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暗褐脉柄牛肝菌子实体多糖的分离纯化、结构表征及体外降血糖活性

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食品科学 2024年第8期45卷 55-62页

作者：潘章超张人谕黎欢昶曾念开王勇热带药物创新与转化教育部工程研究中心人机智能协同肿瘤精准诊疗国际联合研究中心海南省热带药用植物研究开发重点实验室海南医学院药学院海南海口571199

为研究暗褐脉柄牛肝菌多糖的结构特性及生物活性,本研究以暗褐脉柄牛肝菌子实体为研究对象,采用水提醇沉法制备粗多糖,Sevag试剂脱蛋白,大孔吸附树脂脱色,DEAE-52纤维素柱色谱分离,丙烯葡聚糖凝胶S-400HR纯化制备均一多糖。采用高效凝... 详细信息

为研究暗褐脉柄牛肝菌多糖的结构特性及生物活性,本研究以暗褐脉柄牛肝菌子实体为研究对象,采用水提醇沉法制备粗多糖,Sevag试剂脱蛋白,大孔吸附树脂脱色,DEAE-52纤维素柱色谱分离,丙烯葡聚糖凝胶S-400HR纯化制备均一多糖。采用高效凝胶渗透法测定分子质量、PMP柱前衍生法结合高效液相色谱测定单糖组成、紫外光谱分析是否含蛋白或核酸、红外光谱分析官能团种类、核磁共振波谱初步分析多糖的结构,扫描电子显微镜观察多糖的形貌。利用α-葡萄糖苷酶抑制实验筛选出活性较好的多糖组分并进一步研究其酶动力学,初步阐明暗褐脉柄牛肝菌多糖的体外降血糖作用机制和类型。结果表明,筛选的4种大孔树脂(HP 2MGL、HP 20、SP 850、SP 825)中,SP 825大孔树脂综合脱色效果最好;活性组分(PPP-0)重均分子质量为31 059 Da,含有α和β构型糖苷键,是一种由半乳糖Gal、葡萄糖Glc、岩藻糖Fuc、甘露糖Man组成的杂多糖;体外降血糖活性实验表明粗多糖和3种均一多糖组分均对α-葡萄糖苷酶有抑制作用,其中PPP-2抑制率最高,PPP-0次之,且在酶动力学上属于竞争性可逆抑制。本研究可为暗褐脉柄牛肝菌多糖在降血糖相关功能食品和药品方面的开发提供理论依据。

关键词：暗褐脉柄牛肝菌多糖分离纯化结构表征降血糖活性

乳清蛋白水解产物中抗氧化肽的分离纯化及应用

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中国食品学报 2023年第4期23卷 35-47页

作者：王昊乾刘怡婷张静雯张和平孙天松姚国强内蒙古农业大学乳品生物技术与工程教育部重点实验室农业农村部奶制品加工重点实验室内蒙古自治区乳品生物技术与工程重点实验室呼和浩特010018

目的:从乳清蛋白水解物中筛选出一种具有较强抗氧化活性的多肽,减少真空冷冻干燥过程中对乳双歧杆菌Probio-M8的细胞损伤。方法:通过碱性蛋白酶水解乳清蛋白,经超滤分离后得到3种分子质量k1(>8 ku)、k2(3~8 ku)和k3(<3 ku)的多肽样品,... 详细信息

目的:从乳清蛋白水解物中筛选出一种具有较强抗氧化活性的多肽,减少真空冷冻干燥过程中对乳双歧杆菌Probio-M8的细胞损伤。方法:通过碱性蛋白酶水解乳清蛋白,经超滤分离后得到3种分子质量k1(>8 ku)、k2(3~8 ku)和k3(分离、纯化和鉴定,以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)清除率、抗超氧阴离子自由基和对氧化自由基的吸收能力作为检测指标,筛选具有较强抗氧化能力的组分作为保护剂,应用于乳双歧杆菌Probio-M8的真空冷冻干燥过程中。结果:经超滤、蛋白层析及液相色谱分离后,k3样品中的3-2和4-6两个组分具有较强抗氧化活性,从组分3-2和4-6中分别鉴定出5条和6条潜在的抗氧化肽序列。在乳双歧杆菌Probio-M8真空冷冻干燥中的应用结果表明,多肽组分3-2能够显著提高菌种存活率至(88.31±0.02)%,同时还能够降低胞内活性氧水平并保护细胞活力。结论:抗氧化多肽组分3-2能够作为冻干保护剂,在真空冷冻干燥过程中减少乳双歧杆菌Probio-M8受到细胞损伤。

