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半夏泻心汤对溃疡性结肠炎大鼠NLRP3/Caspase-1细胞焦亡信号通路的影响

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中国实验方剂学杂志 2022年第16期28卷 29-34页

作者：赵卓刘林宋囡杨莹韩晓伟辽宁中医药大学沈阳110847 辽宁中医药大学附属医院沈阳110032

目的:探讨半夏泻心汤(BXT)对溃疡性结肠炎(UC)大鼠细胞焦亡通路NOD样受体蛋白3(NLRP3)/胱天蛋白酶^(-1)(Caspase^(-1))及其下游因子的影响,阐释BXT治疗UC的作用机制。方法:将SD大鼠随机分为正常组、UC模型组、BXT低剂量组6.3 g·kg^(-1)... 详细信息

目的:探讨半夏泻心汤(BXT)对溃疡性结肠炎(UC)大鼠细胞焦亡通路NOD样受体蛋白3(NLRP3)/胱天蛋白酶^(-1)(Caspase^(-1))及其下游因子的影响,阐释BXT治疗UC的作用机制。方法:将SD大鼠随机分为正常组、UC模型组、BXT低剂量组6.3 g·kg^(-1)·d^(-1)、BXT高剂量组12.6 g·kg^(-1)·d^(-1)、柳氮磺吡啶(SASP)组0.42 g·kg^(-1)·d^(-1),每组各7只。依据分组灌胃大鼠2.5%浓度的葡聚糖硫酸钠盐(DSS)溶液10 d建立UC模型后,灌胃给药7 d。实验期间观察大鼠一般状态,给药期间统计疾病活动指数(DAI)评分,实验结束后,采集结肠组织进行苏木素-伊红(HE)染色观察病理学改变,以观察BXT疗效。实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测结肠组织NLRP3、Caspase^(-1)、消皮素D(GSDMD)、白细胞介素(IL)^(-1)βmRNA转录水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测结肠组织NLRP3、Caspase^(-1)、GSDMD、IL^(-1)β蛋白表达情况,以探讨BXT的治疗机制。结果:与正常组比较,UC模型组大鼠DAI评分明显升高,结肠组织出现病理学改变,结肠组织NLRP3、Caspase^(-1)、GSDMD、IL^(-1)βmRNA的表达及蛋白水平明显上调(P<0.05,P<0.01);与UC模型组比较,各给药组大鼠DAI评分显著降低,结肠组织病理学改变得到改善;BXT给药组结肠组织NLRP3、Caspase^(-1)、GSDMD、IL^(-1)βmRNA及蛋白的表达水平明显下调或趋于下调,以BXT低剂量组效果最佳(P<0.05,P<0.01)。结论:BXT可通过调控NLRP3/Caspase^(-1)通路抑制细胞焦亡,缓解溃疡性结肠炎大鼠的炎症反应。

关键词：半夏泻心汤溃疡性结肠炎细胞焦亡 NOD样受体蛋白3(NLRP3)/胱天蛋白酶-1(Caspase-1) 炎症

半夏泻心汤含药肠吸收液对胃癌微环境中PMN-MDSCs迁移侵袭的影响

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中国实验方剂学杂志 2023年第10期29卷 48-57页

作者：魏晶晶朱中博刘喜平李沛清陈启明戴丽蓉施丽娟段海婧王庆苗甘肃中医药大学甘肃省中药新产品创制工程实验室甘肃省中医方药挖掘与创新转化重点实验室兰州730000 兰州大学第一医院兰州730013

目的:观察半夏泻心汤含药肠吸收液对胃癌微环境中多形核髓系来源抑制细胞(PMN-MDSCs)迁移侵袭的影响。方法:制备含生药量0.63 g·mL^(-1)的半夏泻心汤含药肠吸收液,以Transwell小室将胃癌细胞与PMN-MDSCs非接触共培养建立胃癌微环境模型... 详细信息

