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彗星荧光原位杂交技术在检测特定基因损伤与修复中的应用

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中华劳动卫生职业病杂志 2011年第5期29卷 384-386页

作者：张炳珍王志萍山东大学公共卫生学院流行病与卫生统计学研究所济南250012

彗星荧光原位杂交技术（fluorescence in situ hybridization in combination with the Comet assay，Comet—FISH）是彗星试验（Comet assay，又称单细胞凝胶电泳）和荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization，FISH）技术的结合，是一种在单细胞水平上检测特定基因损伤和修复的有效方法。彗星试验是一种相对简便、快速、敏感的检测遗传毒性的技术，它能有效地检测并定量分析细胞中DNA单、

关键词：荧光原位杂交技术损伤与修复彗星试验基因损伤检测单细胞凝胶电泳应用单细胞水平

华蟾素对乳腺癌细胞株MCF-7的杀伤作用研究

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中国药理学通报 2011年第1期27卷 37-41页

作者：马丽娜宋兵金花彭元蔡继业暨南大学光电信息与传感技术重点实验室广东广州510632 暨南大学化学系广东广州510632 暨南大学组织移植与免疫实验中心广东广州510632

目的研究华蟾素诱导人类乳腺癌MCF-7细胞的凋亡作用。方法利用CCK-8法检测华蟾素对乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制作用;用流式细胞术检测细胞的凋亡抑制率;利用倒置荧光显微镜观察细胞整体形态的变化;利用原子力显微镜(AFM)高分辨率、高灵... 详细信息

目的研究华蟾素诱导人类乳腺癌MCF-7细胞的凋亡作用。方法利用CCK-8法检测华蟾素对乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制作用;用流式细胞术检测细胞的凋亡抑制率;利用倒置荧光显微镜观察细胞整体形态的变化;利用原子力显微镜(AFM)高分辨率、高灵敏度的特点,从纳米尺度上进一步观察细胞形貌及超微结构的变化。结果 CCK-8结果显示,华蟾素对MCF-7细胞的生长有明显的抑制作用,且随着剂量的增加(6.25～50 mg.L-1)而增大,当浓度为50 mg.L-1时,抑制率达到(68.40±1.02)%。采用流式细胞术对细胞凋亡的检测结果也表明华蟾素浓度为50 mg.L-1时,细胞晚期凋亡率最大,可达到(55.5±1.2)%。AFM与对照组相比,药物作用后,细胞开始坍塌变矮、细胞变小,周围呈月牙状或环状,浓度最大时,细胞中间出现较大孔洞。结论华蟾素能有效抑制MCF-7细胞的生长增殖并诱导其凋亡。利用AFM在单细胞水平上分析华蟾素对MCF-7细胞的作用,使分析结果更加全面。

关键词：原子力显微镜华蟾素乳腺癌MCF-7细胞细胞凋亡超微结构单细胞水平高分辨率

活动性肺结核患者外周血单个核细胞表达T_H1/T_H2类细胞因子的特点

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中华微生物学和免疫学杂志 2005年第6期25卷 469-470页

作者：任涛蔡映云金美玲袁正宏复旦大学呼吸病研究所复旦大学上海医学院分子病毒实验室

结核病患者免疫细胞产生TH1类细胞因子的能力低下,而TH2类细胞因子表达各家报道不一[1-3].CD4+ T和CD8+ T细胞是结核病免疫中主要的效应细胞,也是细胞因子的主要来源.我们采用流式细胞仪检测CD4+ T和CD8+ T分泌IFN-γ和IL-4的能力,从单... 详细信息

结核病患者免疫细胞产生TH1类细胞因子的能力低下,而TH2类细胞因子表达各家报道不一[1-3].CD4+ T和CD8+ T细胞是结核病免疫中主要的效应细胞,也是细胞因子的主要来源.我们采用流式细胞仪检测CD4+ T和CD8+ T分泌IFN-γ和IL-4的能力,从单细胞水平探讨结核菌感染患者TH1/TH2型免疫反应的特点。

关键词： TH1/TH2类细胞因子外周血单个核肺结核患者细胞表达活动性 TH1类细胞因子 CD8^+T细胞 TH2型免疫反应 CD4^+T 流式细胞仪检测细胞因子表达结核病患者 IFN-γ 单细胞水平免疫细胞效应细胞 IL-4 感染患者结核菌

