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调气和血法治疗原发免疫性血小板减少症的临床观察

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调气和血法治疗原发免疫性血小板减少症的临床观察

作者：竺佳天津中医药大学

学位级别：硕士

目的:初步评价调气和血法治疗原发免疫性血小板减少症(ITP)的临床疗效及预后。方法:研究一:利用计算机检索中国期刊全文数据库(CNKI)(1989—2022年)、万方数据库(Wangfang Data)(1989—2022年)、中文科技期刊数据库(维普CSTJ)(1989—202... 详细信息

目的:初步评价调气和血法治疗原发免疫性血小板减少症(ITP)的临床疗效及预后。方法:研究一:利用计算机检索中国期刊全文数据库(CNKI)(1989—2022年)、万方数据库(Wangfang Data)(1989—2022年)、中文科技期刊数据库(维普CSTJ)(1989—2022年)、中国生物医学文献数据库(CBMdisc)(1989—2022年)、Pub Med(1989—2022年)、Web of Science(1989—2022年)。检索中西医结合治疗ITP随机对照研究,对所搜集的文献按照纳排标准严格筛选,并评价文献质量,使用Rev Man5.4.1软件对总有效率、外周血小板计数、骨髓巨核细胞、不良反应进行Meta分析。研究二:回顾性收集自2018年1月至2022年6月门诊及住院ITP患者的临床资料,并以中药治疗为基础的方案分为中药组、单线西药组、多线联合组,比较分析三组治疗前后及组间的外周血小板计数、用药线数、临床疗效、复发情况及不良反应。结果:研究一:(1)共纳入29篇文献,中西医结合治疗组治疗方案中中药联合激素24篇,中药联合rh TPO3篇,中药联合环孢素1篇,中药联合环孢素与激素1篇。(2)中西医结合治疗组与西药组相比,漏斗图提示文献发表性偏倚较小,总有效率[RR=1.29,95%CI=(1.20,1.39),P血小板计数[SMD=1.11,95%CI=(1.00,1.22),P性:男性2.3:1,女性多于男性。不同年龄段患者性别分布无统计学差异(P>0.05)。新诊断ITP9例(10%),持续性ITP29例(32.2%),慢性ITP52例(57.8%),年龄、性别分布无统计学意义(P>0.05)。无明显诱因发病73例(81.1%),发病诱因其中病毒或细菌感染9例(10%),妊娠3例(3.3%),注射疫苗3例(3.3%),癌症术后2例(2.2%)。(2)90例ITP患者有出血症状57例(63.3%),慢性与非慢性患者出血率有统计学差异(P性显著(r=0.548,P=0.000),呈正相关;血小板计数与出血评分有相关性(r=-0.264,P=0.047),呈负相关。骨髓中巨核细胞增多66例(88%),产板型巨核细胞计数17±7.54个,不产板型巨核细胞计数2.23±2.69个。脾脏正常86例(95.6%),轻度脾大4例(4.6%)。(3)组内比较中药组、单线西药组、多线联合组治疗前、治疗后第1月、第3月、第6个月外周血小板计数,均有统计学差异(P0.05)。治疗后三组间临床有效率第1月比较具有统计学差异(P0.05)。治疗后第1月临床有效率中药组与单线西药组、多线联合组有统计学差异(P症状积分比较均有统计学差异(P症状积分,无统计学差异(P>0.05)。患者单一症状乏力、烦躁、身热、干燥治疗前后的量化症状积分比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:中西医结合较单纯西药治疗ITP能提高临床疗效,主要表现在临床总有效率、外周血小板计数与骨髓产板型巨核细胞计数高,药物不良反应发生率低。调气和血法治疗ITP能增加外周血小板计数,减停西药,改善临床症状,提高临床疗效,减少复发次数,降低药物不良反应。

关键词：调气和血法原发免疫性血小板减少症中西医结合临床疗效

探讨情志因素对成人原发免疫性血小板减少症患者的影响

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探讨情志因素对成人原发免疫性血小板减少症患者的影响

作者：刘逸兰湖北中医药大学

学位级别：硕士

目的:原发免疫性血小板减少症(Primary immune thrombocytopenia,ITP)是一种获得性自身免疫性出血性疾病,该病临床表现变化较大,严重脏器出血、皮肤黏膜出血、无症状性血小板减少均可发生,部分ITP患者有焦虑、乏力表现。中医认为负面情... 详细信息