关键词：乳清蛋白抗氧化肽分离纯化乳双歧杆菌真空冷冻干燥

紫苏粕蛋白抗氧化活性肽的制备、分离纯化及序列鉴定

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中国食品学报 2023年第9期23卷 347-355页

作者：张恒慧张志军陈士国叶兴乾张国华太原工业学院生物与食品教研室太原030008 中北大学化学工程与技术学院太原030051 浙江大学生物系统工程与食品科学学院杭州310058 山西大学生命科学学院太原030006

以紫苏粕粉为原料,使用碱性蛋白酶进行水解反应,制备抗氧化活性肽。采用超滤离心、凝胶过滤色谱和反相色谱等分离纯化手段对其富集。结果表明,相较其它3种蛋白酶,碱性蛋白酶Alcalase对紫苏粕蛋白的水解程度最高,约为(25.94±0.21)%;碱... 详细信息

以紫苏粕粉为原料,使用碱性蛋白酶进行水解反应,制备抗氧化活性肽。采用超滤离心、凝胶过滤色谱和反相色谱等分离纯化手段对其富集。结果表明,相较其它3种蛋白酶,碱性蛋白酶Alcalase对紫苏粕蛋白的水解程度最高,约为(25.94±0.21)%;碱性蛋白酶作用紫苏蛋白后的酶解产物的抗氧化活性最好,对DPPH自由基清除率约为(91.01±0.73)%。酶解上清液经超滤离心分离后最小分子质量组分F1(小于3 ku)抗氧化活性最强,F1组分经Sephadex G-25凝胶过滤色谱分离后按照分子质量大小依次得到P1、P2、P33个组分,其中分子质量最小的P3组分抗氧化活性最高。P3组分经反相色谱分离所得4个组分中,最后被洗脱出来的P3-4组分疏水性最强且DPPH·自由基清除率最高,质量浓度为3μg/mL的P3-4溶液的DPPH·清除率为(58.8±0.78)%。通过LC-MS-MS鉴定,抗氧化活性肽P3-4组分为十二肽,其氨基酸序列为Lys-Leu-Lys-Asp-Ser-Phe-Glu-Arg-Gln-Gly-Met-Val,分子质量为1437.8 u。本研究结果为深入开发紫苏蛋白资源,研发紫苏抗氧化活性肽提供理论参考。

关键词：紫苏粕蛋白抗氧化分离纯化生物活性肽氨基酸序列

金华火腿中生物活性肽的血管紧张素转化酶调节功能及其分离纯化

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中国食品学报 2023年第5期23卷 78-86页

作者：邢路娟郝月静左庆翔周光宏张万刚南京农业大学食品科技学院国家肉品质量安全与工程技术研究中心南京210095

为了探究干腌火腿中生物活性肽的降血压功能,以金华火腿为原料,提取其生物活性肽成分,并通过分离纯化鉴定具有血管紧张素转化酶(ACE)调节功能的生物活性肽。结果表明:经Sephadex G-25分子排阻色谱分离后,金华火腿生物活性肽可分为A、B、... 详细信息

为了探究干腌火腿中生物活性肽的降血压功能,以金华火腿为原料,提取其生物活性肽成分,并通过分离纯化鉴定具有血管紧张素转化酶(ACE)调节功能的生物活性肽。结果表明:经Sephadex G-25分子排阻色谱分离后,金华火腿生物活性肽可分为A、B、C、D共4个组分,其中组分C的ACE抑制活性最强,达到31.8%。将组分C经离子交换柱分离后,金华火腿多肽可分为C1、C2、C3、C4共4个组分,其中C2组分的ACE抑制活性显著高于其它组分,活性高达49.0%(P<0.05)。经Nano-LC-ESI-MS/MS鉴定得到C2中含有8条多肽,经ACE活性测定,序列IESDLERAEE在8条多肽中活性最强,ACE抑制活性达到59.1%。结论:金华火腿多肽具有良好的体外调节ACE活性的功能,为进一步开展其体内血压调节功能研究奠定了基础。

关键词：生物活性肽金华火腿 ACE抑制活性分离纯化

西藏干酪源植物乳杆菌产细菌素的分离纯化及特性研究

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中国食品学报 2023年第8期23卷 24-31页

作者：周倩玉郦萍王利君周青青顾青浙江工商大学食品与生物工程学院浙江省食品微生物技术研究重点实验室杭州310018

从西藏干酪中分离筛选出1株能够产生抑菌活性物质的乳酸菌,该菌的发酵上清液在排除有机酸、过氧化氢的影响后仍有显著抑菌活性,然而,用胃蛋白酶、蛋白酶K和胰蛋白酶处理后抑菌活性丧失,说明该菌的代谢产物中起抑菌作用的物质具有蛋白质... 详细信息