目的:观察半夏泻心汤含药肠吸收液对胃癌微环境中多形核髓系来源抑制细胞(PMN-MDSCs)迁移侵袭的影响。方法:制备含生药量0.63 g·mL^(-1)的半夏泻心汤含药肠吸收液,以Transwell小室将胃癌细胞与PMN-MDSCs非接触共培养建立胃癌微环境模型,采用细胞增殖与活性检测-8(CCK-8)法筛选半夏泻心汤含药肠吸收液对PMN-MDSCs的最佳干预浓度及时间,用于后续实验,分为空白组、模型组、FAK抑制剂组及半夏泻心汤组(26%、18%、10%半夏泻心汤含药肠吸收液),采用细胞划痕实验和Transwell实验检测PMN-MDSCs的迁移和侵袭能力,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测肿瘤微环境中血管内皮细胞生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)细胞因子表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测PMN-MDSCs通路相关蛋白局部黏着斑激酶(FAK)、磷酸化(p)-FAK、蛋白酪氨酸激酶(Src)、磷酸化(p)-Src蛋白表达水平。结果:与24 h比较,作用48 h 5%、50%、75%、100%半夏泻心汤含药肠吸收液对PMN-MDSCs的抑制率均有升高(P半夏泻心汤含药肠吸收液对PMN-MDSCs的抑制率低于48 h(P半夏泻心汤含药肠吸收液略高于48 h(P半夏泻心汤含药肠吸收液在48 h为最佳干预浓度及时间;与空白组比较,模型组PMN-MDSCs迁移距离显著增大(P半夏泻心汤含药肠吸收液组PMN-MDSCs的迁移距离均显著减小(P半夏泻心汤含药肠吸收液组(26%、18%、10%)PMN-MDSCs FAK、p-FAK、Src蛋白表达降低(P半夏泻心汤含药肠吸收液组(18%)p-Src蛋白表达显著降低(P半夏泻心汤含药肠吸收液通过下调胃癌微环境PMN-MDSCs FAK信号通路蛋白FAK、p-FAK、Src、p-Src的表达,抑制PMN-MDSCs迁移侵袭。

关键词：胃癌微环境髓源性抑制细胞半夏泻心汤黏着斑激酶(FAK)信号通路

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半夏泻心汤调节胃电节律失常大鼠胃窦Cajal间质细胞自噬的作用

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中国实验方剂学杂志 2023年第6期29卷 55-62页

作者：张迪李雨静吉静张冬梅陈萌北京中医药大学中医学院北京100029 北京中医药大学东直门医院北京100700

目的:通过观察半夏泻心汤对于胃电节律失常大鼠胃窦组织中Cajal间质细胞(ICCs)自噬的影响,探究其保护作用及调节机制。方法:32只SD大鼠随机分为正常组、模型组、半夏泻心汤组(24.68 g·kg^(-1))及多潘立酮组(2.7 mg·kg^(-1))。通过“... 详细信息

目的:通过观察半夏泻心汤对于胃电节律失常大鼠胃窦组织中Cajal间质细胞(ICCs)自噬的影响,探究其保护作用及调节机制。方法:32只SD大鼠随机分为正常组、模型组、半夏泻心汤组(24.68 g·kg^(-1))及多潘立酮组(2.7 mg·kg^(-1))。通过“隔日进食+饮稀盐酸”法建立胃电节律失常大鼠模型,给予半夏泻心汤及阳性药多潘立酮进行干预。每周记录大鼠体质量;生物机能实验系统记录大鼠胃电活动;透射电子显微镜观察大鼠胃窦组织超微结构变化;免疫荧光双标法检测大鼠胃窦组织中酪氨酸激酶受体(c-kit)/自噬关键分子酵母Atg6同系物(Beclin1)共表达情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测胃窦组织中微管相关蛋白1轻链3(LC3)B、p62蛋白表达,并计算LC3BⅡ/Ⅰ。结果:与正常组比较,模型组大鼠体质量减轻(P半夏泻心汤及多潘立酮能够增加大鼠体质量(P半夏泻心汤能够抑制胃窦组织中LC3BⅠ转化为LC3BⅡ(P半夏泻心汤能够通过调节自噬相关蛋白的表达,降低ICCs细胞自噬,调节ICCs的数量及结构,从而改善大鼠胃电节律失常,阐释了半夏泻心汤治疗“心下痞”的作用内涵。

