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千层金精油含量和成分变化规律研究

天然产物研究与开发 2019年第3期31卷 489-495页

作者：杨超张恕杰刘文嵩王文婷王志恒吴少华李永裕福建农林大学园艺学院福建农林大学园艺植物天然产物研究所福州350002

为了解不同部位和不同月份千层金精油含量和成分的变化规律,采用水中蒸馏法对2017年1～12月下旬的千层金叶片进行精油提取,利用GC-MS对其成分进行分析。结果表明:千层金叶片不同部位中,老叶的精油含量为0.282%,新叶的含量为0.268%,而根... 详细信息

为了解不同部位和不同月份千层金精油含量和成分的变化规律,采用水中蒸馏法对2017年1～12月下旬的千层金叶片进行精油提取,利用GC-MS对其成分进行分析。结果表明:千层金叶片不同部位中,老叶的精油含量为0.282%,新叶的含量为0.268%,而根、茎干、枝条中精油含量极低;在一年之中,8月份的精油含量最高达1.10%,1月含量最低为0.25%;精油主要成分为甲基丁香酚;千层金精油含量在气温高,降水多的时候表现出较高的水平。研究结果阐明了千层金在不同月份和不同部位的精油含量和成分变化规律,为千层金精油的高效利用与开发提供科学依据。

关键词：千层金精油水中蒸馏法气相色谱-质谱

千层金精油有机溶剂提取工艺的优化及成分分析

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热带作物学报 2014年第5期35卷 992-998页

作者：叶征美刘鑫沈明娟陈建烟陈晓丹李永裕吴少华福建农林大学园艺学院福建福州350002 福建农林大学园艺植物天然产物研究所福建福州350002

采用有机溶剂萃取法提取千层金精油，在单因素试验的基础上，以石油醚（60～90℃）为提取溶剂．选取提取时间、提取温度、料液比为影响因素，用正交试验优化千层金精油的提取工艺．并采用气相色谱-质谱（GC—MS）技术鉴定了千层金精油... 详细信息

采用有机溶剂萃取法提取千层金精油，在单因素试验的基础上，以石油醚（60～90℃）为提取溶剂．选取提取时间、提取温度、料液比为影响因素，用正交试验优化千层金精油的提取工艺．并采用气相色谱-质谱（GC—MS）技术鉴定了千层金精油的化学成分。结果表明，千层金精油的最佳提取工艺条件为：提取时间3h．提取温度50℃，料液比1：20，在此工艺条件下的精油提取得率4．51％。GC—MS分析结果表明．千层金精油共含有41个组分，主要成分为甲基丁香酚，相对含量达到了83．55％，其次为肉桂酸甲酯（4．55％）、3,4，5-三甲氧基苯甲酸甲酯（1．81％）、大根香叶烯D（1.36％）。

关键词：千层金精油有机溶剂提取正交试验气相色谱-质谱

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千层金组培快繁技术研究

中国农学通报 2010年第18期26卷 247-250页

作者：吴维坚林加根鞠玉栋杨敏福建省农科院闽台园艺研究中心福建漳州363005

以千层金茎段为外植体进行离体培养,通过试验筛选出各阶段适宜的培养基,建立了千层金组培快繁体系。结果表明:在诱导不定芽的培养基中,MS+6-BA1mg/L的芽萌发率最高,芽体健壮;丛生芽继代增殖培养基为改良MS+6-BA1mg/L+NAA0.1mg/L+KT0.1mg... 详细信息

以千层金茎段为外植体进行离体培养,通过试验筛选出各阶段适宜的培养基,建立了千层金组培快繁体系。结果表明:在诱导不定芽的培养基中,MS+6-BA1mg/L的芽萌发率最高,芽体健壮;丛生芽继代增殖培养基为改良MS+6-BA1mg/L+NAA0.1mg/L+KT0.1mg/L;生根培养基为1/2MS+1号生根剂0.5mg/L+IBA0.1mg/L,生根率达100%,且根系发达;栽培基质以椰糠:腐殖土=2:1较理想,移栽成活率为89.3%。

