检索结果-南通市图书馆

乳酸乳球菌食品级分泌性表达载体pSQZ的构建及报告蛋白的表达

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国人兽共患病学报 2008年第3期24卷 224-228,275页

作者：孙强正熊衍文叶长芸徐建国中国疾病预防控制中心传染病预防控制所

目的构建乳酸乳球菌(Lactococcus lactis,L lactis)食品级分泌表达载体,表达报告蛋白核酸内切酶(NucA)方法PCR扩增乳酸乳球菌未知分泌蛋白(Usp45)编码基因的启动子、核糖体结合位点、分泌信号和成熟肽前11个氨基酸编码序列,克隆到载体pS... 详细信息

目的构建乳酸乳球菌(Lactococcus lactis,L lactis)食品级分泌表达载体,表达报告蛋白核酸内切酶(NucA)方法PCR扩增乳酸乳球菌未知分泌蛋白(Usp45)编码基因的启动子、核糖体结合位点、分泌信号和成熟肽前11个氨基酸编码序列,克隆到载体pSH91中,构建食品级分泌性表达载体pSQZ;克隆报告蛋白金黄色葡萄球菌NucA成熟肽的编码序列nucA到pSQZ中分泌信号后,转化乳酸乳球菌MBP71,构建乳酸乳球菌分泌性表达系统L lactis MBP71/pSQZ-nucA;采用TB-D法和酶谱法检测乳酸乳球菌分泌性表达的NucA活性。结果PCR扩增得到usp45基因片段,酶切、连接到载体pSH91中构建了食品级表达载体pSQZ;将扩增的nucA基因片段克隆入载体pSQZ并转化乳酸乳球菌,得到乳酸乳球菌分泌性表达系统L lactis MBP71/pSQZ-nucA。在TB-D平板上,L lactis MBP71/pSQZ-nucA克隆子周围出现橙色光晕;在酶谱检测中,L lactis MBP71/pSQZ-nucA上清和菌体在18kDa位置均有橙色条带,但上清条带亮度和宽度大于菌体。结论成功构建了乳酸乳球菌食品级分泌表达系统,实现了报告蛋白NucA在乳酸乳球菌中分泌性表达,为进一步保护性抗原的分泌性表达研究奠定了基础。

关键词：乳酸乳球菌食品级载体分泌性表达报告蛋白

神经营养素-3基因的人工合成及其在毕赤酵母中的分泌性表达

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

微生物学报 2004年第2期44卷 210-214页

作者：张朝春梁伟锋杨希才中国科学院微生物研究所北京100080

根据人神经营养素 3(Humanneurotrohin 3,hNT 3)的基因序列 ,把编码氨基酸的密码子转换成毕赤酵母(Pichiapastoris)偏爱的形式 ,设计了 10条 36～ 5 9nt的寡聚核苷酸引物 ,通过 5次连续PCR反应 ,获得了人工合成的NT 3cDNA片段 (简称NT... 详细信息

根据人神经营养素 3(Humanneurotrohin 3,hNT 3)的基因序列 ,把编码氨基酸的密码子转换成毕赤酵母(Pichiapastoris)偏爱的形式 ,设计了 10条 36～ 5 9nt的寡聚核苷酸引物 ,通过 5次连续PCR反应 ,获得了人工合成的NT 3cDNA片段 (简称NT 3b基因 )。将合成的NT 3b基因克隆到pPIC9K质粒上 ,获得重组表达载体pPIC9K NT 3b。将重组表达载体pPIC9K NT 3b和pPIC9K hNT 3分别电击转化宿主毕赤酵母GS115菌株 ,经筛选得到重组转化子。不同转化子经甲醇诱导 ,表达产物进行SDS PAGE检测、Westernblot检测和ELISA分析 ,结果表明 ,NT 3b基因和hNT 3基因成功获得分泌性表达 ,从整体水平上 ,使用偏爱密码子的NT 3b基因在毕赤酵母GS115菌株中的表达明显优越于hNT 3基因 (x2 =4 .334,P 表达量在诱导后 72～ 96h最高 ,达到 31mg L左右。

关键词：神经营养素-3 基因人工合成毕赤酵母分泌性表达偏爱密码子真核蛋白表达系统

神经营养因子-3 cDNA的克隆以及在酿酒酵母中的分泌性表达

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国神经科学杂志 1998年第2期14卷 90-94页

作者：刘志敏王笑辛蓝正道谢志伟戚正武朱诚第二军医大学长征医院神经外科上海200003 中国科学院上海生物化学研究所分子生物学国家重点实验室上海200031

从原代培养人许旺细胞申提取总RNA，用RT－PCR方法获取了编码带向导肽和成熟的NT-3两个cDNA片段，经DNA序列测定表明其顺序与文献报道一致。将这两个cDNA片段克隆到大肠-酵母穿梭质粒pVT102U／α上。用酵母整体细胞法将重组质粒转化酵... 详细信息

