布雷菲德菌素A诱导人肝癌细胞凋亡的体外研究

作     者：高文婷 李明虹 李丹 刘艳飞 李星道 刘希冲 白剑英 GAO Wen-ting;LI Ming-hong;LI Dan;LIU Yan-fei;LI Xing-dao;LIU Xi-chong;BAI Jian-ying

作者机构：山西医科大学公共卫生学院山西太原030001 

出 版 物：《毒理学杂志》 (Journal of Toxicology)

年 卷 期：2023年第37卷第5期

页      面：398-402,408页

学科分类：100405[医学-卫生毒理学] 1004[医学-公共卫生与预防医学(可授医学、理学学位)] 1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(30972445) 山西省自然科学基金(202203021211231) 

主　　题：布雷菲德菌素A 肝癌细胞 硬脂酰辅酶A去饱和酶1 细胞凋亡 半胱氨酸蛋白酶12 

摘      要：目的探讨布雷菲德菌素A(Brefeldin A,BFA)对人肝癌细胞HepG2细胞凋亡的影响。方法用完全培养基(阴性对照组)、0.1%DMSO、0.25 mg/L BFA、1 mg/L衣霉素(Tunicamycin,TM)和0.25 mg/L BFA+1 mg/L TM处理HepG2细胞24 h,MTT法测定细胞活性,流式细胞术检测细胞各组凋亡率,吖啶橙检测试剂盒(AO荧光染色试剂)检测细胞凋亡小体,Western blot法检测细胞内凋亡相关蛋白的表达水平,qRT-PCR法检测细胞内凋亡相关基因的表达。结果形态学观察发现,与阴性对照组相比,0.25 mg/L BFA组细胞明显变得稀疏。细胞活性实验发现0.25 mg/L BFA组,0.25 mg/L BFA与1 mg/L TM联合处理组细胞存活率均明显降低(F=59.766,P0.05)。流式细胞仪分析发现,0.25 mg/L BFA组,0.25 mg/L BFA与1 mg/L TM联合处理组细胞早期凋亡率明显升高(F=20.738,P0.05)。AO凋亡小体检测发现,0.25 mg/L BFA组和0.25 mg/L BFA+1 mg/L TM联合组人肝癌细胞HepG2细胞内出现核固缩现象。从蛋白水平来看,与对照组相比,0.25 mg/L BFA组和0.25 mg/L BFA+1 mg/L TM联合组硬酯酰辅酶A去饱和酶1(stearoyl-CoA desaturase 1,SCD1)蛋白表达明显减少,甚至无法检出,聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶-1(poly-ADP-ribose polymerase-1,PARP-1)、半胱氨酸蛋白酶12(cysteine aspartic acid specific protease-12,Caspase-12)蛋白表达升高,天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(cysteine aspartic acid specific protease-3,Caspase-3)活性形式cleaved Caspase-3被检出。基因检测结果显示,与对照组相比,0.25 mg/L BFA+1 mg/L TM联合组SCD1 mRNA表达水平升高(F=19.229,P0.05);0.25 mg/L BFA组和0.25 mg/L BFA+1 mg/L TM联合组PARP-1、Caspase-12和Caspase-3 mRNA表达水平均明显升高(F=627.475,F=68.640,F=238.742,P0.05)。结论0.25 mg/L BFA可抑制SCD1蛋白表达,且促进人肝癌细胞凋亡,1 mg/L TM可增强其凋亡诱导作用。