目的:原发免疫性血小板减少症(Primary immune thrombocytopenia,ITP)是一种获得性自身免疫性出血性疾病,该病临床表现变化较大,严重脏器出血、皮肤黏膜出血、无症状性血小板减少均可发生,部分ITP患者有焦虑、乏力表现。中医认为负面情绪不仅是病理产物,亦是疾病产生的重要因素,可能会影响ITP患者的生活质量及治疗效果。目前关于情志因素与ITP之间关系的研究较少,本研究以情志因素为切入点,探讨焦虑、担忧等负面情绪对ITP患者生活质量、血小板计数、出血评分、中医症状评分、疲劳症状的影响,进而分析情志因素对ITP的影响,拓宽ITP中医诊治思路。方法:选取2022年1月至2022年8月于湖北省中医院血液科就诊的ITP患者为研究对象,结合患者意愿,对患者进行中医治疗、中西医结合治疗或西医治疗。采用问卷调查法,在经过培训的临床医生指导下,由患者独立完成问卷。记录患者基本信息(如年龄、性别、婚况等)、病情相关信息(如血小板计数、中医症状、对ITP的担忧情况等),及广泛性焦虑量表(GAD-7)、健康调查简表(SF-36)结果,进行统计学分析。结果:1.纳入92例患者,其中男性17人,女性75人,中位年龄37岁,平均年龄40.55岁,最多见症状为乏力(39/92),其次为紫癜(33/92)。2.纳入研究的92名患者中,超过半数患者存在焦虑情绪(47/92),极大部分患者存在担忧情绪(80/92)。不同性别、年龄、文化程度、工作种类、病程、治疗方案、血小板计数患者焦虑程度差异无统计学意义(P>0.05),不同婚姻状况、不同收入情况、是否存在显性临床症状、是否为ITP感到担忧的患者焦虑程度差异有统计学意义(P性别、年龄、文化程度、病程、治疗方案、血小板计数的患者PCS和MCS差异均无统计学意义(P>0.05),不同婚姻状况的患者PCS差异无统计学意义(P>0.05),但MCS差异有统计学意义(P性临床症状、不同工作种类的患者PCS差异有统计学意义(P0.05)。4.不同焦虑程度的患者MCS、PCS差异有统计学意义(P症状差异无统计学意义(P>0.05)。是否存在担忧情绪的患者PCS、疲劳症状差异有统计学意义(P0.05)。不同焦虑程度、是否存在担忧情绪的患者中医症状积分、出血评分、血小板计数差异无统计学意义(P>0.05)。结论:1.疲劳与紫癜是ITP患者最多见的临床症状,亦是困扰ITP患者的主要因素。2.超过半数的ITP患者存在焦虑及担忧的负面情绪,部分患者同时存在焦虑和担忧情绪,焦虑、担忧情绪之间亦会相互影响。***患者生活质量较低,收入、是否存在显性临床症状是ITP患者生活质量的不良影响因素。4.焦虑、担忧负面情绪显著降低ITP患者的生活质量,担忧情绪亦会加重ITP患者的疲劳症状,为ITP患者带来负面影响。情志因素直接影响ITP患者的生活质量,亦会通过影响疲劳症状间接影响ITP患者的生活质量。临床医生在遣方用药时应考虑到情志因素对ITP病机的影响,酌情佐用调畅情志的药物。

关键词：原发免疫性血小板减少症生活质量情志因素

rhTPO对原发免疫性血小板减少症患者CD4+CD25+CD127low调节性T细胞及IL-35表达影响的研究

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rhTPO对原发免疫性血小板减少症患者CD4+CD25+CD127low调节性T细...