从原代培养人许旺细胞申提取总RNA，用RT－PCR方法获取了编码带向导肽和成熟的NT-3两个cDNA片段，经DNA序列测定表明其顺序与文献报道一致。将这两个cDNA片段克隆到大肠-酵母穿梭质粒pVT102U／α上。用酵母整体细胞法将重组质粒转化酵母宿主细胞，经筛选后，获得分泌性表达。这两种cDNA片段的表达产物经SDS-PAGE电泳鉴定，大小都在15ku左右，说明带前导肽的NT-3在酵母细胞中获得了正确的加工。将这两种部分纯化的NT－3样品经鼠胚背根神经节生物活性分析，表明具有明显的促进细胞存活和突起生长的作用。人神经营子-3％在酿酒酵母系统获得有生物活性的表达。

关键词：神经营养因子分泌性表达酿酒酵母 CDNA

过敏毒素C3a在肾小球足细胞中的分泌性表达试验

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

东南国防医药 2015年第3期17卷 225-228页

作者：郑敬民尹广赵文紧南京军区南京总医院国家肾脏疾病临床医学研究中心全军肾脏病研究所江苏南京210002

目的建立过敏毒素C3a分泌性表达慢病毒体系和分泌性高表达过敏毒素C3a的足细胞株,为研究过敏毒素C3a对足细胞的作用创造条件。方法人工合成过敏素素C3a分泌性表达基因;以重组慢病毒为媒介,将过敏毒素C3a分泌性表达基因导入到人足细胞系(... 详细信息

目的建立过敏毒素C3a分泌性表达慢病毒体系和分泌性高表达过敏毒素C3a的足细胞株,为研究过敏毒素C3a对足细胞的作用创造条件。方法人工合成过敏素素C3a分泌性表达基因;以重组慢病毒为媒介,将过敏毒素C3a分泌性表达基因导入到人足细胞系(human podocytes,HPC);利用药物筛选和连续梯度稀释克隆法获得稳定整合有过敏毒素C3a转基因结构的HPC细胞株;利用实时定量PCR从mRNA水平、酶联免疫吸附测定方法从蛋白质水平对过敏毒素C3a的表达和分泌情况进行鉴定。结果成功建立了过敏毒素C3a分泌性表达慢病毒体系;获得了分泌性高表达过敏毒素C3a的人肾小球足细胞株。结论所建立的过敏毒素C3a分泌性表达慢病毒体系和分泌性高表达过敏毒素C3a的足细胞株,为进一步分析过敏毒素C3a对足细胞的作用创造了条件。

关键词：过敏毒素 C3a 慢病毒表达体系分泌性表达

白喉毒素无毒突变体H21G蛋白的分泌性表达及纯化

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国生物制品学杂志 2016年第12期29卷 1262-1266页

作者：范锋锋李燕婷金鑫刘月萍吴朝今冯宜扬乔瑞洁许博赵志强谭小梅谢贵林兰州生物制品研究所有限责任公司甘肃省疫苗工程技术研究中心甘肃兰州730046 中国生物技术股份有限公司北京100029

目的原核分泌性表达白喉毒素无毒突变体H21G蛋白并进行纯化,为下一步开发以重组H21G蛋白为基础的疫苗奠定基础。方法以p ET16a-H21G质粒为模板,PCR扩增H21G基因,亚克隆至p ET22b载体中,构建重组原核表达质粒p ET22b-H21G,转化感受态大... 详细信息

目的原核分泌性表达白喉毒素无毒突变体H21G蛋白并进行纯化,为下一步开发以重组H21G蛋白为基础的疫苗奠定基础。方法以p ET16a-H21G质粒为模板,PCR扩增H21G基因,亚克隆至p ET22b载体中,构建重组原核表达质粒p ET22b-H21G,转化感受态大肠埃希菌BL21（DE3）,IPTG诱导重组H21G蛋白分泌性表达。重组蛋白经渗透压休克,DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析和Phenyl Sepharose 6FF（high sub）疏水层析纯化后,使用还原/非还原SDS-PAGE和HPLC法分析纯化蛋白的纯度,窄范围等电聚焦分析其等电点,MALDI-TOF质谱法分析其相对分子质量,N-末端测序法鉴定N-末端氨基酸序列。结果重组原核分泌性表达质粒p ET22b-H21G经双酶切（NcoⅠ和XhoⅠ）和测序证明构建正确;目标蛋白以可溶形式存在于宿主菌周质间隙,表达量为10%-15%;经纯化后,重组蛋白纯度达95%以上,等电点在4.55-6.20之间,相对分子质量和N-末端氨基酸序列均与白喉毒素相符合。结论成功分泌性表达并纯化了重组白喉毒素无毒突变体H21G蛋白,为下一步开发以重组H21G蛋白为基础的疫苗奠定了基础。

