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谷氨酰胺通过内质网应激途径对新生大鼠高氧肺损伤的保护作用

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吉林大学学报（医学版） 2020年第1期46卷 7-13,I0001页

作者：王叶王红张书剑姬华祎金正勇延边大学附属医院儿科吉林延吉133000 吉林大学中日联谊医院儿科吉林长春130033

目的:探讨谷氨酰胺(GLN)通过内质网应激(ERS)途径对高氧诱导新生大鼠肺损伤的保护作用,并阐明其作用机制。方法:足月新生Wistar大鼠90只,随机分为对照组(吸入氧浓度为21%)、高氧组(吸入氧浓度>85%)和高氧+GLN组(吸入氧浓度>85%且腹腔内... 详细信息

目的:探讨谷氨酰胺(GLN)通过内质网应激(ERS)途径对高氧诱导新生大鼠肺损伤的保护作用,并阐明其作用机制。方法:足月新生Wistar大鼠90只,随机分为对照组(吸入氧浓度为21%)、高氧组(吸入氧浓度>85%)和高氧+GLN组(吸入氧浓度>85%且腹腔内注射GLN,剂量为0.75g·kg^-1·d^-1),每组30只。实验开始第3、7和14天测定大鼠体质量和肺组织含水量,采用HE染色法检测大鼠肺组织形态表现,氯化硝基四氮唑蓝(NBT)法测定肺组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性,硫代巴比妥酸(TBA)法测定大鼠肺组织中丙二醛(MDA)水平,蛋白免疫印记(Western blotting)法测定大鼠肺组织中半胱氨酸蛋白酶12(Caspase-12)、葡萄糖调节蛋白78 (GRP78)、生长抑制DNA损害基因153 (GADD153)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达水平。结果:实验第3、7和14天,与同时间对照组比较,高氧组大鼠体质量明显降低(P12、GRP78、GADD153和Bax蛋白表达水平明显升高(P蛋白表达水平和Bcl-2/Bax比值明显降低(P12、GRP78、GADD153和Bax蛋白表达水平明显降低(P蛋白表达水平和Bcl-2/Bax比值明显升高(P12和Bax蛋白表达水平,上调Bcl-2蛋白表达水平而发挥保护作用。

关键词：高氧肺损伤新生大鼠谷氨酰胺内质网应激半胱氨酸蛋白酶12 生长抑制DNA损害基因153 葡萄糖调节蛋白78 B细胞淋巴瘤-2 Bcl-2相关X蛋白

二甲双胍对2型糖尿病大鼠海马ATF6和Caspase12表达的影响

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中华内分泌代谢杂志 2018年第7期34卷 594-597页

作者：周玉梅郭银森房辉徐刚刘晓爽郝向波甄艳凤华北理工大学研究生院唐山063000 唐山市工人医院内分泌科唐山市工人医院烧伤科华北理工大学基础医学院、河北省慢性疾病重点实验室、唐山市慢性病临床基础研究重点实验室

目的探讨二甲双胍对2型糖尿病大鼠海马活化转录因子6（Activating transcription factor-6，ATF6）和半胱氨酸蛋白酶12（Caspase12）表达的影响。方法将随机血糖≥11.1 mmol/L的GK雄性大鼠分别予以生理盐水和二甲双胍（85 mg·kg－1·d... 详细信息

目的探讨二甲双胍对2型糖尿病大鼠海马活化转录因子6（Activating transcription factor-6，ATF6）和半胱氨酸蛋白酶12（Caspase12）表达的影响。方法将随机血糖≥11.1 mmol/L的GK雄性大鼠分别予以生理盐水和二甲双胍（85 mg·kg－1·d－1）灌胃处理，连续给药8周，每组10只，选取Wistar雄性大鼠为正常组（n＝10）。测定大鼠在给药8周后体重、空腹血糖状况，观察海马CA1区组织HE染色细胞形态，免疫组织化学染色观察海马ATF6、Caspase12表达。结果与正常组相比，模型组和二甲双胍组的体重均降低（P〈0.05），但模型组和二甲双胍组体重差异无统计学意义（P〉0.05）。与正常组相比，模型组和二甲双胍组的空腹血糖显著升高（P〈0.05），二甲双胍组较模型组空腹血糖显著降低（P〈0.05）。模型组和二甲双胍组海马CA1区正常神经细胞较对照减少（均P〈0.05），尤以模型组更为明显。与正常组相比，模型组和二甲双胍组ATF6、Caspase12蛋白表达明显增多（均P〈0.05），二甲双胍组较模型组ATF6、Caspase12蛋白表达明显减少（均P〈0.05）。结论二甲双胍可减少2型糖尿病大鼠海马ATF6和Caspase12的表达，该作用可能与其脑保护作用有关。

