HCMV pp65在原核细胞中的表达、纯化及其抗血清的制备

作     者：王兴满 吴琼 汤仁树 甘霖 赵俊 王明丽 

作者机构：安徽医科大学微生物学教研室合肥230032 

出 版 物：《安徽医科大学学报》 (Acta Universitatis Medicinalis Anhui)

年 卷 期：2010年第45卷第6期

页      面：737-739页

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学] 

基　　金：安徽省自然科学基金重点项目(编号:KJ2008A085) 安徽省科技攻关项目(编号:08010302179) 

主　　题：原核细胞 免疫血清 

摘      要：目的采用原核表达系统获得HCMV pp65目的蛋白,免疫家兔制备该蛋白特异性抗血清。方法构建表达GST-HCMV pp65融合蛋白的质粒,在大肠杆菌中诱导表达,经GST亲和层析纯化后的pp65蛋白免疫家兔,获得兔多克隆抗血清。采用ELISA、SDS-PAGE电泳及Western blot检测纯化后的蛋白,并以间接免疫荧光染色法检测鉴定该蛋白的抗原性。结果成功构建PGEX-5X-pp65重组质粒,转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,获得可溶性的融合蛋白;GST亲和层析纯化后的蛋白免疫家兔获得特异性抗血清。结论在原核细胞中成功获得了融合蛋白pp65,免疫家兔后获得具有高度特异性抗血清。为进一步揭示该蛋白的功能及作用机制奠定了重要基础。