从西藏干酪中分离筛选出1株能够产生抑菌活性物质的乳酸菌,该菌的发酵上清液在排除有机酸、过氧化氢的影响后仍有显著抑菌活性,然而,用胃蛋白酶、蛋白酶K和胰蛋白酶处理后抑菌活性丧失,说明该菌的代谢产物中起抑菌作用的物质具有蛋白质性质,初步确定是一种细菌素。结合形态学观察、生理生化分析及16S r DNA鉴定结果,确定该菌为植物乳杆菌,命名为ZFM804。细菌素经大孔树脂(XAD-16)层析、强阳离子交换层析、RP-HPLC三步法初步纯化。经SDS-PAGE分析该细菌素分子质量约为15 ku。理化性质分析表明该细菌素具有良好的酸碱稳定性:在pH 3~11范围内都具有抑菌活性;良好的热稳定性:100℃处理30 min仍有明显抑菌活性,同时可被人体内蛋白酶降解。抑菌谱测定结果表明,ZFM804植物乳杆菌素对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都有抑制作用,是一种广谱细菌素。

关键词：植物乳杆菌细菌素分离纯化抑菌作用

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澳洲坚果抗氧化肽的分离纯化及肽段鉴定

食品工业科技 2024年第6期45卷 91-99页

作者：付镓榕马尚玄魏元苗徐文婷郭刚军贺熙勇云南省热带作物科学研究所云南景洪666100 云南省澳洲坚果农业工程研究中心云南景洪666100

为研究澳洲坚果抗氧化肽的抗氧化活性和氨基酸组成,以复配蛋白酶水解澳洲坚果粕制备粗多肽,利用超滤、大孔树脂纯化技术制备了抗氧化活性最佳的分子量小于1000 Da的多肽,采用Sephadex G-15凝胶对其分离并评价各组分对DPPH、羟基、ABTS+... 详细信息

为研究澳洲坚果抗氧化肽的抗氧化活性和氨基酸组成,以复配蛋白酶水解澳洲坚果粕制备粗多肽,利用超滤、大孔树脂纯化技术制备了抗氧化活性最佳的分子量小于1000 Da的多肽,采用Sephadex G-15凝胶对其分离并评价各组分对DPPH、羟基、ABTS+自由基的清除能力与还原能力,筛选出抗氧化活性最强组分,利用液相色谱-串联质谱技术(liquid chromatography and tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)进行鉴定并分析。结果表明,葡聚糖凝胶柱层析分离出G1、G2、G3组分,其中G3具有最佳的抗氧化活性,其羟基自由基清除能力半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC_(50))6.18 mg/mL与还原能力IC_(50)2.19 mg/mL优于谷胱甘肽,DPPH自由基清除能力IC_(50)0.50 mg/mL,ABTS+自由基清除能力IC_(50)0.02 mg/mL;通过液相色谱-串联质谱鉴定G3含有46个肽段,肽段长度均小于10个氨基酸,匹配得分大于200分的9条肽段分子量为631~920 Da,均无毒性;筛选获得高抗氧化活性肽HLLPK、KEFFP、KEFFPA,其分子量分别为606.84、666.83、737.92 Da。本研究初步揭示了澳洲坚果抗氧化肽组成,深化了澳洲坚果抗氧化肽的研究,为澳洲坚果抗氧化肽的开发利用提供了理论参考。

关键词：澳洲坚果抗氧化肽抗氧化活性分离纯化肽段鉴定

海鲈鱼酸性磷酸酶分离纯化及其抑制剂虚拟筛选

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食品科学技术学报 2023年第5期41卷 144-152页

作者：李园园魏天雨丁悦艳李红燃师丹华李颖畅李学鹏渤海大学食品科学与工程学院/生鲜农产品贮藏加工及安全控制技术国家地方联合工程研究中心辽宁锦州121013

为延缓海水鱼类肌苷酸降解,保留鱼类本身的鲜味成分,以新鲜的海鲈鱼为研究对象,经NaAc-HAc缓冲液(pH值为5.0)提取,饱和硫酸铵分级沉淀、阴离子交换柱和葡聚糖凝胶柱分离纯化后,研究海鲈鱼肝中酸性磷酸酶(acid phosphatase,ACP)的酶学特... 详细信息