关键词：二甲双胍糖尿病,2型活化转录因子6 半胱氨酸蛋白酶12

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应力诱导细胞凋亡过程中活性氧与内质网应激作用机制的研究

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应力诱导细胞凋亡过程中活性氧与内质网应激作用机制的研究

作者：刘超青岛大学

学位级别：硕士

目的:探讨在机械应力诱导软骨细胞凋亡的过程中,细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)与内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)表达情况及两者在此作用过程中的相互作用关系方法:分离培养人膝关节软骨细胞,用应力加载系... 详细信息

目的:探讨在机械应力诱导软骨细胞凋亡的过程中,细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)与内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)表达情况及两者在此作用过程中的相互作用关系方法:分离培养人膝关节软骨细胞,用应力加载系统分别将培养的细胞加载0h,6h,12h,24h和48h,分别在各受力组中加入抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)和半胱氨酸蛋白酶12(caspase12)特异性抑制剂Z-ATAD-FMK作为抑制剂组,应用RT-PCR检测各组细胞中凋亡相关基因Bcl-2、Bcl-2相关x蛋白(Bcl,associated X protein,Bax)及caspase12 m RNA表达量;western blot检测各组细胞中Caspase-12蛋白表达量;DCFH-DA法检测细胞中ROS的含量;流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:RT-PCR检测6 h受力组Bax和caspase-12相对表达量增加,24 h达峰值,48 h有所回降,而Bcl-2相对表达量6 h后开始下降,12 h降到最低,24 h开始回升;ROS含量结果检测6h受力组表达量增加,24h达到峰值,48h有所回落;NAC抑制剂组ROS、Bax、caspase-12表达量均下降,Bcl-2升高。Z-ATAD-FMK抑制剂组caspase-12表达量下降,而ROS表达量不变,Western-Blot检测caspase-12蛋白表达与相应基因表达趋势相一致。凋亡检测结果与受力组caspase12表达趋势相似:6 h受力组凋亡率开始增加,24 h达峰值,48 h凋亡率有所回降;结论:机械应力可激活内质网应激途径介导软骨细胞凋亡,而且在此过程中,活性氧可能作为内质网应激上游信号分子参与其中。

关键词：周期性张应力内质网应激活性氧软骨细胞半胱氨酸蛋白酶12

Caspase12和Caspase3在内质网应激介导的HCC细胞凋亡中的作用

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贵州医科大学学报 2022年第2期47卷 197-202页

作者：温静静董玉娟王大壮王世凯陈红芳潍坊市益都中心医院病理科山东潍坊262500 潍坊市益都中心医院肝胆外科山东潍坊262500

目的探讨Caspase12与Caspase3的表达变化在内质网应激(ERS)介导的肝细胞肝癌(HCC)发生细胞凋亡过程中的作用。方法选取25例临床病理分级为Ⅰ-Ⅱ级(高分化)的HCC组织作为HCCⅠ-Ⅱ级组、25例Ⅲ-Ⅳ级(低分化)HCC组织作为HCCⅢ-Ⅳ级组,分别... 详细信息

目的探讨Caspase12与Caspase3的表达变化在内质网应激(ERS)介导的肝细胞肝癌(HCC)发生细胞凋亡过程中的作用。方法选取25例临床病理分级为Ⅰ-Ⅱ级(高分化)的HCC组织作为HCCⅠ-Ⅱ级组、25例Ⅲ-Ⅳ级(低分化)HCC组织作为HCCⅢ-Ⅳ级组,分别各取25例癌旁组织作为癌旁对照组;采用原位未端标记法(TUNEL)法检测各组肝组织的细胞凋亡情况,免疫组织化学法、Western Blot检测各组肝组织中Caspase12、Caspase3及GRP78蛋白表达,Real-time PCR检测各组肝组织中Caspase 12、Caspase 3及GRP 78 mRNA表达水平。结果与相应癌旁对照组比较,TUNEL法检测结果表明,HCCⅠ-Ⅱ级、Ⅲ-Ⅳ级组细胞的凋亡数目升高(P蛋白及mRNA表达增加(P12蛋白及mRNA表达在各组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论ERS参与了HCC发展过程中的细胞凋亡,且是通过介导Caspase12以外的信号通路激活Caspase3执行的细胞凋亡。