关键词：千层金组培快繁

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千层金组培快繁技术研究

北方园艺 2012年第12期 146-147页

作者：方惠国陈喜林辛如如肖泽鑫李莉汕头市海滨华侨公园管理处广东汕头515041 汕头市园林生态科学研究所广东汕头515041

以嫩茎为外殖体,以MS为基本培养基,分别加入不同浓度6-BA、NAA、IBA,研究不同浓度激素及组合对千层金组培快繁的影响。结果表明:诱导芽的最佳培养基为MS+6-BA2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L,诱导率达63.6%;继代培养最佳培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L... 详细信息

以嫩茎为外殖体,以MS为基本培养基,分别加入不同浓度6-BA、NAA、IBA,研究不同浓度激素及组合对千层金组培快繁的影响。结果表明:诱导芽的最佳培养基为MS+6-BA2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L,诱导率达63.6%;继代培养最佳培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L,增殖系数达6.3,且芽苗健壮;壮苗培养的最佳培养基为MS+NAA 0.1 mg/L,每瓶产苗数达16.2株;最佳生根培养基为1/2MS+NAA 0.1 mg/L,21 d生根率达100%,平均根数达9.6条。采用泥炭土与椰糠体积各半混合基质进行移栽,30 d成活率达95.7%,能够满足工厂化苗木生产的要求。

关键词：千层金组织培养快速繁殖

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千层金嫩枝扦插繁殖技术

基因组学与应用生物学 2009年第5期28卷 1006-1009页

作者：曲芬霞刘玉清吴桂容陈春岚广西贺州学院化生系贺州542800

本研究用L16(45)正交试验方法,研究了基质、穗条长度、植物生长调节剂及其浓度对千层金嫩枝扦插生根率的影响。结果表明,基质和生长调节物质对生根率有极显著的影响,而植物生长调节剂浓度与穗条长度对生根率有显著的影响,4个因素对千层... 详细信息

本研究用L16(45)正交试验方法,研究了基质、穗条长度、植物生长调节剂及其浓度对千层金嫩枝扦插生根率的影响。结果表明,基质和生长调节物质对生根率有极显著的影响,而植物生长调节剂浓度与穗条长度对生根率有显著的影响,4个因素对千层金嫩枝大田扦插生根率影响从大到小分别是基质、生长调节物质、植物生长调节剂浓度和穗条长度。用浓度100mg/L的NAA浸泡9cm插穗2h,在混和基质上扦插,平均生根率可达92%,且生根及新梢抽出时间早,侧根数量多,扦插效果最好。

关键词：千层金嫩枝扦插生根率

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千层金组培苗瓶外生根技术研究

安徽农业科学 2010年第25期38卷 13711-13712,13716页

作者：曲芬霞刘玉清贺州学院生化系广西贺州542800

[目的]对千层金瓶外生根技术进行研究。[方法]以千层金健壮试管苗为材料,使用不同浓度生根促进剂NAA、IBA、ABT1、ABT2处理穗条,再测定各处理的扦插生根率。[结果]用浓度100mg/L的ABT1浸泡穗条60min后扦插,生根率为79.3%,再用该药液把... 详细信息

[目的]对千层金瓶外生根技术进行研究。[方法]以千层金健壮试管苗为材料,使用不同浓度生根促进剂NAA、IBA、ABT1、ABT2处理穗条,再测定各处理的扦插生根率。[结果]用浓度100mg/L的ABT1浸泡穗条60min后扦插,生根率为79.3%,再用该药液把滑石粉稀释至糊状,随蘸随插,生根率上升到93.0%,其中,以复合基质A(河沙:珍珠岩:蛭石:泥炭土=1:2:2:5)处理效果最佳,发根时间早,8d后长出新根,平均不定根数量最多,根长最长,分别为4.5条和3.6cm/株。[结论]该研究结果可为建立和完善千层金离体再生技术工厂化生产提供科学依据。

关键词：千层金瓶外生根生根率

千层金精油的提取、成分分析、抗氧化及抗菌活性的研究

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千层金精油的提取、成分分析、抗氧化及抗菌活性的研究

作者：叶征美福建农林大学

学位级别：硕士

千层金(Melaleuca bracteata),属于桃金娘科白千层属,为常绿乔木。千层金不仅具备有的较高的观赏价值和较强的适应能力,而且其叶片富含植物精油,香气浓郁,具有多种生物活性,在抗氧化、抗菌、抗虫等等方面展现出了很好的应用潜力。本试... 详细信息