关键词：白喉毒素无毒突变体H21G 分泌性表达纯化

重组绵羊白细胞介素2基因的分泌性表达及表达产物的提取

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

特产研究 2002年第4期24卷 23-24页

作者：刘艳环苗利光陈立志刘晓颖张洪涛吉林特产高等专科学校吉林吉林132109 中国农业科学院特产研究所吉林吉林132109

将构建的绵羊白细胞介素2基因表达菌株(PMPOIL2)接种在营养肉汤培养基上,培养20h,分别收集菌体及上清液。菌体超声裂解;上清液中的蛋白质分别用MgCl2、(NH4)2SO4、NaCl沉积。用抗Pilin-IL2血清检测菌体裂解物及上清沉淀物,结果上清沉淀... 详细信息

将构建的绵羊白细胞介素2基因表达菌株(PMPOIL2)接种在营养肉汤培养基上,培养20h,分别收集菌体及上清液。菌体超声裂解;上清液中的蛋白质分别用MgCl2、(NH4)2SO4、NaCl沉积。用抗Pilin-IL2血清检测菌体裂解物及上清沉淀物,结果上清沉淀物中有凝集抗原,而菌体中没有,并且(NH4)2SO4沉积的效果最好。

关键词：绵羊白细胞介素2基因分泌性表达表达产物

空肠弯曲菌cjaA基因在乳酸乳球菌中分泌性表达及口服免疫研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

空肠弯曲菌cjaA基因在乳酸乳球菌中分泌性表达及口服免疫研究

铜绿假单胞菌外毒素A全基因的克隆与分泌性表达

第六届中国兽药大会

作者：王传文周宏专郭芳芳陈玉霞杨兵苏霞朱瑞良徐福洲北京市农林科学院畜牧兽医研究所畜禽疫病防控技术北京市重点实验室山东农业大学动物科技学院山东省动物生物技术与疫病防治重点实验室

为降低鸡肠道中空肠弯曲菌的定植水平,本试验将空肠弯曲菌的膜转运蛋白cjaA基因、usp45基因分泌信号肽以及大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)编码基因通过串联的方式插入食品级乳酸乳球菌表达载体,构建分泌性表达系统,将重组分泌性乳酸... 详细信息

为降低鸡肠道中空肠弯曲菌的定植水平,本试验将空肠弯曲菌的膜转运蛋白cjaA基因、usp45基因分泌信号肽以及大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)编码基因通过串联的方式插入食品级乳酸乳球菌表达载体,构建分泌性表达系统,将重组分泌性乳酸乳球菌口服免疫鸡,从而达到降低空肠弯曲菌在鸡肠道中定植的目的。首先利用PCR扩增乳酸乳球菌MG1363未知分泌蛋白Usp45基因分泌信号肽的编码序列SPusp45,克

关键词：空肠弯曲菌膜转运蛋白CjaA 乳酸乳球菌分泌性表达口服免疫

来源： cnki会议评论

在线全文

cnki会议

学校读者我要写书评

暂无评论

微生物学免疫学进展 2006年第1期34卷 22-26页

作者：赵志强方悦群杜琳谢贵林兰州生物制品研究所兰州730046

利用PCR技术从铜绿假单胞菌PA103株DNA中扩增到铜绿假单胞菌外毒素A(EPA)全基因,选择合适位点插入pBV221 PLPR启动子下游,构建分泌性表达载体;转化宿主***5α、JM109后,热诱导表达;SDS-PAGE分析表明表达产物占菌体总蛋白量的17%左右,分... 详细信息

利用PCR技术从铜绿假单胞菌PA103株DNA中扩增到铜绿假单胞菌外毒素A(EPA)全基因,选择合适位点插入pBV221 PLPR启动子下游,构建分泌性表达载体;转化宿主***5α、JM109后,热诱导表达;SDS-PAGE分析表明表达产物占菌体总蛋白量的17%左右,分子量69kD左右;分离细胞组分蛋白发现仅有少量重组蛋白以成熟毒素形式分泌到宿主菌的周质间隙,并能检测到Vero细胞毒活性,其余大部分以包涵体形式存在。免疫印迹检测显示,表达产物与兔抗EPA多抗有特异性反应。此项工作为重组EPA的研制建立了有用的技术方法。

关键词：铜绿假单胞菌外毒索A 分泌性表达 Vero细胞毒性

人白细胞介素-17在黑曲霉菌中的分泌性表达

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

人白细胞介素-17在黑曲霉菌中的分泌性表达