：金科华向念慈刘洋湖北科技学院医学部基础医学院湖北咸宁437100 湖北科技学院医学部药学院

目的用原核表达系统生产人烯醇化酶1(ENO1),为筛选抑制剂奠定基础。方法通过5′分别带Nde I和Xho I位点的一对引物PCR扩增ENO1 cDNA,用Nde I+Xho I酶切cDNA和质粒pET-28a。酶切产物经纯化后用T4 DNA ligase连接,并转化大肠杆菌Top10,用... 详细信息

目的用原核表达系统生产人烯醇化酶1(ENO1),为筛选抑制剂奠定基础。方法通过5′分别带Nde I和Xho I位点的一对引物PCR扩增ENO1 cDNA,用Nde I+Xho I酶切cDNA和质粒pET-28a。酶切产物经纯化后用T4 DNA ligase连接,并转化大肠杆菌Top10,用含卡那霉素的LB平板(LBK培养基)筛选转化子。提取转化子质粒,酶切和测序法鉴定。将序列正确的重组子转化大肠杆菌BL21(DE3),用LBK培养基培养抗性菌落至OD_(600)约为0.7,加入终浓度0.2mmol/L IPTG,16℃诱导ENO1表达20h。超声破碎收集的菌体离心取上清,用组氨酸标签蛋白(可溶性)纯化试剂盒纯化ENO1。对纯化的ENO1进行超滤浓缩和缓冲液交换后,BCA法测定浓度,低温保存。结果ENO1正确连入pET-28a,重组菌pET-28a-ENO1-BL21(DE3)经0.2mmol/L IPTG诱导后,从裂解液上清中获得了高纯度的ENO1,产量达427mg/L。结论高产量、高纯度可溶性ENO1奠定了抑制剂筛选模型建立的基础。

关键词：烯醇化酶1 表达纯化原核细胞可溶性

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生姜蛋白酶基因的克隆及在原核细胞中的表达

食品安全导刊 2021年第23期 75-76,78页

作者：卢瑛莱芜职业技术学院山东莱芜271100

提取莱芜生姜总RNA,采用RT-PCR技术扩增出生姜蛋白酶(Ginger protease)基因GP2和GP3,经序列比对,发现莱芜生姜蛋白酶基因GP2在945位的碱基与Gene bank中生姜蛋白酶的序列GP2b(GI:57118006)有差异,GP3在451、700和804这3个位置的碱基与GP... 详细信息

提取莱芜生姜总RNA,采用RT-PCR技术扩增出生姜蛋白酶(Ginger protease)基因GP2和GP3,经序列比对,发现莱芜生姜蛋白酶基因GP2在945位的碱基与Gene bank中生姜蛋白酶的序列GP2b(GI:57118006)有差异,GP3在451、700和804这3个位置的碱基与GP3b(GI:57118011)有差异,在翻译后的氨基酸也不同,表明了不同生姜品种生姜蛋白酶基因的多样性。将克隆的GP2片段GPII重组到带有His-tag的原核表达载体pET30a(+)中,构建重组表达载体pET-GPII。将重组pET-GPII转化到大肠杆菌BL21(DE3)中构建工程菌株,工程菌株用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,在诱导6 h,IPTG浓度为0.1 mmol/L时,重组GPII表达量最高。SDS-PAGE凝胶电泳分析结果表明蛋白大小约为21 kDa。该实验结果表明生姜蛋白酶能够在原核表达系统进行大量表达,为生姜蛋白酶工程化生产奠定了基础。

关键词：莱芜生姜生姜蛋白酶克隆原核细胞表达

中国旱獭干扰素α家族基因在真核细胞和原核细胞中的表达

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中华肝脏病杂志 2006年第2期14卷 124-128页

作者：卢银平王宝菊黄红平田拥军杨燕董继华陆蒙吉杨东亮华中科技大学同济医学院附属同济医院临床免疫研究室华中科技大学同济医学院附属协和医院病毒研究室武汉430030 华中科技大学同济医学院附属同济医院临床免疫研究室武汉430030 华中科技大学同济医学院附属协和医院病毒研究室德国埃森大学病毒学研究所

目的将不同基因型中国旱獭干扰素α(IFNα)基因在真核和原核细胞中进行表达,检测其生物学活性,以期利用克隆的中国旱獭IFN在动物模型上探索慢性乙型肝炎有效的IFN治疗方案和策略。方法利用分子克隆技术将14个不同亚型的中国旱獭IFNα家... 详细信息

目的将不同基因型中国旱獭干扰素α(IFNα)基因在真核和原核细胞中进行表达,检测其生物学活性,以期利用克隆的中国旱獭IFN在动物模型上探索慢性乙型肝炎有效的IFN治疗方案和策略。方法利用分子克隆技术将14个不同亚型的中国旱獭IFNα家族基因亚克隆到真核表达载体,将中国旱獭IFNα5亚型基因亚克隆到原核表达载体。病毒保护实验检测表达产物的生物学活性,比较不同基因亚型IFNα生物学活性的差异,分析中国旱獭IFNα生物学活性的种属特异性。结果 14个基因亚型中国旱獭IFNα中,8个功能基因亚型真核表达产物有生物学活性,而6个假基因亚型产物没有生物学活性,8个功能基因亚型真核表达产物生物学活性存在差异,且其活性都受种属特异性限制。原核表达纯化产物具有较好的生物学活性。结论中国旱獭IFNα家族基因能在真核和原核细胞中表达,表达产物具有生物学活性。本研究为在中国旱獭乙型肝炎病毒感染模型上探索IFN治疗策略奠定了实验基础。