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单细胞凝胶电泳技术在运动医学中的应用

中国康复医学杂志 2009年第2期24卷 186-189页

作者：刘晓莉苏美华侯金芸北京师范大学体育与运动学院北京100875

单细胞凝胶电泳（single cell gel ***）又称彗星实验（comet assay），是近年来发展起来的一种在单细胞水平上检测DNA损伤与修复的新技术。SCGE实验最初由Rydbery和Johanson（1978）提出．以后经Ostling和Johanson（1984）及Singh（198... 详细信息

单细胞凝胶电泳（single cell gel ***）又称彗星实验（comet assay），是近年来发展起来的一种在单细胞水平上检测DNA损伤与修复的新技术。SCGE实验最初由Rydbery和Johanson（1978）提出．以后经Ostling和Johanson（1984）及Singh（1988）等对实验条件进行改良．使其具有简便快速、灵敏性高、重复性好、无需放射性标记等优点，目前已被广泛应用于临床药物筛选、肿瘤诊断与治疗、衰老和细胞凋亡机制的探讨以及遗传毒理学和生物监测等研究领域。

关键词：单细胞凝胶电泳技术运动医学细胞凋亡机制彗星实验 DNA损伤单细胞水平放射性标记遗传毒理学

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单细胞凝胶电泳图像分析软件的比较

毒理学杂志 2005年第2期19卷 141-143页

作者：邢彩虹李桂兰纪之莹高耘尹松年中国疾病预防控制中心职业卫生与中毒控制所北京100050

单细胞凝胶电泳技术(SCGE,又称彗星试验)是在单细胞水平上检测DNA链断裂损伤的敏感方法.随着彗星试验的发展,一些无法用肉眼测量的能更精确反应彗星水平的指标如尾矩、尾部DNA含量,随着彗星分析软件的出现而得到解决.国外一些免费彗星... 详细信息

单细胞凝胶电泳技术(SCGE,又称彗星试验)是在单细胞水平上检测DNA链断裂损伤的敏感方法.随着彗星试验的发展,一些无法用肉眼测量的能更精确反应彗星水平的指标如尾矩、尾部DNA含量,随着彗星分析软件的出现而得到解决.国外一些免费彗星分析软件的出现,如Sicion Image(以下简称Sicion)[1]和CASP[2]给科研工作人员带了极大方便.国内也出现了中文界面的彗星分析软件IMI[3].这些软件,尤其是上述2种免费软件目前国内未见使用报道.为了更方便地选择和使用这些软件,我们对以上这3种软件进行了比较.

关键词：分析软件电泳图像单细胞凝胶电泳技术 DNA链断裂损伤彗星试验单细胞水平 DNA含量敏感方法工作人员出现

精确自组装纳米标记分析方法在前列腺癌早期检测与预后中的应用研究

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生物技术通报 2016年第11期32卷 278-280页

作者：樊春海徐静娟刘庄鲁娜中国科学院上海应用物理研究所上海201800 南京大学化学化工学院南京210093 苏州大学纳米科学与工程学院苏州215123 纳米技术及应用国家工程研究中心上海200241

前列腺癌是男性生殖系统最常见的恶性肿瘤,在欧美国家已成为男性第一高发的肿瘤[1]。数据显示,中国随着老龄化社会的到来,近20年前列腺癌发病率增长超过10倍,年新发病例达330万人,已处于＂爆发性增长＂阶段。由于前列腺癌早期患者的5年... 详细信息

前列腺癌是男性生殖系统最常见的恶性肿瘤,在欧美国家已成为男性第一高发的肿瘤[1]。数据显示,中国随着老龄化社会的到来,近20年前列腺癌发病率增长超过10倍,年新发病例达330万人,已处于＂爆发性增长＂阶段。由于前列腺癌早期患者的5年生存率可达95%,提高前列腺癌早期检测水平的意义尤为重大。现有的早期检测技术主要是基于前列腺特异抗原（PSA）的检测。然而PSA筛查的假阳性高，而且难以区分良性前列腺病变与恶性肿瘤，其广泛应用随之带来了伦理学问题和巨大的争议。