为延缓海水鱼类肌苷酸降解,保留鱼类本身的鲜味成分,以新鲜的海鲈鱼为研究对象,经NaAc-HAc缓冲液(pH值为5.0)提取,饱和硫酸铵分级沉淀、阴离子交换柱和葡聚糖凝胶柱分离纯化后,研究海鲈鱼肝中酸性磷酸酶(acid phosphatase,ACP)的酶学特性,采用虚拟筛选和分子对接技术筛选潜在的天然ACP抑制剂。结果表明:分离纯化出ACPⅠ和ACPⅡ2种同工酶;ACPⅠ的比活力为6.57 U/mg,纯化了36.50倍,回收率为9.96%;ACPⅡ的比活力为4.62 U/mg,纯化了25.69倍,回收率为6.07%。对回收率和纯化倍数相对较高的ACPⅠ进一步研究,发现其K_(m)为3.174 mmol/L,v_(max)为0.982μmol/(L·min)。ACPⅠ最适温度为30℃,最适pH值为5.0。ACPⅠ的二级结构中α-螺旋含量为14.10%,β-折叠含量为35.90%,β-转角含量为18.20%,无规则卷曲含量为32.60%。虚拟筛选出5个多酚类化合物可作为ACP抑制剂,与ACP相互作用方式主要是氢键和疏水作用。在一定浓度范围内(0~1 mmol/L),5个多酚类化合物均能有效抑制ACP活性,浓度越大抑制效果越好。研究旨在为贮藏过程中水产品的风味和品质控制提供理论依据。

关键词：海鲈鱼酸性磷酸酶分离纯化圆二色谱虚拟筛选多酚化合物

黍稷麸皮多糖分离纯化、结构表征及抑菌活性分析

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食品工业科技 2024年第10期45卷 1-7页

作者：陈燕云平华高媛杜远芳刘静张丽珍山西大学生命科学学院山西太原030006 北京市农林科学院质量标准与检测技术研究所北京100097

本研究通过对黍稷麸皮多糖进行分离纯化、结构表征,并研究其抑菌活性,旨在为黍稷加工副产物中营养物质的开发利用提供参考。采用碱提醇沉法提取黍稷麸皮多糖(millet bran polysaccharides,MBP),DEAE-50、Sephadex G-100柱层析分离纯化,... 详细信息

本研究通过对黍稷麸皮多糖进行分离纯化、结构表征,并研究其抑菌活性,旨在为黍稷加工副产物中营养物质的开发利用提供参考。采用碱提醇沉法提取黍稷麸皮多糖(millet bran polysaccharides,MBP),DEAE-50、Sephadex G-100柱层析分离纯化,利用HPLC色谱、红外光谱、原子力显微镜、扫描电镜、X-射线衍射等方法对黍稷麸皮多糖结构进行分析。结果表明,MBP分子量为3.479×104 Da,单糖组成的摩尔比为甘露糖:鼠李糖:葡萄糖:半乳糖:阿拉伯糖:木糖=0.11:0.13:5.86:0.62:1.00:0.52,是β型吡喃多糖。MBP具有良好的热稳定性,在形态结构方面呈片层状,连接紧密,不具备晶体结构。抑菌实验得出,MBP对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度为2 mg/mL。综上,从黍稷麸皮中提取得到的多糖MBP具有良好的抑菌能力。

关键词：黍稷麸皮多糖分离纯化结构表征抑菌活性

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百克量级花岗岩中痕量镎的分离纯化方法研究

原子能科学技术 2022年第6期56卷 1013-1021页

作者：张曦余振华姚曜晖杨素亮张生栋杨志红周今孙雪杰中国原子能科学研究院放射化学研究所北京102413

镎的高生物毒性和长半衰期(t_(1/2)=2.14×10^(6) a)以及在环境中易迁移的性质,使之成为环境放射性污染普查及核设施监测过程中主要关注的核素之一。本文利用酸式消解法实现了百克量级花岗岩的全溶解。以自制的DMDODGA/CMG20树脂作为分... 详细信息

镎的高生物毒性和长半衰期(t_(1/2)=2.14×10^(6) a)以及在环境中易迁移的性质,使之成为环境放射性污染普查及核设施监测过程中主要关注的核素之一。本文利用酸式消解法实现了百克量级花岗岩的全溶解。以自制的DMDODGA/CMG20树脂作为分离材料,利用其对氢氟酸中镎的吸附特性,建立了大体积溶解液中痕量镎的富集-分离流程。同时采用Dowex 1×4阴离子交换树脂进一步实现了对镎的浓缩和纯化。在此基础上,提出了百克量级花岗岩的分离流程,并对流程进行了实验验证。结果表明,花岗岩溶解液澄清、无残渣,分离流程对镎的回收率为87.6%,对岩石基体元素和铀的去污因子均大于1.0×10^(5)。

关键词：花岗岩镎 DMDODGA/CMG20树脂分离纯化