作者：郭晓艳新乡医学院

学位级别：硕士

背景原发免疫性血小板减少症(ITP)是一种血液系统常见的抗体介导血小板破坏的自身免疫性出血性疾病。随着对其复杂发病机制的进一步探讨,越来越多研究发现T淋巴细胞亚群及相关细胞因子异常所致免疫耐受功能障碍也是ITP发病关键。研究发... 详细信息

背景原发免疫性血小板减少症(ITP)是一种血液系统常见的抗体介导血小板破坏的自身免疫性出血性疾病。随着对其复杂发病机制的进一步探讨,越来越多研究发现T淋巴细胞亚群及相关细胞因子异常所致免疫耐受功能障碍也是ITP发病关键。研究发现重组人血小板生成素(rh TPO)联合大剂量地塞米松治疗可纠正ITP患者T淋巴细胞亚群免疫调节紊乱,调控细胞因子网络失衡介导免疫耐受恢复,以提高治疗效果,但国内对rh TPO通过调节性T细胞(Treg)、IL-35发挥免疫耐受诱导作用的研究未见报道,本研究通过检测ITP患者大剂量地塞米松(HD-DXM)联合rh TPO及各单药治疗前后外周血CD4CD25CD127Treg细胞比例及血浆IL-35水平,探讨rh TPO在ITP治疗中发挥的免疫调节作用机制,评估rh TPO诱导免疫耐受的作用靶点,为该药治疗提供理论依据,为ITP免疫治疗提供新的干预靶点。目的对比分析三种治疗方案(地塞米松、rh TPO及地塞米松联合rh TPO)治疗前后ITP患者外周血CD4CD25CD127Treg细胞比例、血浆IL-35水平及血小板计数(Plt)变化,初步探究rh TPO作用于ITP患者发挥免疫调节的分子机制,评估rh TPO诱导免疫耐受的作用靶点。方法采集62例原发免疫性血小板减少症患者治疗前后外周血及20例健康正常人外周血,采用流式细胞术(FCM)检测分离后的外周血单个核细胞(PBMC)中Treg细胞比例;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测分离后的血浆中IL-35表达水平。结果1、与健康对照组比较,ITP组患者(地塞米松、rh TPO及地塞米松联合rh TPO三个治疗组)治疗前CD4CD25CD127Treg细胞、IL-35、Plt水平均显著降低(P性差异(χ=4.551,P=0.103),但地塞米松联合rh TPO组总有效率最高为90.48%,而地塞米松组和rh TPO组总有效率分别为62.50%和68.00%。9、ITP患者治疗前Plt计数与CD4CD25CD127Treg细胞比例及IL-35水平均呈显著正相关性关系(r=0.787,P性关系(r=0.713,P免疫负性调节因子IL-35的表达,介导恢复ITP患者血小板自身抗原免疫耐受功能,减少血小板破坏。2、地塞米松联合rh TPO治疗ITP患者具有协同作用,较地塞米松单药治疗能显著提高CD4CD25CD127Treg细胞、IL-35及Plt表达水平,提高ITP患者临床疗效。3、ITP患者治疗前,Treg细胞比例、IL-35水平及Plt计数三者两两之间均呈正相关。

关键词： IL-35 血小板计数 CD4+CD25+CD127low调节性T细胞原发免疫性血小板减少症

原发免疫性血小板减少症动物模型建立研究进展

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中华中医药学刊 2019年第12期37卷 2879-2883页

作者：徐静鲍计章周永明上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院血液内科

原发免疫性血小板减少症(Primary immune thrombocytopenia,ITP)是较为常见的自身免疫性出血性疾病。鉴于ITP发病机理目前尚不清晰,因此探讨人类ITP发病相近或相似的动物模型有助于对ITP发病机制的认识与治疗效果的评估。系统回顾ITP模... 详细信息

原发免疫性血小板减少症(Primary immune thrombocytopenia,ITP)是较为常见的自身免疫性出血性疾病。鉴于ITP发病机理目前尚不清晰,因此探讨人类ITP发病相近或相似的动物模型有助于对ITP发病机制的认识与治疗效果的评估。系统回顾ITP模型的发展过程,对不同时期ITP的主动诱导、被动诱导(包括:抗血小板和单、多克隆抗体诱导、过继转移)以及基因工程病理模型在ITP研究中的应用进行总结分析,为ITP的发病机制与药理学研究等提供研究的方法和工具。

关键词：原发免疫性血小板减少症动物模型

健脾滋肾泻火方治疗原发免疫性血小板减少症患者的临床疗效及机制研究

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时珍国医国药 2022年第11期33卷 2699-2702页

作者：李晓靖朱文伟汪凯李捷凯马小淋周永明上海中医药大学上海201203 上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院上海200437