关键词：早期检测自组装标记分析爆发性增长前列腺特异抗原前列腺病变数据显示男性生殖系统应用研究单细胞水平

鞘氨醇单胞菌GY2B降解菲过程中细胞表面性质及其活性的变化

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鞘氨醇单胞菌GY2B降解菲过程中细胞表面性质及其活性的变化

作者：张梦露华南理工大学

学位级别：硕士

多环芳烃(PAHs)作为环境中的典型持久性有机有毒污染物，对生态环境和人体健康危害极大，因而其修复治理研究引起了人们的关注。微生物降解具有处理形式多样、成本低、对环境影响小等优点，是去除环境中PAHs的主要途径，但目前的微生物... 详细信息

多环芳烃(PAHs)作为环境中的典型持久性有机有毒污染物，对生态环境和人体健康危害极大，因而其修复治理研究引起了人们的关注。微生物降解具有处理形式多样、成本低、对环境影响小等优点，是去除环境中PAHs的主要途径，但目前的微生物降解研究更多集中在污染物降解效率和细胞增殖等方面，只是从宏观的角度了解降解过程中整个系统的状况，无法反映降解过程中微生物个体细胞的变化特征。然而，微生物个体细胞的生理状态、代谢功能及繁殖能力，对于污染物降解过程的效果有着重要的意义，可对修复效果起到决定性的作用。因此，对降解过程中细菌个体细胞的状态进行研究能更好地了解微生物的降解机制，从而充分发挥微生物的降解能力。为此，本研究尝试结合流式细胞术与荧光染料检测高效菲降解菌GY2B（Sphingomonas sp. GY2B）降解菲过程中膜性质、细菌活性、生长状态等方面的变化，同时结合傅里叶红外光谱及Zeta电位检测分析技术等，探究不同的底物条件以及菲的降解产物对其降解菌GY2B个体细胞性质的影响，以了解降解过程中污染物对降解菌的影响，为更好地进行污染环境的微生物修复提供理论依据。主要研究结果如下： 1）流式细胞仪结合荧光染料可以广泛应用于环境微生物领域。其对细菌细胞膜通透性及其细胞所处的状态的检测，实现了在单细胞水平上更为深入的研究细菌，从而更好的了解细菌的降解过程。 2）在GY2B降解污染物菲的过程中，随着降解过程的进行，菲会不断对GY2B细菌细胞的表面作用，导致细胞膜通透性增大，膜结构受到一定的破坏。不同菲浓度条件下，随着降解的进行，GY2B细胞的膜通透性均有所增加。 3）当菲的初始浓度在一定范围之内时，膜通透性的增加将有利于GY2B菌对菲的降解。但随着污染物浓度的升高，菲对降解菌的膜通透性的作用逐渐增大，高浓度菲会使GY2B细胞膜发生肿胀现象，Zeta电位值降低，质子渗透率增大，通透性增大。当浓度积累到一定程度时会是细胞膜瞬间产生孔结构，膜完整性受到严重破坏，造成GY2B细菌细胞大量溶解及死亡。 4）当菲初始浓度较低时，随着降解过程的进行会产生中间代谢产物1-羟基-2-萘酸与水杨酸，但其浓度较小，并且随着降解的进行两种代谢产物最终被完全降解。在低浓度中间代谢产物条件下，1-羟基-2-萘酸、水杨酸这两种中间产物对GY2B菌的繁殖能力不会造成影响，反而可作为碳源以促进GY2B的繁殖，且降解过程中活性细胞所占比例大大增加。 5）当菲初始浓度较高时，随着降解过程的进行，中间代谢产物1-羟基-2萘酸大量累积，水杨酸在降解的过程中也会不断的积累，但其浓度较低。高浓度的降解产物对Sphingomonas ***2B具有毒性作用，可抑制其生长和代谢。1-羟基-2-萘酸体系中活性细胞所占的比例较水杨酸条件下小，这表明1-羟基-2-萘酸对GY2B的毒性较水杨酸更强。降解过程中1-羟基-2-萘酸的累积的作用会导致Sphingomonas ***2B大量死亡。水杨酸的累积浓度虽然较1-羟基-2-萘酸少，但其对GY2B菌也会产生一定的毒性作用，导致GY2B菌死亡，从而使得降解效率降低。