关键词：半夏泻心汤 Cajal间质细胞自噬胃电节律失常心下痞

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半夏泻心汤防治GC作用机制研究进展

中国实验方剂学杂志 2023年第10期29卷 65-72页

作者：张艳美魏晶晶朱中博刘森雨杨帆刘喜平李沛清甘肃中医药大学甘肃省中药新产品创制工程实验室甘肃省中医方药挖掘与创新转化重点实验室兰州730000 海南医学院第一临床学院海口571199 海南医学院中医学院海口571199

胃癌(GC)是常见的恶性肿瘤之一,我国GC的发病率和死亡率居世界首位。目前,GC的发病机制尚未完全阐明。虽然手术、放化疗、靶向治疗及免疫治疗等在GC的治疗中获得较好的疗效,但仍会出现并发症多、敏感性降低、不良反应大等问题。半夏泻... 详细信息

胃癌(GC)是常见的恶性肿瘤之一,我国GC的发病率和死亡率居世界首位。目前,GC的发病机制尚未完全阐明。虽然手术、放化疗、靶向治疗及免疫治疗等在GC的治疗中获得较好的疗效,但仍会出现并发症多、敏感性降低、不良反应大等问题。半夏泻心汤源自《伤寒杂病论》,临床应用2 000余年,具有寒热平调、散结除痞之效,为后世治疗消化道疾病的经典名方。经临床观察和实验研究,发现半夏泻心汤及其中单味药在防治GC方面具有较好的效果。中药因具有多成分、多靶点的特点,可以通过多种作用机制治疗GC。因此,需要从分子生物学、网络药理学等层面进行系统深入的研究,全面揭示半夏泻心汤防治GC的作用机制。目前半夏泻心汤治疗GC的作用机制主要集中于诱导GC细胞凋亡,抑制GC细胞的增殖、迁移、侵袭,保护腹膜间皮细胞,阻抑GC细胞腹膜转移,调节GC微环境,抑制骨髓间充质干细胞(BMSCs)的恶性转化等。本课题组致力于半夏泻心汤防治GC的研究,旨在全面地揭示半夏泻心汤防治GC的作用机制及其药效物质基础,为半夏泻心汤的进一步临床应用提供重要科学依据。该文通过检索中国知网(CNKI)、PubMed、万方(Wanfang Data)、维普(VIP)等数据库,从方证基础、物质基础、网络药理学、临床与实验研究等方面对半夏泻心汤治疗GC进行归纳与梳理,为进一步研究半夏泻心汤的药理作用并将其应用于临床GC的治疗提供参考依据。

关键词：半夏泻心汤胃癌物质基础作用机制研究进展

半夏泻心汤及其拆方对菌群紊乱幼鼠结肠黏膜免疫的影响

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中国实验方剂学杂志 2022年第11期28卷 42-50页

作者：戴丽蓉陈启明刘喜平林延延李侃岳娟葛艳李沛清朱中博张金铎施丽娟甘肃中医药大学甘肃省中药新产品创制工程实验室甘肃省中医方药挖掘与创新转化重点实验室兰州730000 兰州大学第一医院兰州730013

目的:探讨半夏泻心汤及其拆方对混合抗生素诱导的菌群紊乱幼鼠的治疗作用及可能的作用机制。方法:将70只雄性BALB/c幼鼠随机分为7组,分别为空白组、模型组、双歧杆菌四联活菌片组(西药组,0.68 g·kg^(-1))及半夏泻心汤全方组、辛开组、... 详细信息