目的探讨健脾滋肾泻火方治疗原发免疫性血小板减少症(ITP)患者的临床疗效及相关作用机制。方法将60例ITP患者随机分为治疗组和对照组,每组30例,对照组给予强的松治疗,治疗组在对照组基础上予健脾滋肾泻火方治疗,30天为一个疗程,连续治... 详细信息

目的探讨健脾滋肾泻火方治疗原发免疫性血小板减少症(ITP)患者的临床疗效及相关作用机制。方法将60例ITP患者随机分为治疗组和对照组,每组30例,对照组给予强的松治疗,治疗组在对照组基础上予健脾滋肾泻火方治疗,30天为一个疗程,连续治疗3个疗程,比较两组血小板计数、出血评分、疲劳评分、临床疗效、中医证候疗效,检测治疗前后ITP患者PBMC中PI3K、Akt、Th17、Treg及细胞因子IL-17、IL-10表达水平。采用流式细胞术检测Th17、Treg细胞的表达,ELISA法检测血清中IL-17、IL-10的水平,RT-PCR法检测PI3K、Akt的mRNA表达。结果两组治疗后,血小板计数显著升高,出血评分、疲劳评分明显改善,且治疗组优于对照组(P症状,提高血小板计数,缓解患者疲劳状况,改善生活质量,其机制可能与减低PI3K/Akt信号通路,调节Th17/Treg免疫平衡,降低炎症因子的表达,进而抑制免疫反应有关。

关键词：健脾滋肾泻火方原发免疫性血小板减少症 PI3K/Akt 免疫平衡

益元生血Ⅱ号方治疗原发免疫性血小板减少症（血热妄行证）的临床研究

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益元生血Ⅱ号方治疗原发免疫性血小板减少症（血热妄行证）的临床...

作者：汤雪莲甘肃中医药大学

学位级别：硕士

目的:观察益元生血Ⅱ号方联合醋酸泼尼松片治疗血热妄行型原发免疫性血小板减少症(primary immune thrombocytopenia,ITP)的疗效并评价其安全性,从而探索治疗ITP的新方法、新思路。方法:筛选2021年12月-2022年12月甘肃省中医院住院部辨... 详细信息

目的:观察益元生血Ⅱ号方联合醋酸泼尼松片治疗血热妄行型原发免疫性血小板减少症(primary immune thrombocytopenia,ITP)的疗效并评价其安全性,从而探索治疗ITP的新方法、新思路。方法:筛选2021年12月-2022年12月甘肃省中医院住院部辨证属于血热妄行证的ITP患者60例,所有患者均自愿参加研究并签署知情同意书,采用随机分组的方式将60例患者随机分为对照组和治疗组。两组患者治疗前性别、年龄、病程、血小板计数、出血评分、中医证候积分及生活质量评分均无明显差异(P>0.05),其中治疗组予益元生血Ⅱ号方联合醋酸泼尼松片治疗,对照组单用醋酸泼尼松片治疗,2周为一个疗程,治疗4个疗程。通过分析两组患者治疗前后血小板计数变化情况、治疗总有效率、出血评分、中医证候积分、ITP患者生活质量评估积分(ITP-PAQ)及不良反应发生率评估益元生血Ⅱ方治疗ITP(血热妄行证)的有效性及安全性,并应用SPSS26.0统计软件对数据进行统计学分析,认为P血小板药物,予以剔除,最终完成试验者58例(治疗组29例,对照组29例),研究结果如下:(1)血小板计数变化情况比较:治疗后两组血小板计数较治疗前均有所提升(P血小板计数提升的幅度更明显,但其差异无统计学意义(P>0.05);(2)临床总有效率比较:治疗组的总有效率为89.66%,对照组的总有效率为86.21%,与治疗组相比,对照组的总有效率更低,但其差异无统计学意义(P>0.05);(3)出血评分比较:治疗后两组患者的出血评分较治疗前均有所降低(P症状均有所改善(P0.05)。结论:应用益元生血Ⅱ号方联合醋酸泼尼松片治疗ITP(血热妄行证)可显著提高患者的血小板计数,提高临床疗效,改善患者的临床症状,提高生活质量,且无明显不良反应,具有极高的临床应用价值。

关键词：原发免疫性血小板减少症血热妄行证益元生血Ⅱ号方临床观察

艾曲波帕治疗成人原发免疫性血小板减少症疗效及安全性的系统评价

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艾曲波帕治疗成人原发免疫性血小板减少症疗效及安全性的系统评价

