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内蒙古白绒山羊毛囊干细胞巢的间接定位

农业生物技术学报 2014年第3期22卷 326-332页

作者：王潇尹俊内蒙古农业大学生命科学学院

毛囊是皮肤的附属物,其周期性再生涉及毛囊干细胞的激活与调控。本研究采集不同月份的内蒙古白绒山羊(Capra hircus)皮肤组织,通过固定、脱水、包埋、石蜡切片、苏木精-伊红(hematoxylin and eosin stain,HE)染色,用角蛋白15(keratin 15... 详细信息

毛囊是皮肤的附属物,其周期性再生涉及毛囊干细胞的激活与调控。本研究采集不同月份的内蒙古白绒山羊(Capra hircus)皮肤组织,通过固定、脱水、包埋、石蜡切片、苏木精-伊红(hematoxylin and eosin stain,HE)染色,用角蛋白15(keratin 15,K15)、酪氨酸酶相关蛋白2(tyrosine-related protein 2,Trp2)和增殖细胞核抗原3(proliferating cell nuclear antigen 3,PCNA3)的抗体进行免疫组化检测,最终确定毛囊干细胞巢所在的位置。结果显示,无论初级毛囊还是次级毛囊,Trp2在毛囊的隆突部表达,而且在毛囊的兴盛期和休止期信号没有明显差异,但是初级毛囊的信号明显强于次级毛囊;K15主要在休止期隆突部及下面的毛球底部的外根鞘表达,在兴盛期隆突部以下至毛囊上部的外根鞘表达;PCNA在兴盛期毛囊各个部位均有表达,休止期信号则较弱。Trp2为准确定位毛囊不同类型干细胞共有的巢提供了实验证据,K15表明了干细胞的迁移轨迹,PCNA则反映了毛囊的增殖情况。实验结果为进一步找到毛囊干细胞的直接标记以及研究绒毛再生期间毛囊干细胞的调控机制提供了线索。

关键词：内蒙古白绒山羊毛囊干细胞免疫组化

内蒙古白绒山羊小肠可吸收氨基酸模式对MDV和PDV组织游离氨基酸代谢影响的研究

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畜牧兽医学报 2005年第4期36卷 337-342页

作者：甄玉国卢德勋王洪荣马宁赵秀英张海英吉林农业大学动物科学技术学院长春130118 内蒙古畜牧科学院动物营养研究所呼和浩特010030

选用3只体况良好,体重25～30kg的2周岁内蒙古白绒山羊半同胞羯羊,安装永久性十二指肠近端瘘管以及门静脉、肠系膜静脉、颈动脉、颈静脉慢性血插管进行试验。采用3×3拉丁方试验设计,3个试验处理的十二指肠氨基酸灌注模式分别为M、M90+C1... 详细信息

选用3只体况良好,体重25～30kg的2周岁内蒙古白绒山羊半同胞羯羊,安装永久性十二指肠近端瘘管以及门静脉、肠系膜静脉、颈动脉、颈静脉慢性血插管进行试验。采用3×3拉丁方试验设计,3个试验处理的十二指肠氨基酸灌注模式分别为M、M90+C10、M80+C20。结果表明,小肠可吸收氨基酸模式对MDV和PDV组织SAA的净流量具有显著影响,其中Met随着绒毛模式所占比例的增加而显著提高(P绒山羊胃肠道组织摄取了大量的BCAA。因此,在调整绒山羊小肠氨基酸模式时应注意BCAA,尤其是Leu的补充。小肠可吸收氨基酸模式对绒山羊体内氨基酸代谢的利用有显著影响,绒山羊小肠内理想的氨基酸模式应界于M90+C10和M80+C20之间。

关键词：内蒙古白绒山羊氨基酸模式 MDV 游离氨基酸小肠组织代谢影响吸收十二指肠氨基酸代谢试验设计试验处理门静脉永久性肠系膜颈动脉拉丁方 SAA Met 净流量 Cys 胃肠道内理想体况羯羊体重瘘管绒毛

内蒙古白绒山羊蛋白激酶B/AKT基因的克隆及表达模式分析

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中国农业科学 2011年第13期44卷 2787-2795页