目的:探讨半夏泻心汤及其拆方对混合抗生素诱导的菌群紊乱幼鼠的治疗作用及可能的作用机制。方法:将70只雄性BALB/c幼鼠随机分为7组,分别为空白组、模型组、双歧杆菌四联活菌片组(西药组,0.68 g·kg^(-1))及半夏泻心汤全方组、辛开组、苦降组、甘补组(9.1、3.19、1.82、4.1 g·kg^(-1)),每组10只。除空白组外,其余各组予混合抗生素灌胃诱导肠道菌群紊乱,14 d后西药组予双歧杆菌四联活菌片灌胃,全方组、辛开组、苦降组及甘补组分别予半夏泻心汤及不同配伍药组灌胃,空白组、模型组给予等体积生理盐水,1次/d,共14 d。连续给药14 d后无菌采集粪便样本用于16SrDNA测序分析肠道菌群,并经腹腔注射脂多糖(LPS,10 mg·kg^(-1))诱导炎性反应,苏木素-伊红(HE)染色观察结肠黏膜组织形态,甲苯胺蓝染色和免疫组织化学观察结肠黏膜巨噬细胞浸润,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-10(IL-10)mRNA的表达情况。结果:与空白组比较,模型组幼鼠肠道微生物结构显著改变(P半夏泻心汤及其拆方组均能增加菌群相对丰度和物种多样性,提高拟杆菌门、厚壁菌门等有益菌的比例(P半夏泻心汤及其拆方组均能改善结肠黏膜损伤(P半夏泻心汤及苦降、甘补组升高IL-1βmRNA表达(P半夏泻心汤及辛开、甘补组IL-10 mRNA表达升高(P半夏泻心汤及拆方组能调整抗生素暴露幼鼠肠道菌群,保护肠道菌群紊乱后结肠黏膜免疫屏障,以半夏泻心汤全方为最佳配伍。

关键词：半夏泻心汤肠道菌群抗生素肠道免疫配伍研究

半夏泻心汤保留灌肠治疗转移性结肠癌并发不完全性肠梗阻的临床观察

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时珍国医国药 2023年第7期34卷 1673-1675页

作者：张弛廖良功胡齐欣湖北省肿瘤医院胃肠外科湖北省结直肠癌临床医学研究中心湖北武汉430070 湖北省肿瘤医院中西医结合科湖北武汉430070

目的观察半夏泻心汤保留灌肠治疗转移性结肠癌合并不完全性肠梗阻的临床疗效及转化手术后发生肠道相关严重并发症的发生情况。方法选取首诊转移性结肠癌合并不完全性肠梗阻的IV期结肠癌住院患者97例,按照随机对照原则,分成治疗组和对照... 详细信息

目的观察半夏泻心汤保留灌肠治疗转移性结肠癌合并不完全性肠梗阻的临床疗效及转化手术后发生肠道相关严重并发症的发生情况。方法选取首诊转移性结肠癌合并不完全性肠梗阻的IV期结肠癌住院患者97例,按照随机对照原则,分成治疗组和对照组。治疗组(n=50例)给予半夏泻心汤保留灌肠和西医常规治疗,对照组(n=47例)给予肥皂液保留灌肠及西医常规治疗,观察两组临床治疗效果;并对其中67例经转化治疗后接受原发肿瘤切除手术的患者进行二次研究,术前肠道准备分别予以半夏泻心汤灌肠及常规肥皂水灌肠,观察此部分患者术后严重并发症的发生情况。结果两组患者临床症状恢复时间方面,对照组明显长于治疗组(P0.05);治疗后,两组患者症状积分均下降,治疗组患者的症候积分明显低于对照组(P半夏泻心汤的相关二次研究中,术后严重并发症治疗组低于对照组(P半夏泻心汤保留灌肠治疗,能较快改善转移性结肠癌合并不完全性肠梗阻患者临床症状,有效降低中医症状积分;应用在围手术期肠道准备时亦可减少患者术后严重并发症的发生,在临床上取得了良好的防治效果。