作者：张杏倩福建医科大学

学位级别：硕士

目的:评价艾曲波帕(eltrombopag)对于成人原发免疫性血小板减少症(ITP)的有效性及安全性。方法:通过Pubmed、Embaseh和Cochrane(截止至2021年12月),检索并选择艾曲波帕治疗ITP的随机对照试验(RCT)。纳入的比较为艾曲波帕比安慰剂、其他... 详细信息

目的:评价艾曲波帕(eltrombopag)对于成人原发免疫性血小板减少症(ITP)的有效性及安全性。方法:通过Pubmed、Embaseh和Cochrane(截止至2021年12月),检索并选择艾曲波帕治疗ITP的随机对照试验(RCT)。纳入的比较为艾曲波帕比安慰剂、其他血小板生成素激动剂。主要结局指标为血小板反应(治疗期内至少1次PLT≥50×10～9/L),次要结局指标包括任何出血症状、至少75%的治疗期间PLT≥50×10～9/L的患者、总体血小板反应以及需要抢救治疗事件。安全性指标为AE(包括:血栓栓塞/血栓形成、头痛等)及SAE。将由两名评价员独立进行筛选,评估各个研究存在的偏倚风险,并提取相关数据,偏倚风险评估参照Cochrane风险偏倚评估工具,即Review Manager 5.3软件进行数据分析。对于二分类变量数据,效应值使用比值比(OR)或相对危险度(RR)及95%可信区间(CI)表示。结果:本研究纳入9个RCTs,共900例,均为成人原发免疫性血小板减少症(ITP)的患者。其中6个RCTs(n=640)比较艾曲波帕与安慰剂,均报告了主要结局指标,显示艾曲波帕与安慰剂比较在血小板反应上优于安慰剂RR为4.15(3.00,5.75)。在次要结局指标方面,5个RCTs(n=640)报告了任何出血事件,显示艾曲波帕优于安慰剂,汇总的RR为0.77(0.69,0.87);2个RCTs(n=351)报告了至少75%的治疗期间PLT≥50×10～9/L的患者比例,显示艾曲波帕优于安慰剂,汇总的RR为6.88(2.88,16.48);2个RCTs(n=351)报告了需要抢救治疗事件,显示艾曲波帕优于安慰剂,RR为0.37(0.25,0.54);对于AE及SAE,艾曲波帕与安慰剂相比无明显差异。亚组分析显示在血小板反应上,对于黄种人,起始小剂量(12.5mg-25mg/d)艾曲波帕为其最佳治疗量;对于白人,显示随着剂量增加,血小板反应率更高,各剂量组均优于安慰剂;任何出血事件上显示随着剂量增加,出血事件随之减少,各组剂量均优于安慰剂,汇总的RR为0.63(0.46,0.88);AE及SAE随着艾曲波帕剂量增加未见明显变化。1个随机、双盲、多中心的RCT(n=96)比较艾曲波帕(50mg/d)与rh TPO(300u/kg/d),报告了主要结局指标,显示艾曲波帕与rh TPO比较在2周内的血小板反应上,艾曲波帕稍劣于rh TPO,RR为0.7(0.52,0.95);对于AE,两者相比无明显差别。3个RCTs(n=361)将艾曲波帕(50mg/d)与罗米司亭(1ug/kg/qw)间接比较,均为盲法研究,偏倚风险较低,汇总分析显示在总体血小板反应上罗米司亭优于艾曲波帕。结论:艾曲波帕与安慰剂比较能显著提高ITP患者的血小板反应,而且在任何出血事件、减少使用抢救药品、持续血小板增加上获益,严重不良反应和常见不良反应无显著增加。对于黄种人,起始小剂量艾曲波帕为其最佳治疗量;对于白人,较大剂量艾曲波帕的疗效可能优于较小剂量艾曲波帕;AE和SAE发生率随着艾曲波帕剂量增加未见明显变化。艾曲波帕在疗效上可能劣于rh TPO及罗米司亭。总之,艾曲波帕可以作为ITP二线治疗的重要选择。