千层金(Melaleuca bracteata),属于桃金娘科白千层属,为常绿乔木。千层金不仅具备有的较高的观赏价值和较强的适应能力,而且其叶片富含植物精油,香气浓郁,具有多种生物活性,在抗氧化、抗菌、抗虫等等方面展现出了很好的应用潜力。本试验选用福建地区的千层金作为原料,研究了千层金精油的提取工艺、成分分析、抗氧化活性以及抗菌活性。研究结果表明：1、采用有机溶剂萃取法提取千层金精油,探讨影响提取率的主要因素。结果表明,千层金精油的最佳提取工艺条件为：提取时间3h,提取温度50℃,料液比1：20,在此工艺条件下的精油提取得率4.51%。影响千层金精油提取率的主要因素主次顺序为：萃取时间>料液比>萃取温度。2、利用响应面法优化超声波辅助法提取千层金精油的工艺条件。在单因素试验的基础上选取超声功率、提取时间和料液比为影响因子,应用Box-Behnken中心组合设计建立数学模型,以提取精油率作为响应值,进行响应面分析。结果表明,超声波辅助提取千层金精油的最佳工艺条件为：超声功率389.5W,提取时间21min,料液比1：20。提取千层金精油得率的预测值为4.542%,验证值为4.536%。影响千层金精油提取率的主要因素主次顺序为料液比>超声时间>超声功率。3、采用顶空固相微萃取法、水蒸气蒸馏法、超临界CO2流体萃取法、超声波辅助萃取法和有机溶剂萃取法等方法获的的千层金挥发组分或精油进行GC-MS分析、鉴定和比较。采用HS-SPME提取的千层金挥发物质检测出76种,占总峰面积的97.28%;采用HD提取的千层金挥发物质检测出37种,占总峰面积的99.67%;采用SFE提取的千层金精油检测出61种物质,含量占峰面总面积的96.65%-采用UAE提取的千层金精油检测出42种物质,含量占峰面总面积的98.50%-采用有机溶剂萃取法提取的千层金精油检测出41种物质,含量占峰面总面积的96.72%。采用五种不同方法提取的千层金挥发主要物质包括了醚类、烃类、酯类、醇类、酚类、醛类等,其中醚类的所占的相对含量都最大,主要成分都为甲基丁香酚。4、采用了DPPH法、还原力测定以及ABTS法测定由水蒸气蒸馏法、超临界CO2流体萃取法、超声波辅助萃取法三种方法获得的千层金精油的抗氧化能力。试验结果表明：千层金精油具有较强的DPPH自由基清除能力,也具有一定的还原力和清除ABTS+自由基的能力,清除力随着精油浓度的增加而呈现上升趋势。5、以水蒸气蒸馏法提取出的千层金精油为样品,来研究其对铜绿假单胞菌、紫色杆菌、红色粘质沙雷氏菌、白色粘质沙雷氏菌和金黄色葡萄球菌这五种细菌的抑菌活性。采用滤纸片法测定千层金精油对五种供试细菌的抗菌能力,试验结果表明精油对紫色杆菌的抗菌效果最显著,且随着精油浓度的增加抑制圈直径越大,当精油浓度达到40mg·ml-1时,抑制圈直径达到18.53±0.60mm。此外,千层金精油对铜绿假单胞菌、红色粘质沙雷氏菌、白色粘质沙雷氏菌均有一定的抑菌活性。采用肉汤微量稀释法测定MIC和MBC的试验结果表明千层金精油对紫色杆菌的抑菌和杀菌能力最强,其MIC为2.5mg·ml-1, MBC为5mg·ml-1。千层金精油对铜绿假单胞菌、红色粘质沙雷氏菌、白色粘质沙雷氏菌的抑菌和杀菌能力相当,其MIC都为5mg·ml-1,MBC都为10mg·ml-1。千层金精油对金黄色葡萄球菌的MIC为5mg·ml-1,MBC为20mg·ml-1。