作者：杨娇馥史偈君梁燕郑旭张涛秦毅王志钢刘东军内蒙古大学生命科学学院/哺乳动物生殖生物学与生物技术教育部重点实验室

【目的】克隆内蒙古白绒山羊AKT基因cDNA并分析其基本表达模式。【方法】RT-PCR克隆AKT基因cDNA。通过在线软件BLAST进行核酸序列分析,用SMART与Psite进行氨基酸序列分析。半定量RT-PCR检测AKT基因在绒山羊组织中的表达特异性。Western ... 详细信息

【目的】克隆内蒙古白绒山羊AKT基因cDNA并分析其基本表达模式。【方法】RT-PCR克隆AKT基因cDNA。通过在线软件BLAST进行核酸序列分析,用SMART与Psite进行氨基酸序列分析。半定量RT-PCR检测AKT基因在绒山羊组织中的表达特异性。Western blotting检测绒山羊胎儿成纤维细胞中AKT表达。【结果】克隆到的内蒙古白绒山羊AKT基因cDNA片段长1 443 bp,包含了编码480个氨基酸残基的全长ORF,氨基酸序列与绵羊(NM001161857.1)同源性为97%。SMART分析表明,ORF编码的蛋白包含了可与3-磷酸肌醇结合的PH结构域及具有丝氨酸/苏氨酸激酶催化活性的STKc结构域。Psite分析表明,含有1个cAMP-/cGMP-依赖性蛋白激酶磷酸化位点、6个蛋白激酶C磷酸化位点、10个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点、2个蛋白激酶ATP结合区信号和1个丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶活性区域。PSORT程序预测其定位于细胞质中。AKT基因mRNA丰度在睾丸、脑和肾中较高,在脾、肝、肺及乳腺组织中相对低。绒山羊胎儿成纤维细胞中抑制mTOR活性,AKT表达量降低。【结论】内蒙古白绒山羊AKT基因cDNA全长ORF的核苷酸序列与绵羊的AKT基因具有很高的同源性,AKT基因在脾、睾丸、脑、肝、肺、乳腺及肾组织中均有表达,其AKT的表达受mTOR信号通路的调控。

关键词：内蒙古白绒山羊 AKT 基因克隆表达模式分析

内蒙古白绒山羊 GHR和GDF9 基因多态性及其与生产性状的相关性分析

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2020年第3期48卷 1-8页

作者：王真王敏李铭闫海龙朱海鲸陈宏屈雷蓝贤勇西北农林科技大学动物科技学院陕西杨凌712100 西南大学动物科技学院重庆荣昌402460 榆林学院生命科学研究中心陕西榆林719000

【目的】探究生长激素受体(GHR)和生长分化因子9(GDF9)基因多态性与内蒙古白绒山羊生产性状的相关性。【方法】采集452只阿拉善品系内蒙古白绒山羊雌性个体(其中包括382只18月龄左右的育成羊和70只36月龄左右的成年羊)的耳组织并测定其... 详细信息

【目的】探究生长激素受体(GHR)和生长分化因子9(GDF9)基因多态性与内蒙古白绒山羊生产性状的相关性。【方法】采集452只阿拉善品系内蒙古白绒山羊雌性个体(其中包括382只18月龄左右的育成羊和70只36月龄左右的成年羊)的耳组织并测定其体质量和体尺数据。提取试验羊耳组织的DNA,通过InDel分型和琼脂糖凝胶电泳技术鉴定出452只内蒙古白绒山羊GHR和GDF9基因的多态性,利用SPSS 23.0分析软件探讨其与生产性状的相关性。【结果】在内蒙古白绒山羊GHR基因第1内含子中检测到9-bp插入缺失标记(InDel)位点(NC_022312:g.42801_42809delCTGTGGCAT),该位点属于低度多态(PIC0.05);在GDF9基因3′调控区检测到12-bp InDel位点(NC_022299.1:g.66028950insTACTTTCAACAA),该位点属于中度多态(0.250.05)。在育成羊中,GDF9基因3′调控区12-bp InDel位点杂合基因型和纯合缺失基因型个体体质量、体高和胸围均值极显著大于纯合插入基因型(P内蒙古白绒山羊体质量和部分生长性状具有显著或极显著的相关性。

关键词：内蒙古白绒山羊生长激素受体(GHR)基因生长分化因子9(GDF9)基因生产性状基因多态性 InDel标记位点

内蒙古白绒山羊LDH-A基因cDNA的克隆与特性分析

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中国农业科学 2008年第9期41卷 2813-2819页