关键词：多环芳烃(PAHs) 流式细胞仪单细胞水平

同方学位论文库评论

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基础疫苗学会议报告

中国生物制品学杂志 1989年第1期2卷 46-49页

识别经过加工的抗原连同 MHC,对于激活抗原特异性 T 细胞来说是必要条件,但并非充分条件。还需要无抗原特异性的信号,即第二类辅助细胞。这种第二信号的本质尚未弄清,但它似不是 IL-1。β2IFN(或TAF)是首先考虑的对象。据报道,采用抗细... 详细信息

识别经过加工的抗原连同 MHC,对于激活抗原特异性 T 细胞来说是必要条件,但并非充分条件。还需要无抗原特异性的信号,即第二类辅助细胞。这种第二信号的本质尚未弄清,但它似不是 IL-1。β2IFN(或TAF)是首先考虑的对象。据报道,采用抗细胞因子单克隆抗体及一种改进的用酶联抗体显色的空斑试验。

关键词：疫苗学抗原特异性空斑试验单细胞水平单克隆抗体第二信号酶联抗体细胞因子免疫应答免疫原性

基于多点扫描拉曼光谱技术的微生物单细胞鉴定与分类研究

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基于多点扫描拉曼光谱技术的微生物单细胞鉴定与分类研究

作者：王钰中国科学院大学(中国科学院长春光学精密机械与物理研究所)

学位级别：硕士

拉曼光谱作为一种快速、简单、非侵入性、可重复性的实时监测工具,已被广泛用于微生物分析。细胞的拉曼光谱是位于激光焦点处全部生化成分的光谱信息的叠加。微生物大小不一,而激光光斑尺寸通常是恒定的。在单个微生物细胞尺寸大于激光... 详细信息

拉曼光谱作为一种快速、简单、非侵入性、可重复性的实时监测工具,已被广泛用于微生物分析。细胞的拉曼光谱是位于激光焦点处全部生化成分的光谱信息的叠加。微生物大小不一,而激光光斑尺寸通常是恒定的。在单个微生物细胞尺寸大于激光光斑尺寸的情况下,由于微生物的空间异质性,从细胞内单点采集的拉曼光谱不能捕捉到所有的生化信息,从而会影响微生物识别的准确率。在本文中,我们通过引入图像识别算法,开发了一种微生物单细胞拉曼光谱的多点扫描采集方法,可以充分采集微生物内所有生化成分信息。与单点拉曼光谱相比,多点扫描拉曼光谱具有较高的召回率(达到90%)和识别准确率(～96%)。被测的单个微生物细胞大小不一,而共聚焦拉曼设备的激光光斑不易改变,这一难题得以解决。结合广泛的统计分析工具,多点扫描共聚焦拉曼光谱可用于更准确地对不同分类级别的物种进行分类,这对物种鉴定具有重要意义。论文的研究内容以及取得的成果主要包括以下三个部分:(1)基于拉曼光谱的微生物空间异质性的研究,首先通过拉曼成像采集三种微生物(大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、酵母菌)的光谱数据,并对数据进行预处理得到三个微生物单细胞的拉曼图像。通过对三种微生物的拉曼成像数据分析以及采用多变量曲线分辨率-交替最小二乘法(Multivariate Curve ResolutionAlternating Least Squares,MCR-ALS)对拉曼成像数据进一步分析,结果都表明单个细胞不同位置的拉曼光谱存在微小差异,即微生物空间异质性。(2)针对微生物空间异质性的问题,提出了基于图像识别算法的扫描式共聚焦拉曼光谱技术,通过图像识别算法和高精度电动位移台的控制,使拉曼光谱可以在一次曝光时采集微生物的多点生化成分信息,来解决所测量的单个微生物细胞大小不一而共聚焦拉曼设备激光光斑不易改变这一挑战,使拉曼光谱可以成为单细胞真正的“指纹光谱”。(3)为了验证多点扫描共聚焦拉曼光谱技术可以充分获取细胞内部成分信息,有利于提高物种识别的准确率,对多种微生物的单点拉曼光谱和多点扫描拉曼光谱数据结合机器学习算法(SVM、LDA、KNN等)进行分析比较。结果表明,多点扫描共焦拉曼光谱可以全面描述细胞内的全部生化信息,与广泛的统计分析相结合,能够建立更可靠的微生物拉曼光谱数据库,在微生物鉴定和分类方面有很大的应用潜力。

关键词：多点扫描共聚焦拉曼光谱微生物空间异质性单细胞水平微生物鉴定