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半夏曲炮制过程中微生物数量动态变化的初步分析

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中国实验方剂学杂志 2019年第24期25卷 78-83页

作者：龙凯王立元郭佳佳翁美芝谢卫华苏明声杨明谢小梅江西中医药大学

目的:检测半夏曲炮制过程中细菌、酵母菌、霉菌的菌落数量并定量分析其中4种优势微生物数量的动态变化,为研究半夏曲炮制机制提供实验依据。方法:参照《中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂》(第十册)制备半夏曲,取半夏曲炮制过程... 详细信息

目的:检测半夏曲炮制过程中细菌、酵母菌、霉菌的菌落数量并定量分析其中4种优势微生物数量的动态变化,为研究半夏曲炮制机制提供实验依据。方法:参照《中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂》(第十册)制备半夏曲,取半夏曲炮制过程中0,30,60,90,120 h共5个不同时间点样品,分别用选择性培养基进行细菌、霉菌、酵母菌的培养和分离纯化,并进行菌落计数;应用荧光定量聚合酶链式反应(PCR)技术对枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis,宛氏拟青霉Paecilomyces variotii,丝衣霉菌Byssochlamys spectabilis,黑曲霉Aspergillus niger进行绝对定量,分别以枯草芽孢杆菌、宛氏拟青霉、丝衣霉菌、黑曲霉重组质粒为对照品,经倍比稀释后制作标准曲线,对半夏曲炮制至5个不同时间点(0,30,60,90,120 h)样品中的4种微生物进行定量分析。结果:半夏曲炮制过程中细菌数量少且变化平缓,而酵母菌和霉菌数量至发酵后期时迅速增加,至发酵结束时均>1×10^6CFU·m L^-1。枯草芽孢杆菌5个不同时间点样品中的拷贝数分别为3.53×10^5,7.56×10^4,1.58×10^5,1.90×10^6,1.85×10^6copies·g^-1;宛氏拟青霉的拷贝数为0,0,0,3.45×10^7,4.15×10^8copies·g^-1;丝衣霉菌的拷贝数为0,0,0,1.04×10^8,2.28×10^8copies·g^-1;黑曲霉的拷贝数为0,0,9.48×10^5,1.47×10^6,7.56×10^6copies·g^-1。结论:半夏曲炮制过程中微生物菌群变化趋势可以用4种优势微生物的动态变化来反映,霉菌在半夏曲炮制中可能起重要作用。荧光定量PCR技术具有快速灵敏、重复性好和特异性高的优点,适用于半夏曲的炮制机制研究。

关键词：半夏曲发酵炮制菌群变化优势菌种定量分析荧光定量聚合酶链式反应技术黑曲霉

半夏曲炮制中4种优势微生物的生理生化特性及黄色素含量测定

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中草药 2019年第15期50卷 3637-3641页

作者：龙凯郭佳佳苏明声谢卫华王立元谢小琴杨明谢小梅江西中医药大学

目的研究半夏曲中4种优势微生物的生理生化特性,测定炮制过程中不同时间点各样本的黄色素含量,为揭示半夏曲炮制机制奠定基础。方法以半夏曲中筛选出的4株优势菌枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis、宛氏拟青霉Paecilomyces variotii、丝衣霉... 详细信息

目的研究半夏曲中4种优势微生物的生理生化特性,测定炮制过程中不同时间点各样本的黄色素含量,为揭示半夏曲炮制机制奠定基础。方法以半夏曲中筛选出的4株优势菌枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis、宛氏拟青霉Paecilomyces variotii、丝衣霉菌Byssochlamys spectabilis、黑曲霉Aspergillus niger为研究对象,分别测定它们的最适宜生长温度、pH值,利用糖类的产酸能力以及产淀粉酶、蛋白酶、黄色素的能力,同时测定半夏曲炮制过程中5个不同时间点样本的黄色素含量。结果枯草芽孢杆菌、宛氏拟青霉、丝衣霉菌、黑曲霉生长的最适温度分别为35℃、29℃、29~31℃、39℃,最适pH值分别为7.0、7.0、7.5、7.0。4种菌均具有产淀粉酶和蛋白酶的能力,宛氏拟青霉、丝衣霉菌具有产黄色素能力。5个不同时间点样品的黄色素质量分数分别为69.875、69.875、71.750、119.500、137.875μg/g。结论 4种优势微生物在半夏曲炮制中可能起重要作用。