关键词：千层金精油提取气质联用抗氧化抗菌

千层金MbEGS/MbIGS基因在甲基丁香酚生物合成中功能的初步分析

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千层金MbEGS/MbIGS基因在甲基丁香酚生物合成中功能的初步分析

作者：林永盛福建农林大学

学位级别：硕士

千层金(Melaleuca bracteata ***.)是桃金娘科(Myrtaceae)白千层属(Melaleuca L)常绿乔木,是具有较高观赏价值的彩叶树种,千层金中挥发性物质甲基丁香酚的含量极高,叶片精油中甲基丁香酚的相对含量可高达90.46%。因此,千层金植株是研究... 详细信息

千层金(Melaleuca bracteata ***.)是桃金娘科(Myrtaceae)白千层属(Melaleuca L)常绿乔木,是具有较高观赏价值的彩叶树种,千层金中挥发性物质甲基丁香酚的含量极高,叶片精油中甲基丁香酚的相对含量可高达90.46%。因此,千层金植株是研究甲基丁香酚生物合成途径的良好材料。目前,国内外关于千层金繁殖栽培技术、精油提取及成分分析等方面已有相关研究,但关于千层金挥发性香气合成途径中分子调控机制的研究报道还比较少。因此,本研究以千层金扦插苗为试验材料,通过病毒诱导基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)、瞬时表达技术、同源建模与分子对接技术,研究甲基丁香酚生物合成途径中丁香酚合成酶基因和异丁香酚合成酶基因功能的初步分析,主要研究结果如下:1.采用农杆菌介导法,将构建好的过表达载体pCam1304-MCS35S-MbEGS1和pCam1304-MCS35S-MbEGS2,转化至千层金枝条。通过qRT-PCR和GC-MS分析过表达MbEGS基因对甲基丁香酚生物合成途径上关键基因转录水平和甲基丁香酚含量的影响,结果表明,MbEGS1基因过表达处理组中,MbEGS1基因转录水平较空载组提高了13.46倍,甲基丁香酚含量上升了18.68%。MbEGS2过表达处理组中,MbEGS2基因转录水平较空载组提高了12.47倍,甲基丁香酚含量上升16.48%。证明MbEGS基因是千层金甲基丁香酚生物合成途径中的关键基因。2.利用VIGS载体pNC-TRV2构建千层金MbEGS1和MbEGS2的基因沉默载体pNC-TRV2-MbEGS1和pNC-TRV2-MbEGS2,通过农杆菌介导法和真空渗透法侵染千层金扦插苗。结果表明,MbEGS1基因处理组中,MbEGS1转录水平较空白对照组(CK)和空载对照组分别下降76.10%、79.48%;MbEGS2和MbIGS基因转录水平则分别提高了33.64倍、30.94倍和2.55倍、2.27倍。而在MbEGS2基因处理组中,千层金MbEGS2基因转录水平较CK组和空载组分别下降89.53%、90.35%;MbEGS1和MbIGS基因转录水平则分别提高了3.79倍、3.11倍和27.27倍、25.26倍。甲基丁香酚含量测定结果表明,MbEGS1基因处理组中,甲基丁香酚含量比CK组和空载组分别下降31.91%和28.04%;MbEGS2基因处理组则分别下降23.79%和19.45%。MbEGS基因转录水平的下调不仅导致千层金中甲基丁香酚含量下降,还致使MbIGS基因转录水平上调,表明MbEGS基因是甲基丁香酚合成途径的关键基因且和MbIGS基因存在底物竞争关系。3利用RT-PCR技术从千层金中克隆得到1条异丁香酚合成酶基因(MbIGS),其编码区长度为657bp,编码218个氨基酸,序列比对和系统进化树分析表明,MbIGS编码的氨基酸序列与巨桉(Eucalyptus grandis)Eg IGS1、麻疯树(Jatropha curcas)Jc IGS1、银白杨(Populus alba)Pa IGS1分别具有57.89%、52.35%、51.10%的同源性。采用pCam1304-MCS35S瞬时表达载体,构建MbIGS的过表达载体pCam1304-MCS35S-MbIGS,通过农杆菌介导法转化千层金枝条。结果表明,MbIGS的转录水平较空载组提高了12.23倍,而甲基丁香酚的含量提高了43.41%,在MbIGS基因过表达处理组中检测到0.15 mg·g微量的丁香酚与异丁香酚混合物,但并未检测到甲基异丁香酚的存在。由此,推测千层金MbIGS基因可能是一个具有双功能性的基因,既可以催化乙酸松柏酯生成异丁香酚,也可以催化乙酸松柏酯生成丁香酚。4.利用SWISS-MODEL与Auto Dock Tools软件对千层金MbEGS和MbIGS进行蛋白质三维结构建模与分子对接。结果表明,MbEGS1与乙酸松柏酯在Asn157、Phe159和Tyr162处形成氢键,最低结合能为-6.11kcal/mol,MbEGS2分别在Phe22、Gly23、Thr90、Phe120和Phe162处形成氢键,最低结合能为-6.01kcal/mol,而MbIGS则分别在Leu66、Val76、Thr133和Arg135处形成氢键,最低结合能为-6.38kcal/mol。其中,Phe159、Phe22、Gly23、Phe120、Phe162、Leu66和Val76为疏水性氨基酸,疏水性氨基酸可以在对接结合口袋中形成疏水作用,而疏水作用可进一步加强配体小分子与蛋白质大分子结合,有利于配体小分子稳定结合在蛋白质的活性口袋中。表明千层金MbEGS和MbIGS与底物作用的结合位点