关键词：艾曲波帕安慰剂 rhTPO 罗米司亭原发免疫性血小板减少症随机对照试验系统评价

mTOR通路参与原发免疫性血小板减少症免疫功能异常的机制研究

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mTOR通路参与原发免疫性血小板减少症免疫功能异常的机制研究

作者：相宇娇山东大学

学位级别：硕士

1.研究背景原发免疫性血小板减少症（Primary immune thrombocytopenia,ITP）是一种以血小板过度破坏和血小板生成减少为特征的自身免疫性疾病,成人ITP的患病率约为10/105[1],发病率为1.6-3.9/105/年[2]。ITP患者B细胞可以产生针对自身... 详细信息

1.研究背景原发免疫性血小板减少症（Primary immune thrombocytopenia,ITP）是一种以血小板过度破坏和血小板生成减少为特征的自身免疫性疾病,成人ITP的患病率约为10/105[1],发病率为1.6-3.9/105/年[2]。ITP患者B细胞可以产生针对自身血小板的自身反应性抗体,ITP患者体内血小板破坏主要由IgG抗体介导。抗血小板抗体可以通过补体依赖的细胞毒性参与血小板破坏[3,4],也可以作用于巨核细胞,影响巨核细胞的成熟、分化及血小板的生成[5,6]。利妥昔单抗通过与B细胞特异性表达的CD20相结合诱导B细胞裂解[7],但有超过40%的患者对利妥昔单抗治疗无反应[8],因此寻求调节B细胞自身免疫反应的新靶点对ITP的治疗具有重要意义。树突状细胞（Dendritic cells,DCs）作为机体主要的抗原呈递细胞[9]。ITP患者单核细胞源性树突状细胞（monocytes-derived dendritic cells,moDCs）能够吞噬凋亡血小板并刺激自身抗原反应性B细胞产生[10],提示DCs功能异常可能是ITP发生的重要因素,但其具体机制尚不明确。综上所述,本研究共分为2个部分。第一部分中,旨在利用转录组测序技术寻找调节ITP患者B细胞免疫反应的关键分子通路,探讨特异性分子靶向药物是否可以改善ITP患者B细胞自身免疫反应及其机制。第二部分中,通过对ITP患者moDCs进行转录组测序,探讨树突状细胞在ITP异常免疫反应中的作用及其机制,以期为ITP患者寻找新的治疗策略。2.研究目的（1）第一部分①通过检测ITP患者外周血B细胞分化状态、分化转录标志物、抗体分泌和抗原呈递共刺激分子,明确ITP患者外周血B细胞的免疫功能异常。②利用转录组测序技术,对ITP患者与正常人外周血B细胞进行生物信息学分析,寻找调节ITP患者B细胞免疫反应的关键分子通路。③探究特异性分子靶向药物对改善ITP患者外周血B细胞免疫功能异常的作用及机制。（2）第二部分利用转录组测序技术,对ITP患者与正常人moDCs进行生物信息学分析,寻找调节ITP患者moDCs免疫功能的关键分子通路。3.研究方法（1）第一部分①纳入24例单克隆抗体特异性血小板抗原固定实验阳性的ITP患者及性别、年龄相匹配的健康志愿者,分为ITP组和正常组,采用流式细胞术、聚合酶链式反应、酶联免疫吸附实验（Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）分析两组人群B细胞分化状态、分化转录标志物、抗体产生能力和抗原呈递共刺激分子的表达。②收集选取4例ITP患者及5例性别、年龄相匹配的健康志愿者外周血样本,分选CD19+B细胞进行转录组测序。③根据差异基因分析和富集分析结果,确定ITP患者外周血B细胞中表达异常的信号通路-mTOR信号通路,并采用蛋白免疫印迹和Protein Simple Wes技术验证mTOR信号通路在ITP患者外周血B细胞中表达情况。④采用CellTiter-Glo确定mTORC1特异性抑制剂雷帕霉素和mTORC1/mTORC2双重抑制剂Torin1对B细胞的半抑制浓度。加入1μg/ml CD40L、10ng/ml rhIL-4、2.5μg/ml CpG、1nM雷帕霉素或Torin-1培养CD19+B细胞,采用流式细胞术、聚合酶链反应和ELISA检测B细胞分化状态、分化转录标志物、抗体分泌和抗原呈递共刺激分子的表达。（2）第二部分①收集选取3例ITP患者及3例性别、年龄相匹配的健康志愿者外周血样本,分选CD14+单核细胞并在含有100ng/ml粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和50ng/ml白介素4的RPMI 1640培养基中培养5天,随后加入1μg/ml脂多糖继续培养2天以诱导moDCs成熟。②采用Trizol试剂提取细胞总RNA,采用琼脂糖凝胶电泳和超微量分光光度仪检测RNA完整性和纯度,并选取浓度大于0.2μg/ml,OD260/280在1.9-2.1之间的样品进行转录组测序。RNA文库构建、质检及转录组测序由北京诺禾致源科技有限公司使用Illumina Hiseq 平台完成。③根据差异基因分析和富集分析结果,确定ITP患者moDCs中表达异常的信号通路-mTORC1信号通路,并采用蛋白免疫印迹技术验证mTORC1信号通路在ITP患者moDCs中的表达情况。4.研究结果（1）第一部分①ITP患者外周血B细胞存在免疫功能亢进。ITP患者外周血中CD27+CD38+细胞（浆母细胞）比例显著增加,BLIMP1和IRF4的表达显著增加。ITP患者血浆中IgG和IgM抗体显著增多,且B细胞抗原呈递共刺激分子CD80和CD86表达增加。②生物信息学分析显示,ITP患者外周血B细胞基因富集于BP条目中的“靶向内质网蛋