关键词：干扰素α 旱獭属真核细胞原核细胞

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原核细胞中人神经生长因子基因的克隆

中国医科大学学报 2003年第2期32卷 97-99页

作者：尹元琴马萍隋承光任常山中国医科大学基因工程研究中心辽宁沈阳110001 中国医科大学附属第一医院肿瘤研究所分子肿瘤研究室

目的:克隆人神经生长因子cDNA,为神经生长因子cDNA的表达作准备。方法:采用大肠杆菌JM 109菌株作为宿主菌,以pUC 118作为克隆载体,使用限制性内切酶BamHI,PstI酶切DNA片段,采用磷酸钙转染法转化细菌,α互补和限制性酶切图谱鉴定转化细... 详细信息

目的:克隆人神经生长因子cDNA,为神经生长因子cDNA的表达作准备。方法:采用大肠杆菌JM 109菌株作为宿主菌,以pUC 118作为克隆载体,使用限制性内切酶BamHI,PstI酶切DNA片段,采用磷酸钙转染法转化细菌,α互补和限制性酶切图谱鉴定转化细菌。结果:βNGF cDNA经BamHI和PstI 双酶切后,经过重组,与载体连接在一起,转化大肠杆菌后,形成了克隆。结论:应用JM 109作为宿主,pUC 118为克隆载体,成功克隆了人神经生长因子cDNA。

关键词：神经生长因子克隆原核细胞 cDNA 限制性内切酶 BamHI 载体

HCMV pp65在原核细胞中的表达、纯化及其抗血清的制备

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安徽医科大学学报 2010年第6期45卷 737-739页

作者：王兴满吴琼汤仁树甘霖赵俊王明丽安徽医科大学微生物学教研室合肥230032

目的采用原核表达系统获得HCMV pp65目的蛋白,免疫家兔制备该蛋白特异性抗血清。方法构建表达GST-HCMV pp65融合蛋白的质粒,在大肠杆菌中诱导表达,经GST亲和层析纯化后的pp65蛋白免疫家兔,获得兔多克隆抗血清。采用ELISA、SDS-PAGE电泳... 详细信息

目的采用原核表达系统获得HCMV pp65目的蛋白,免疫家兔制备该蛋白特异性抗血清。方法构建表达GST-HCMV pp65融合蛋白的质粒,在大肠杆菌中诱导表达,经GST亲和层析纯化后的pp65蛋白免疫家兔,获得兔多克隆抗血清。采用ELISA、SDS-PAGE电泳及Western blot检测纯化后的蛋白,并以间接免疫荧光染色法检测鉴定该蛋白的抗原性。结果成功构建PGEX-5X-pp65重组质粒,转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,获得可溶性的融合蛋白;GST亲和层析纯化后的蛋白免疫家兔获得特异性抗血清。结论在原核细胞中成功获得了融合蛋白pp65,免疫家兔后获得具有高度特异性抗血清。为进一步揭示该蛋白的功能及作用机制奠定了重要基础。

关键词：原核细胞免疫血清

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汉坦病毒S基因在原核细胞中高效表达的研究

中国媒介生物学及控制杂志 2008年第3期19卷 237-240页

作者：袁子国张秀香张守峰徐慧娟王晓虎扈荣良军事医学科学院军事兽医研究所

目的通过基因工程的方法从鼠肺中扩增出汉坦病毒的S基因,并实现其蛋白的体外表达。方法应用RT-PCR方法扩增汉坦病毒汉城型(SEO)的YZG-Changchun株S基因,然后克隆到pMD18-T载体中,经序列分析后,定向克隆入原核表达载体pET-28a中,转化大... 详细信息

目的通过基因工程的方法从鼠肺中扩增出汉坦病毒的S基因,并实现其蛋白的体外表达。方法应用RT-PCR方法扩增汉坦病毒汉城型(SEO)的YZG-Changchun株S基因,然后克隆到pMD18-T载体中,经序列分析后,定向克隆入原核表达载体pET-28a中,转化大肠埃希菌Rosetta用IPTG诱导表达后,将全菌裂解,用SDS-PAGE和Western-blot检测重组菌中外源蛋白的表达情况和免疫反应性的分析。结果S基因在原核细胞中得到了高效表达,表达的蛋白占菌体蛋白总量的37%,且具有良好的免疫反应性。结论汉坦病毒S基因蛋白可通过基因工程手段获得体外高效表达,这将对其功能的研究及为汉坦病毒疫苗的研究提供基础。

关键词：汉坦病毒 S基因原核细胞表达