检索结果-南通市图书馆

作者：李言言西北农林科技大学

学位级别：硕士

无论是对于哺乳羔羊,还是以羊奶粉为营养的人类而言,山羊酪蛋白都是最关键的营养成分。另外,羊乳酪蛋白合成和分泌的水平,也是反映山羊乳腺上皮细胞生理功能状态的重要指标之一。因而,测定山羊酪蛋白,不仅对于准确评估山羊乳汁干物质含... 详细信息

无论是对于哺乳羔羊,还是以羊奶粉为营养的人类而言,山羊酪蛋白都是最关键的营养成分。另外,羊乳酪蛋白合成和分泌的水平,也是反映山羊乳腺上皮细胞生理功能状态的重要指标之一。因而,测定山羊酪蛋白,不仅对于准确评估山羊乳汁干物质含量、确定羊奶加工产品质量,而且对评估山羊乳腺生理状态、乳腺上皮细胞的鉴定和功能鉴定等都具有极其重要的理论和应用价值。以单克隆抗体为工具建立的蛋白质定性和定量测定技术是蛋白质测定中最常用、最普遍、最科学的技术,但这一技术的前提条件是必须研制出检测靶蛋白的单克隆抗体。本研究以山羊乳为材料,采用蛋白质分离技术对羊乳酪蛋白进行了分离,以纯化的酪蛋白为抗原,免疫6周龄BALB/c小鼠,建立酪蛋白抗体的ELISA测定技术,测定免疫小鼠的酪蛋白抗体效价,采用常规的单克隆抗体制备技术,用免疫小鼠脾细胞和SP2/0细胞制备筛选出分泌抗酪蛋白单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞,并对单克隆抗体按照常规要求指标进行鉴定,最后初步探讨研制的αs1酪蛋白单克隆抗体在一些检测技术中应用的可行性。研究获得如下结果:1.获得了纯化的山羊酪蛋白和相应的免疫血清。2.山羊酪蛋白优化包被浓度为10μg/mL,包被时间为4℃包被12h,免疫血清反应条件是37℃,60min,ELISA测定抗山羊酪蛋白抗体能够获得稳定结果。3.小鼠经过4次免疫后,免疫血清效价可以达到1:10。4.获得一株杂交瘤,命名为5B,其分泌的单克隆抗体特异性识别山羊酪蛋白。5.5B杂交瘤细胞培养上清效价为1:2,未纯化腹水效价为1:10。***-blot结果显示单抗5B杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体特异性识别山羊αs1-酪蛋白。本研究成功获得了1株杂交瘤细胞,其分泌的单克隆抗体特异性识别羊乳αs1-酪蛋白。

关键词：山羊酪蛋白酶联免疫吸附实验免疫试验 Western-blot 单克隆抗体鉴定

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抗GSTAl单克隆抗体的制备与鉴定

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内蒙古医学杂志 2007年第9期39卷 1038-1042页

作者：王志刚乌云达来关静赤峰市医院药局内蒙古赤峰024000

目的:制备鼠抗人谷胱甘肽S转移酶A1(GSTAI)的单克隆抗体(mAb),并进行特性鉴定。方法:用纯化后的GSTAl融合蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠,采用常规的细胞融合技术制备抗GSTAl的单克隆抗体(mAb)。用ELISA法测定鼠抗人GSTA1血清的效价;用West... 详细信息

目的:制备鼠抗人谷胱甘肽S转移酶A1(GSTAI)的单克隆抗体(mAb),并进行特性鉴定。方法:用纯化后的GSTAl融合蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠,采用常规的细胞融合技术制备抗GSTAl的单克隆抗体(mAb)。用ELISA法测定鼠抗人GSTA1血清的效价;用Western blot方法鉴定抗血清的特异性。结果:筛选到l株可稳定分泌抗人GSTAlmAb的细胞株。腹水效价为12 800。Western blot显示在相对分子量(Mr)约25KD处出现特异性条带。说明制备的mAb可特异地识别成人肝细胞中相对分子量(Mr)约25KD的GST-GSTA1。结论:获得一株能特异性识别抗人GSTAI的单克隆抗体,可用于肝损伤性疾病的诊断。

关键词：谷胱甘肽S转移酶A1 单克隆抗体鉴定 Western blotting

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伪狂犬病毒UL31蛋白单克隆抗体制备

伪狂犬病毒UL31蛋白单克隆抗体制备

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作者：王鲁方河南农业大学

学位级别：硕士

猪伪狂犬病毒病(Pseudorabies,PR)是由伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)引起的猪急性传染病;PRV对各个年龄阶段的猪均可感染,发病猪的主要表现有发热、厌食、呼吸道症状、皮肤奇痒、妊娠母猪繁殖障和仔猪角弓反张等现象。并且PRV感... 详细信息

猪伪狂犬病毒病(Pseudorabies,PR)是由伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)引起的猪急性传染病;PRV对各个年龄阶段的猪均可感染,发病猪的主要表现有发热、厌食、呼吸道症状、皮肤奇痒、妊娠母猪繁殖障和仔猪角弓反张等现象。并且PRV感染宿主范围广泛,例如牛、羊、野猪、狐狸、浣熊、犬类、家兔、啮齿动物等,并且有报道发现人感染PRV的病例,PRV具有跨物种传播并感染人类的风险,我国已将伪狂犬病列为二类动物疫病,因此PRV致病机制还有待进一步深入研究。在伪狂犬病毒研究过程中发现UL31蛋白与UL34蛋白互作形成复合物定位于细胞核核膜,对PRV完成复制后出核起重要的作用;但目前为止U31蛋白在其中的作用机制尚未完全明确,因此展开了UL31蛋白单克隆抗体的研究,为UL31蛋白的研究奠定基础。为了制备PRV UL31蛋白的单克隆抗体,本研究首先利用原核表达系统制备了His-UL31重组蛋白,将纯化的His-UL31重组蛋白进行Western blot鉴定,His-UL31重组蛋白均能与His单克隆抗体特异性结合。用His-UL31蛋白作为包被抗原,包被浓度为8μg/m L,PRV感染的猪血清稀释度达到1:25 600仍可检测,建立了可特异性检测UL31抗体的间接ELISA方法。将His-UL31作为抗原来免疫12周龄雌性BALB/c小鼠,经3次免疫后取小鼠脾脏分离脾细胞并与SP2/0细胞进行融合。经4次间接ELISA方法筛选后,获得1株能稳定分泌抗UL31蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,命名为UL31 5-11。对SP2/0细胞的染色体数目和UL31 5-11单克隆细胞进行计数,SP2/0细胞的染色体数目平均约为65条,UL315-11单克隆细胞染色体数目平均约为110条,是两亲本染色体数目之和。取杂交瘤细胞上清进行单克隆抗体亚型鉴定,确定该抗体亚型为Ig M。将单克隆细胞以每只小鼠5×10个的数量进行腹腔注射,最终获得大批量带有UL31 5-11抗体的腹水,利用辛酸-低温乙醇沉淀法获得纯化腹水,得到MAb 5-11,最后通过间接ELISA方法检测单克隆抗体效价为1:5120。通过间接免疫荧光试验、蛋白印迹分析和免疫组化试验验证MAb 5-11具有良好的特异性和反应原性。本研究成功制备了PRV UL31的单克隆抗体,为进一步研究UL31蛋白的功能与结构奠定了基础。

关键词：伪狂犬病毒 UL31蛋白单克隆抗体单克隆抗体鉴定

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