关键词：半夏曲发酵炮制优势菌生理生化特性黄色素枯草芽孢杆菌宛氏拟青霉丝衣霉菌黑曲霉

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半夏曲炮制过程中优势微生物的鉴定

中国中药杂志 2016年第16期41卷 3027-3031页

作者：郭佳佳苏明声王立元任佳秀杨明谢小梅江西中医药大学药学院江西南昌330004 江西中医药大学现代中药制剂教育部重点实验室创新药物与高效节能降耗国家重点实验室江西南昌330004 江西中医药大学基础医学院江西南昌330004

研究半夏曲不同发酵时间点的微生物种类、数量变化以及优势菌种的分离鉴定,为探讨半夏曲炮制机制奠定基础。用选择性培养基对半夏曲发酵过程中5个时间点(0,18,36,54,72 h)样品中的细菌、霉菌、酵母菌分别进行培养、菌落计数、分离纯化... 详细信息

研究半夏曲不同发酵时间点的微生物种类、数量变化以及优势菌种的分离鉴定,为探讨半夏曲炮制机制奠定基础。用选择性培养基对半夏曲发酵过程中5个时间点(0,18,36,54,72 h)样品中的细菌、霉菌、酵母菌分别进行培养、菌落计数、分离纯化优势菌种;采用16S rDNA,26S rDNA序列分别对优势细菌、优势真菌进行鉴定。结果表明,半夏曲发酵过程中细菌数量少、变化平缓,而酵母菌和霉菌数量发酵至54 h时迅速增加,至发酵结束时达1×10~7CFU·mL^(-1)以上;通过NCBI同源性比对及构建系统发育树,鉴定出半夏曲炮制过程中的优势细菌为Streptomyces sp.,Bacillus pumilus,***,***,Bacillus sp.;优势酵母菌为Meyerozyma guilliermondii;优势霉菌为Paecilomyces variotii,Byssochlamys spectabilis,Aspergillus niger。提示半夏曲的发酵过程涉及多种微生物共同参与,其中以酵母菌和霉菌为主。***,***,***,***和Bacillus sp.等优势菌种可能在半夏曲炮制中起重要作用。

关键词：半夏曲发酵优势菌种 16S rDNA和26S rDNA 系统发育树菌种鉴定

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半夏曲发酵处方的筛选

华西药学杂志 2009年第4期24卷 367-369页

作者：王世宇任振丽傅超美黄逸维王子寿成都中医药大学四川成都610075

目的研究半夏曲的最佳发酵处方。方法以半夏曲的淀粉酶活力、蛋白酶活力和小肠推动率为评价指标,用单因素方差和秩和检验进行分析,研究半夏曲的处方。结果80 g清半夏、80 g法半夏、5 g六神曲原料、10 g白矾、20 g生姜汁、32 g面粉为半... 详细信息

目的研究半夏曲的最佳发酵处方。方法以半夏曲的淀粉酶活力、蛋白酶活力和小肠推动率为评价指标,用单因素方差和秩和检验进行分析,研究半夏曲的处方。结果80 g清半夏、80 g法半夏、5 g六神曲原料、10 g白矾、20 g生姜汁、32 g面粉为半夏曲最佳的发酵处方。结论该方工艺简单、经济、可操作性强。

关键词：半夏曲单因素方差分析秩和检验处方筛选

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半夏曲质量标准提升及发酵过程研究

半夏曲质量标准提升及发酵过程研究

作者：张超成都中医药大学

学位级别：硕士

半夏曲为天南星科植物半夏Pinellia ternate(Thunb)Breit的炮制品清半夏加面粉、姜汁等经发酵而成。目前,有关半夏曲的文献研究甚少,其质量标准仍以《中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂》第十册执行,基本上仅对其制法、性状及... 详细信息

半夏曲为天南星科植物半夏Pinellia ternate(Thunb)Breit的炮制品清半夏加面粉、姜汁等经发酵而成。目前,有关半夏曲的文献研究甚少,其质量标准仍以《中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂》第十册执行,基本上仅对其制法、性状及鉴别做了简单的规定,质量标准偏低,有待提高;同时,其发酵工艺不明确,发酵过程机理不清楚。因此,本研究拟参照《中国药典》有关中药饮片质量标准的起草要求对半夏曲的质量标准进行全面的研究,以提升其质量标准;以“碳氮源”(总糖和总蛋白)含量和“消化酶”(淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶)活力为指标,对半夏曲发酵过程中微生物的代谢情况进行研究;采用HPLC及智能感官分析等技术研究半夏曲发酵过程中的物质基础及“性状”变化,旨在提升半夏曲的质量标准和阐明其自然发酵过程的机理。首先,通过文献挖掘和生产调研,梳理了半夏曲的历史沿革及生产相关现状,为半夏曲的进一步研究奠定工作基础。其次,对半夏曲的质量标准进行全面提升研究,为科学评价和有效控制半夏曲的质量标准提供借鉴,并草拟了半夏曲质量标准草案。再次,为了探究半夏曲发酵过程机理,对发酵过程微生物消耗“碳氮源”的含量变化及其产生“消化酶”活力的动态变化进行研究,并对发酵过程中的化学成分及“性状”(颜色、气味)的变化进行初步探索;基本阐明了自然发酵过程中酶活力、碳氮源及“性状”的相关性,初步明确了发酵对半夏曲中的化学成分的影响。括而言之,本论文调研了半夏曲的炮制历史沿革、生产及质量标准现状;提升并制定了半夏曲质量标准草案;应用传统与现代智能感官分析技术(CV、 E-nose)对半夏曲发酵过程中的物质基础及“颜色与气味”变化进行了探索研究,初步阐明了半夏曲发酵炮制过程中内在成分的动态变化规律,提升了半夏曲原有的质量标准。本课题的研究将为半夏曲的深入研究提供实验基础和数据。