关键词：千层金丁香酚合成酶瞬时表达基因沉默分子对接

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千层金精油对桔小实蝇引诱效果研究

千层金精油对桔小实蝇引诱效果研究

作者：范志成福建农林大学

学位级别：硕士

千层金(Melaleuca bracteata),属于桃金娘科白千层属,为常绿乔木。千层金不仅具备有的较高的观赏价值和较强的适应能力,而且其叶片富含植物精油,香气浓郁,对桔小实蝇具有较强的引诱效果。本试验选用福建地区的千层金作为原料,研究了千... 详细信息

千层金(Melaleuca bracteata),属于桃金娘科白千层属,为常绿乔木。千层金不仅具备有的较高的观赏价值和较强的适应能力,而且其叶片富含植物精油,香气浓郁,对桔小实蝇具有较强的引诱效果。本试验选用福建地区的千层金作为原料,研究了千层金精油的水蒸气蒸馏法提取工艺,以及选用福建的特色名优水果园作为试验区,对千层金精油对桔小实蝇的引诱效果进行了田间试验研究,为实际生产、田间使用提供依据。研究结果表明:1、采用水蒸气蒸馏法提取千层金精油,探讨影响精油提取率的主要因素。结果表明,千层金精油较忧的提取工艺条件为:料液比1:5、浸泡时间3h、提取时间3h,在此工艺条件下精油提取率为0.841%。影响千层金精油提取率的主要因素主次顺序为:提取时间>料液比>浸泡时间。2、通过田间试验,对比千层金精油、市售引诱剂、甲基丁香酚对桔小实蝇的引诱效果。结果表明:引诱效果从大到小顺序为:市售引诱剂>千层金精油>甲基丁香酚,药效持续时间:市售引诱剂>千层金精油>甲基丁香酚。三种物质引诱到的桔小实蝇均为雄虫。3、通过田间试验,探究往千层金精油中按比例加入水解蛋白、果汁后的桔小实蝇雌雄虫的引诱效果。结果表明:引诱桔小实蝇总数从大到小顺序为:千层金精油>千层金精油+25%水解蛋白>千层金精油+圣女果汁>圣女果汁>25%水解蛋白;引诱雌虫的效果从到小顺序为:25%水解蛋白>圣女果汁>千层金精油+25%水解蛋白>千层金精油+圣女果汁>千层金精油。4、通过田间试验,探究千层金精油在不同的挂瓶数、不同的高度、不同的诱捕器、不同的加药时期、不同的药量、不同的浓度下对桔小实蝇的引诱效果。结果表明:田间使用千层金精油做为桔小实蝇引诱剂时,综合考虑引诱效果和经济效益,建议果园每亩挂5个诱捕器,诱捕器悬挂于距地1-1.5m,采用涡旋式市售诱捕器,每隔15天加药一次,每次加药剂1mL,选用100%浓度的千层金精油。

关键词：千层金精油提取桔小实蝇引诱效果