神经营养因子-3 cDNA的克隆以及在酿酒酵母中的分泌性表达

作     者：刘志敏 王笑辛 蓝正道 谢志伟 戚正武 朱诚 

作者机构：第二军医大学长征医院神经外科上海200003 中国科学院上海生物化学研究所分子生物学国家重点实验室上海200031 

出 版 物：《中国神经科学杂志》 (神经科学通报(英文版))

年 卷 期：1998年第14卷第2期

页      面：90-94页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 071006[理学-神经生物学] 

主　　题：神经营养因子 分泌性表达 酿酒酵母 CDNA 

摘      要：从原代培养人许旺细胞申提取总RNA，用RT－PCR方法获取了编码带向导肽和成熟的NT-3两个cDNA片段，经DNA序列测定表明其顺序与文献报道一致。将这两个cDNA片段克隆到大肠-酵母穿梭质粒pVT102U／α上。用酵母整体细胞法将重组质粒转化酵母宿主细胞，经筛选后，获得分泌性表达。这两种cDNA片段的表达产物经SDS-PAGE电泳鉴定，大小都在15ku左右，说明带前导肽的NT-3在酵母细胞中获得了正确的加工。将这两种部分纯化的NT－3样品经鼠胚背根神经节生物活性分析，表明具有明显的促进细胞存活和突起生长的作用。人神经营子-3％在酿酒酵母系统获得有生物活性的表达。