关键词：半夏泻心汤保留灌肠转移性结肠癌不完全性肠梗阻

半夏泻心汤血浆源性外泌体对胃电节律失常大鼠胃窦组织Cajal间质细胞网络结构的影响

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中国中西医结合杂志 2024年第4期44卷 440-447页

作者：张迪李雨静盛春瑞吉静张冬梅陈萌北京中医药大学中医学院北京100029 北京中医药大学东直门医院科技处北京100700

目的观察半夏泻心汤血浆源性外泌体对胃电节律失常模型大鼠胃窦组织Cajal间质细胞(ICCs)网络结构的影响,探索其调节胃运动的可能作用机制。方法共52只大鼠,选择20只完全随机分为中药组及阴性对照组,采用“隔日进食+饮稀盐酸”法建立胃... 详细信息

目的观察半夏泻心汤血浆源性外泌体对胃电节律失常模型大鼠胃窦组织Cajal间质细胞(ICCs)网络结构的影响,探索其调节胃运动的可能作用机制。方法共52只大鼠,选择20只完全随机分为中药组及阴性对照组,采用“隔日进食+饮稀盐酸”法建立胃电节律失常大鼠模型,半夏泻心汤及蒸馏水干预2周,分离血浆外泌体并鉴定;其余大鼠随机分为对照组、模型组、中药组及阴性对照组,每组8只。造模成功后,中药组及阴性对照组大鼠尾静脉注射相应外泌体(0.3 mg/kg),对照组及模型组注射等量磷酸盐(PBS),隔日1次,连续2周。生物机能实验系统记录大鼠胃电活动,ELISA检测大鼠血浆胃动素(MLT)含量,Western Blot法检测大鼠胃组织缝隙连接蛋白(CX43)蛋白表达,免疫荧光双染法检测酪氨酸激酶受体/平滑肌肌球蛋白重链(c-kit/SMMHC)、酪氨酸激酶受体/α平滑肌肌动蛋白(c-kit/α-SMA)共表达。结果与对照组比较,模型组胃电慢波频率、主频率减低(P半夏泻心汤血浆源性外泌体对胃电节律失常大鼠有一定干预作用,其对胃运动的调节可能通过促进c-kit及CX43蛋白表达,进而维持胃窦组织ICCs网络结构动态平衡实现。

关键词：半夏泻心汤外泌体胃运动缝隙连接蛋白43 Cajal间质细中药复方中西医结合

半夏泻心汤对正常骨髓间充质干细胞摄取胃癌细胞来源外泌体的干预作用

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中华中医药杂志 2022年第4期37卷 1908-1913页

作者：岳娟刘喜平崔国宁朱中博王庆苗李沛清王宇董俊刚甘肃中医药大学基础医学院兰州730000 甘肃中医药大学中医临床学院兰州730000

目的:观察胃癌细胞来源外泌体能否靶向骨髓间充质干细胞(BMSCs)并被摄取及半夏泻心汤的干预效应。方法:分离大鼠BMSCs,倒置显微镜及免疫荧光染色法对其进行鉴定;制备半夏泻心汤含药血清,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测半夏泻心汤含药血清对B... 详细信息