关键词：半夏曲质量标准发酵电子鼻机器视觉

对含六神曲、半夏曲中成药丸剂卫生质量控制问题的探讨

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中国中药杂志 1994年第11期19卷 699-700页

作者：梁忠红王国生阔永华窦巧枝姚淑珍河南省新乡市中药厂河南省新乡市药品检验所

对含六神曲、半夏曲中成药丸剂卫生质量控制问题的探讨梁忠红，王国生，阔永华，窦巧枝（河南省新乡市中药厂４５３０００）姚淑珍（河南省新乡市药品检验所４５３０００）丸剂是我国中药制剂的传统剂型，由于疗效确切，目前在全国中成... 详细信息

对含六神曲、半夏曲中成药丸剂卫生质量控制问题的探讨梁忠红，王国生，阔永华，窦巧枝（河南省新乡市中药厂４５３０００）姚淑珍（河南省新乡市药品检验所４５３０００）丸剂是我国中药制剂的传统剂型，由于疗效确切，目前在全国中成药产量中仍占较大比重。生产过程中，...

关键词：六神曲半夏曲中成药丸剂卫生质量控制

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不同半夏曲炮制品的质量标准完善研究

时珍国医国药 2015年第11期26卷 2674-2676页

作者：向志芸李小芳罗开沛林浩刘海霞杨露成都中医药大学中药材标准化教育部重点实验室中药资源系统研究与开发利用省部共建国家重点实验室培育基地四川成都611137

目的建立半夏曲、清炒半夏曲、麸炒半夏曲的质量标准。方法采用薄层色谱法对半夏曲、清炒半夏曲、麸炒半夏曲中所含半夏、甘草进行定性鉴别研究;采用HPLC法测定半夏曲、清炒半夏曲、麸炒半夏曲中琥珀酸的含量,选用Diamonsil-C18柱(4.6mm... 详细信息

目的建立半夏曲、清炒半夏曲、麸炒半夏曲的质量标准。方法采用薄层色谱法对半夏曲、清炒半夏曲、麸炒半夏曲中所含半夏、甘草进行定性鉴别研究;采用HPLC法测定半夏曲、清炒半夏曲、麸炒半夏曲中琥珀酸的含量,选用Diamonsil-C18柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相为乙腈-0.02mol·L-1磷酸二氢钾缓冲液(p H 2.5);检测波长210nm;流速为1ml·min-1;柱温为20℃。结果对半夏、甘草的TLC薄层鉴别分离度好,斑点清晰;得到了半夏曲、清炒半夏曲、麸炒半夏曲等的水分、总灰分、水溶性浸出物的含量,并建立了半夏曲、清炒半夏曲、麸炒半夏曲的HPLC含量测定方法。结论所建立的分析方法专属性强、准确可靠,可作为半夏曲、清炒半夏曲、麸炒半夏曲的质量控制方法。

关键词：半夏曲 TLC HPLC 质量标准

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发酵半夏曲减毒增效的研究

发酵半夏曲减毒增效的研究

作者：孙佳彬成都中医药大学

学位级别：硕士

半夏曲是天南星科植物半夏Pinellia ternate(Thunb)Breit.或半夏炮制品与白矾、面粉、生姜汁和六神曲或六神曲的原料药材等不同的药材发酵而成的曲剂。本文主要研究传统半夏曲处方选择的依据、发酵后毒性、刺激性、药效和成分的变化,阐... 详细信息