关键词：内质网应激肝细胞肝癌半胱氨酸蛋白酶12 半胱氨酸蛋白酶3 细胞凋亡

布雷菲德菌素A诱导人肝癌细胞凋亡的体外研究

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毒理学杂志 2023年第5期37卷 398-402,408页

作者：高文婷李明虹李丹刘艳飞李星道刘希冲白剑英山西医科大学公共卫生学院山西太原030001

目的探讨布雷菲德菌素A(Brefeldin A,BFA)对人肝癌细胞HepG2细胞凋亡的影响。方法用完全培养基(阴性对照组)、0.1%DMSO、0.25 mg/L BFA、1 mg/L衣霉素(Tunicamycin,TM)和0.25 mg/L BFA+1 mg/L TM处理HepG2细胞24 h,MTT法测定细胞活性,流式细胞术检测细胞各组凋亡率,吖啶橙检测试剂盒(AO荧光染色试剂)检测细胞凋亡小体,Western blot法检测细胞内凋亡相关蛋白的表达水平,qRT-PCR法检测细胞内凋亡相关基因的表达。结果形态学观察发现,与阴性对照组相比,0.25 mg/L BFA组细胞明显变得稀疏。细胞活性实验发现0.25 mg/L BFA组,0.25 mg/L BFA与1 mg/L TM联合处理组细胞存活率均明显降低(F=59.766,P蛋白水平来看,与对照组相比,0.25 mg/L BFA组和0.25 mg/L BFA+1 mg/L TM联合组硬酯酰辅酶A去饱和酶1(stearoyl-CoA desaturase 1,SCD1)蛋白表达明显减少,甚至无法检出,聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶-1(poly-ADP-ribose polymerase-1,PARP-1)、半胱氨酸蛋白酶12(cysteine aspartic acid specific protease-12,Caspase-12)蛋白表达升高,天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(cysteine aspartic acid specific protease-3,Caspase-3)活性形式cleaved Caspase-3被检出。基因检测结果显示,与对照组相比,0.25 mg/L BFA+1 mg/L TM联合组SCD1 mRNA表达水平升高(F=19.229,P12和Caspase-3 mRNA表达水平均明显升高(F=627.475,F=68.640,F=238.742,P蛋白表达,且促进人肝癌细胞凋亡,1 mg/L TM可增强其凋亡诱导作用。

关键词：布雷菲德菌素A 肝癌细胞硬脂酰辅酶A去饱和酶1 细胞凋亡半胱氨酸蛋白酶12

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活性氧激活内质网诱导软骨细胞凋亡的研究

中华临床医师杂志（电子版） 2017年第4期11卷 591-595页

作者：刘超夏长所李晓飞金丹凤吕成昱青岛大学医学院附属医院关节外科山东青岛266003 青岛市海慈医疗集团儿二科山东青岛266000

目的探讨应力诱导的人软骨细胞凋亡过程中活性氧(ROS)与内质网应激(ERS)的作用关系。方法分离培养人膝关节软骨细胞,应用细胞牵张力加载系统对各组软骨细胞分别加载0 h、6 h、12 h和24 h,在各受力组中加入抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)... 详细信息

目的探讨应力诱导的人软骨细胞凋亡过程中活性氧(ROS)与内质网应激(ERS)的作用关系。方法分离培养人膝关节软骨细胞,应用细胞牵张力加载系统对各组软骨细胞分别加载0 h、6 h、12 h和24 h,在各受力组中加入抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)作为抑制剂组。RT-PCR和Western blot检测各组细胞中内质网应激标志因子Caspase-12的表达;DCFH-DA法检测细胞中ROS的含量;流式细胞术检测细胞凋亡率,SPSS 17.0统计软件处理实验数据,组间比较采用t检验。结果 RT-PCR和Western blot检测Caspase-12结果显示:2 h表达量开始增加;24 h达峰值;NAC抑制剂组,与受力组相比,表达明显降低(P<0.05);DCFH-DA检测ROS结果显示:受力2 h后含量明显增加,24 h达峰值;NAC抑制剂组,相较于受力组,明显降低(P<0.05);细胞凋亡率检测结果显示:受力2 h后凋亡率开始增加,24 h达峰值,而NAC抑制剂组,与受力组相比,显著下调(P<0.01)。结论应力诱导软骨细胞凋亡过程中,ROS可能作为上级信号激活内质网应激途径参与软骨细胞凋亡。

关键词：周期性张应力内质网应激活性氧软骨细胞半胱氨酸蛋白酶12