目的:观察胃癌细胞来源外泌体能否靶向骨髓间充质干细胞(BMSCs)并被摄取及半夏泻心汤的干预效应。方法:分离大鼠BMSCs,倒置显微镜及免疫荧光染色法对其进行鉴定;制备半夏泻心汤含药血清,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测半夏泻心汤含药血清对BMSCs存活率的影响,筛选最佳实验浓度;提取人胃癌BGC-823细胞来源的外泌体,采用透射电镜观察及Western Blot法对其进行鉴定,并用荧光染料Dil标记,分为空白组,模型组,中药高、中、低剂量组及阳性药组,各组上室均加入BMSCs悬液,下室均加入无外泌体血清的培养基。模型组,中药高、中、低剂量组及阳性药组下室加入胃癌外泌体。模型组及空白组上室加入含10%正常对照血清,中药高、中、低剂量组上室内相应加入含10%中药高、中、低剂量含药血清;阳性药组上室加入含10μmoL/L氯丙嗪的10%正常对照血清。24、48、72 h时用激光共聚焦显微镜观察各组BMSCs对胃癌细胞来源外泌体的摄取情况。结果:MTT法筛选半夏泻心汤含药血清的最佳实验浓度为10%。免疫荧光结果显示:共培养24 h内各组未发现BMSCs内红色荧光标记,48 h后发现BMSCs内红色荧光标记,72 h时BMSCs内含大量红色荧光标记,红色荧光标记的MOD值显示:48、72 h与空白组同期比较,模型组MOD值显著升高(P半夏泻心汤能够抑制BMSCs对胃癌细胞来源外泌体的摄取。

关键词：胃癌半夏泻心汤骨髓间充质干细胞外泌体

半夏泻心汤含药血清对胃癌细胞来源外泌体诱导BMSCs增殖、迁移、侵袭的影响

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中成药 2022年第1期44卷 42-48页

作者：董俊刚刘喜平李沛清王庆苗朱中博崔国宁甘肃中医药大学基础医学院甘肃兰州730000 甘肃中医药大学中医临床医学院甘肃兰州730000

目的探讨半夏泻心汤对胃癌细胞来源外泌体诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖、迁移、侵袭的影响。方法荧光染料1,1′-双十八烷基-3,3,3′,3′-四甲基吲哚羰花青高氯酸盐(Dil)标记胃癌细胞来源外泌体,制备半夏泻心汤含药血清。实验分为空... 详细信息

目的探讨半夏泻心汤对胃癌细胞来源外泌体诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖、迁移、侵袭的影响。方法荧光染料1,1′-双十八烷基-3,3,3′,3′-四甲基吲哚羰花青高氯酸盐(Dil)标记胃癌细胞来源外泌体,制备半夏泻心汤含药血清。实验分为空白组,模型组,半夏泻心汤低、中、高剂量组及Shh阻断剂组,各组上室加入BMSCs细胞悬液,下室加入无外泌体血清的培养基,除空白组外其他各组下室加入胃癌细胞来源外泌体,模型组及空白组上室加入含10%正常对照血清,半夏泻心汤低、中、高剂量组上室内加入含10%半夏泻心汤低、中、高剂量含药血清,Shh阻断剂组上室加入含20μmol/L GANT61(Shh信号通路阻断剂)的10%空白血清。激光共聚焦显微镜观察BMSCs对胃癌细胞来源外泌体的摄取,MTT法检测各组BMSCs增殖率,Transwell小室检测BMSCs迁移、侵袭能力,Western blot检测Shh、Ptch1、Smo、Gli1、c-Myc蛋白表达。结果与空白组比较,模型组BMSCs内红色荧光标记平均光密度值(MOD)、细胞增殖率、细胞迁移、侵袭能力及Shh、Ptch1、Smo、Gli1、c-Myc蛋白表达升高(P半夏泻心汤各剂量组各指标均下降,以高剂量组更明显(P半夏泻心汤可干预BMSCs对胃癌细胞来源外泌体的摄取,下调c-Myc蛋白及Shh信号通路Shh、Ptch1、Smo、Gli1蛋白表达,抑制胃癌细胞来源外泌体诱导的BMSCs增殖、迁移、侵袭。

关键词：半夏泻心汤胃癌骨髓间充质干细胞(BMSCs) 外泌体 Shh信号通路