半夏曲是天南星科植物半夏Pinellia ternate(Thunb)Breit.或半夏炮制品与白矾、面粉、生姜汁和六神曲或六神曲的原料药材等不同的药材发酵而成的曲剂。本文主要研究传统半夏曲处方选择的依据、发酵后毒性、刺激性、药效和成分的变化,阐明发酵对半夏曲炮制后减毒增效的影响,为半夏曲临床用药提供合理、安全、可靠的依据。其次探索了半夏曲的纯种发酵工艺,为半夏曲发酵新工艺的研究提供理论依据,奠定基础。处方选择依据方面首先对古代文献梳理分析,再和现代各地方炮制规范比较,最后选择3个比较具有代表性的处方从毒性、刺激性和药效方面进行比较。结果半夏曲最早的处方,即生半夏和姜汁发酵后的样品缓和毒性的程度弱于加了白矾发酵后的样品,消食药效也弱于加了六神曲发酵后的样品;现代半夏曲的处方是在清代的基础上增加了白矾的用量和六神曲及面粉两味药,这些辅料的加入不仅可以更好的缓和半夏的毒性也为发酵过程提供更多的C和N源。综合毒性、刺激性和药效的实验结果、文献梳理和市场调研,课题组最后选择了《部颁标准》中的半夏曲处方为最终的研究对象。药效研究主要从半夏曲保留半夏原有的止咳化痰功效和新增加的消食滞两个方面进行研究。止咳实验选用了小鼠氨水诱咳和豚鼠枸橼酸诱咳两个模型,化痰实验选用了小鼠酚红排痰和大鼠排痰两个模型。结果显示,发酵前的清半夏和发酵后的半夏曲都有化痰的趋势和明显的止咳作用,证明了发酵工艺保留了半夏的止咳化痰功效。针对半夏曲增加的消食滞功效研究,将半夏曲水提液灌胃正常小鼠和脾虚食积小鼠,记录正常小鼠和脾虚食积小鼠的肠推进率和胃排空率,测定脾虚食积小鼠胃肠道激素和神经递质的变化。结果给药后能促进小鼠的肠推进率和胃排空率,同时也能促进脾虚食积小鼠胃肠道激素胃泌素的分泌及神经递质胆碱酯酶的分泌,减少一氧化氮的分泌,说明半夏曲发酵后对食积证有预防和治疗效果。成分变化研究首先对半夏曲进行了化学系统预实验,结果半夏曲中可能含有有机酸、生物碱、氨基酸和蛋白质等成分。其次采用GC-MS对半夏曲发酵前后挥发性成分和脂溶性成分进行了检测和分析,结果半夏曲中主要含有烯烃、烷烃、脂肪酸和甾醇等脂溶性成分,发酵前后脂溶性成分在种类和含量上有明显的区别。纯种发酵工艺的研究首先分别选择了半夏曲发酵中的细菌、霉菌和酵母菌3种优势菌种中的一个工程菌;然后将购买的菌种复活培养,得到纯的菌株后用无菌水稀释作为孢子混悬液进行半夏曲的发酵;最后将纯种发酵后得到的样品与传统发酵的样品从外观性状、内在成分、药效和刺激性几方面比较。结果以枯传统发酵为菌悬液发酵的半夏曲样品质量更好。综合上述实验结果说明半夏曲发酵后可以很好的缓和毒性并且可以保留止咳化痰和增加消食积的功效,也会影响成分的变化,这种成分的变化是否与药效变化有关需要进一步的研究。纯种发酵中枯草芽孢杆菌菌株发酵的样品质量同传统发酵的样品,纯种发酵是否可以代替传统发酵的工艺还需要更深入的研究。

关键词：半夏曲刺激性止咳化痰消食化积脂溶性成分纯种发酵

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半夏曲炮制历史沿革及现代研究

世界科学技术-中医药现代化 2015年第9期17卷 1893-1898页

作者：张超赵重博胥敏杨诗龙卢一黄勤挽吴纯洁张大永江云成都中医药大学成都611137 国家中医药管理局中药炮制技术重点实验室成都611731

半夏曲是中药发酵炮制品中常用品种之一,本文通过对半夏曲古今文献的梳理和分析,系统综述了半夏曲的炮制历史沿革、发酵方法、化学成分、药效以及微生物种类等方面的研究现状;通过分析半夏曲在发酵菌种、药效物质、质量标准、发酵工艺... 详细信息

半夏曲是中药发酵炮制品中常用品种之一,本文通过对半夏曲古今文献的梳理和分析,系统综述了半夏曲的炮制历史沿革、发酵方法、化学成分、药效以及微生物种类等方面的研究现状;通过分析半夏曲在发酵菌种、药效物质、质量标准、发酵工艺等方面存在的问题,提出了相应的解决方案,为半夏曲进一步的研究提供思路与借鉴。

关键词：半夏曲发酵微生物历史沿革现代研究