关键词：原发免疫性血小板减少症 B细胞雷帕霉素靶蛋白雷帕霉素 Torin1 树突状细胞

从mRNA测序探究原发免疫性血小板减少症的外周血单个核细胞基因表达变化

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从mRNA测序探究原发免疫性血小板减少症的外周血单个核细胞基因表...

作者：洪佳乐新疆医科大学

学位级别：硕士

目的:采用mRNA测序的方法,运用高通量测序技术,对原发免疫性血小板减少症(ITP)患者以及健康人的外周血单个核细胞(PBMC)进行测序,得到各组mRNA表达信息并系统性地解析初诊ITP患者PBMC中的mRNA表达变化,通过qPCR验证与疾病明显相关的mRNA... 详细信息

目的:采用mRNA测序的方法,运用高通量测序技术,对原发免疫性血小板减少症(ITP)患者以及健康人的外周血单个核细胞(PBMC)进行测序,得到各组mRNA表达信息并系统性地解析初诊ITP患者PBMC中的mRNA表达变化,通过qPCR验证与疾病明显相关的mRNA,探究与ITP发病紧密联系的mRNA,为ITP发病机制中mRNA所起作用提供理论依据,探寻可能与ITP发生发展相关的免疫学机制及探寻潜在的靶基因。方法:本研究对ITP患者(n=4),健康成人(n=4)的PBMC行高通量mRNA测序。利用R语言计算机信息技术鉴定两组间表达差异基因(DEGs),Pvalue症反应(inflammatory response)、免疫应答(immune response)、固有免疫应答(innate immune response)、细胞吞噬(phagocytosis)等条目上;细胞组分(CC)方面,DEGs主要富集在细胞吞噬溶酶体(phagolysosome)、细胞外囊泡外泌体(extracellular exosome)、质膜(plasma membrane)、特异颗粒(specific granule)等条目上;分子功能(MF)方面,DEGs主要富集在糖基化终产物受体结合(RAGE receptor binding)、蛋白结合(protein binding)、免疫球蛋白G抗体结合(Ig G binding)、花生四烯酸结合(arachidonic acid binding)等条目上。KEGG通路富集分析显示DEGs主要富集在Toll样受体信号通路(Toll-like receptor signaling pathway)、FcγR介导的吞噬作用(Fc gam-ma R-mediated phagocytosis)、Natural killer cell mediated cytotoxicity(自然杀伤细胞介导的细胞毒性)等通路上。通过STRING在线蛋白互作网络图的构建以及Cytoscape软件可视化分析发现其中MAPK14、MAPK3、TNF、MYD88、IL-1β基因为连接度高hubgene。qPCR结果显示与健康对照组相比,MAPK14、MAPK3、TNF、MYD88的基因mRNA表达显著增高(P免疫学发病机制、以及探索诊疗靶点提供相关理论依据与新的方向。

关键词：原发免疫性血小板减少症外周血单个核细胞 mRNA测序 qPCR