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中国预防兽医学报 2003年第1期25卷 65-68,76页

作者：殷月兰潘志明孟书霞黄金林焦新安扬州大学生物科学与技术学院江苏扬州225009 扬州大学畜牧兽医学院江苏扬州225009

以猪霍乱沙门氏菌作为包被抗原 ,利用沙门氏菌O7单克隆抗体酶结合物建立了竞争elisa方法检测猪霍乱沙门氏菌抗体。经过研究确定抗原包被浓度为 2×1 0 8CFU/ml,血清检测稀释度为 1∶1 6,酶标抗体浓度为 1∶70 0 ,包被液为碳酸盐缓冲液 (... 详细信息

以猪霍乱沙门氏菌作为包被抗原 ,利用沙门氏菌O7单克隆抗体酶结合物建立了竞争elisa方法检测猪霍乱沙门氏菌抗体。经过研究确定抗原包被浓度为 2×1 0 8CFU/ml,血清检测稀释度为 1∶1 6,酶标抗体浓度为 1∶70 0 ,包被液为碳酸盐缓冲液 ( 0 .0 5MpH9.6)。应用单抗竞争elisa和平板凝集试验 (PAT)同时对 5 0 6份血清进行猪霍乱抗体检测 ,PAT的检出率为 3 .60 % ,elisa检出率为 5 .75 % ,两者符合率达 96.4%。试验结果表明 ,elisa方法敏感性高 ,特异性强 ,稳定性和重复性好 ,操作简便。本方法的建立在猪群沙门氏菌感染的检疫、实验室诊断的标准化及流行病学调查方面具有应用价值。

关键词：单抗竞争elisa 应用猪霍乱沙门氏菌检测方法副伤寒

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Asia Ⅰ口蹄疫vp2蛋白单克隆抗体的制备及单抗竞争elisa方法的建立

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生物工程学报 2008年第9期24卷 1664-1669页

作者：向敏张克山卢顺蔡利军罗勇张建民何华王勤刚吴斌华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070

制备AsiaI口蹄疫病毒vp2单克隆抗体(mAb)并建立了单抗竞争elisa方法。用纯化的AsiaI型口蹄疫病毒vp2重组蛋白免疫BALB/c小鼠,将免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤SP2/0细胞融合,采用间接elisa和有限稀释法筛选杂交瘤细胞。分别用elisa、Western ... 详细信息

制备AsiaI口蹄疫病毒vp2单克隆抗体(mAb)并建立了单抗竞争elisa方法。用纯化的AsiaI型口蹄疫病毒vp2重组蛋白免疫BALB/c小鼠,将免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤SP2/0细胞融合,采用间接elisa和有限稀释法筛选杂交瘤细胞。分别用elisa、Western blotting检测mAb腹水的效价及其特异性。筛选到杂交瘤细胞2株,腹水效价均在100×29以上;以纯化后的AsiaI型口蹄疫病毒vp2重组蛋白作为抗原,利用AsiaI型口蹄疫病毒vp2单抗酶标物建立了竞争elisa方法用来检测AsiaI型口蹄疫抗体。临床应用表明,该方法与UBI公司的口蹄疫全病毒抗体检测试剂盒总符合率达89.0%,和荷兰赛迪公司的口蹄疫病毒LPB-elisa抗体检测试剂盒总符合率达86.5%。

关键词：口蹄疫单抗竞争elisa 单克隆抗体 vp2蛋白

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猪水肿毒素单抗竞争elisa试剂盒的研制及应用

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畜牧兽医学报 2009年第7期40卷 1054-1058页

作者：张建民吴斌赵战勤卢顺何华向敏李利娅张福涛陈焕春华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室武汉430070 华南农业大学兽医学院广州510642

本研究旨在建立猪水肿毒素抗体的快速检测方法。以纯化的猪水肿毒素A亚基基因片段的原核表达产物作为抗原免疫BALB/c小鼠制备单抗,并利用表达蛋白和猪水肿毒素A亚基单抗酶结合物建立了竞争elisa方法检测猪水肿毒素抗体。经过研究确定抗... 详细信息

本研究旨在建立猪水肿毒素抗体的快速检测方法。以纯化的猪水肿毒素A亚基基因片段的原核表达产物作为抗原免疫BALB/c小鼠制备单抗,并利用表达蛋白和猪水肿毒素A亚基单抗酶结合物建立了竞争elisa方法检测猪水肿毒素抗体。经过研究确定抗原包被浓度为0.32μ***-1,待检血清最佳稀释度为1∶2,酶标单抗工作浓度为1∶3200,血清抑制率大于40%为阳性。应用单抗竞争elisa和细胞毒性中和试验同时对60份血清进行猪水肿毒素抗体检测,竞争elisa的检出率为33.8%,细胞毒性中和试验检出率为30.9%,两者符合率达88.2%。试验结果表明,该elisa方法特异性强,敏感性高,稳定性和重复性好,操作简便。本方法的建立在实验室诊断的标准化、猪水肿病疫苗免疫效果的评价及流行病学调查方面具有较高的应用价值。

关键词：猪水肿毒素单克隆抗体单抗竞争elisa 抗体检测

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检测多杀性巴氏杆菌毒素抗体的单抗竞争elisa方法的建立

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农业生物技术学报 2008年第4期16卷 555-561页

作者：卢顺向敏吴斌赵战勤汤细彪但汉并张建民何华陈焕春华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室

用纯化的产毒素多杀性巴氏杆菌(toxigenie Pasteurella multocida,T~+Pm)毒素基因片段的原核表达产物免疫小鼠(Mus muslucus)制备单抗,并利用表达蛋白和辣根过氧化物酶(HRP)标记的单抗AH12建立了竞争elisa方法检测多杀性巴氏杆菌毒素抗... 详细信息

用纯化的产毒素多杀性巴氏杆菌(toxigenie Pasteurella multocida,T~+Pm)毒素基因片段的原核表达产物免疫小鼠(Mus muslucus)制备单抗,并利用表达蛋白和辣根过氧化物酶(HRP)标记的单抗AH12建立了竞争elisa方法检测多杀性巴氏杆菌毒素抗体。经实验确定抗原包被浓度223 ng/mL,待检血清最佳稀释度1∶2,酶标单抗AH12工作浓度1∶3 200,血清抑制率大于50%为阳性。稳定性试验表明,批间和批内变异系数均小于10%。应用竞争elisa和细胞毒性中和试验同时检测50份已知血清和82份未知血清,已知血清检测结果显示两者阳性符合率为90%,阴性符合率为100%;未知血清检测结果显示竞争elisa的检出率为40.2%,细胞毒性中和试验检出率为36.6%,两者符合率达91.5%。表明所建立的单抗竞争elisa方法具有敏感、特异、稳定和简便等特点,在实验室诊断的标准化、猪群萎缩性鼻炎疫苗免疫效果的评价及流行病学调查方面具有应用价值。

关键词：多杀性巴氏杆菌毒素单克隆抗体单抗竞争elisa 抗体检测

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