作者：王志钢其布日包婵婵旭日干内蒙古大学生命科学学院/哺乳动物生殖生物学与生物技术教育部重点实验室

【目的】克隆内蒙古白绒山羊乳酸脱氢酶A(LDH-A)基因并分析其基本表达模式。【方法】采用RT-PCR和3′RACE技术克隆基因,将得到的基因cDNA序列及其编码的氨基酸序列进行生物信息学分析。利用RT-PCR方法进行组织表达检测。【结果】获得了... 详细信息

【目的】克隆内蒙古白绒山羊乳酸脱氢酶A(LDH-A)基因并分析其基本表达模式。【方法】采用RT-PCR和3′RACE技术克隆基因,将得到的基因cDNA序列及其编码的氨基酸序列进行生物信息学分析。利用RT-PCR方法进行组织表达检测。【结果】获得了内蒙古白绒山羊LDH-A基因全长cDNA序列。该基因cDNA全长1 649 bp,包含一个996 bp的ORF和642 bp的3′UTR。SMART分析表明ORF编码的蛋白质具有Ldh1Ndomain和Ldh1Cdomain,Psite分析表明有L-乳酸脱氢酶活性位点,PSORT程序分析将其定位于细胞质中。LDH-A基因在脾、肾、睾丸和肌肉组织中均有表达。【结论】内蒙古白绒山羊LDH-A基因编码的蛋白具有典型的乳酸脱氢酶结构,cDNA核苷酸序列与牛的LDH-A基因(NM174099.2)具有较高的同源性。在脾、肾、睾丸和肌肉组织中均有表达。

关键词：内蒙古白绒山羊 LDH-A 基因克隆表达模式分析

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内蒙古白绒山羊若干数量性状遗传参数的研究

遗传 2001年第3期23卷 211-216页

作者：李金泉王峰尹俊刘少卿张永斌赵从发乌兰巴特尔内蒙古农业大学生物工程系呼和浩特010018 内蒙古阿尔巴斯绒山羊种羊场鄂拉克旗017000 内蒙古畜牧科学院呼和浩特010030

本研究应用女母回归法、公畜内女母回归法、半同胞相关法和单元内半同胞相关法对内蒙古阿尔巴斯白绒山羊的产绒量、绒厚、毛长、体重、绒伸直长度和细度等六个性状的遗传参数进行了估测。结果表明 :(1)绒量遗传力介于 0 2 6～ 0 45之... 详细信息

本研究应用女母回归法、公畜内女母回归法、半同胞相关法和单元内半同胞相关法对内蒙古阿尔巴斯白绒山羊的产绒量、绒厚、毛长、体重、绒伸直长度和细度等六个性状的遗传参数进行了估测。结果表明 :(1)绒量遗传力介于 0 2 6～ 0 45之间 ;绒厚遗传力介于 0 33～ 0 5 6之间 ;毛长遗传力介于 0 2 3～ 0 32之间 ;体重的遗传力介于0 16～ 0 36之间 ;绒伸直长度遗传力为 0 2 4;绒细度的遗传力为 0 14。 (2 )产绒量与绒厚、绒厚与毛长、长度与绒厚、长度与毛长的遗传相关分别介于 0 33～ 0 79、0 5 1～ 0 6 9、0 38～ 0 6 0、0 74～ 0 90之间 ,存在较强的正向遗传相关 ;绒量与毛长、绒量与体重、绒厚与体重、细度与绒厚、细度与绒量、细度与体重的遗传相关分别为 0 11～ 0 38、0 0 6～ 0 17、0 15～ 0 36、0 0 2～ 0 11、0 2 4～ 0 35、0 13～ 0 32之间 ,存在较弱的正向遗传相关 ;毛长与体重、长度与绒量、长度与体重、长度与细度、细度与毛长之间的遗传相关介于 - 0 14～ - 0 2 8、- 0 0 9～ - 0 2 0、- 0 18～ -0 2 3、- 0 2 7～ - 0 31、- 0 17～ - 0 2 8之间 ,存在中等偏弱的负向遗传相关。 (3)绒量、绒厚、毛长、体重的重复率分别为 0 42、0 2 7、0 5 9、0

关键词：内蒙古白绒山羊数量性状遗传参数育种

内蒙古白绒山羊VEGF164基因毛囊特异性表达载体的构建及胎儿成纤维细胞的稳定转染

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中国农业科学 2011年第22期44卷 4756-4762页

作者：鲍文蕾李彬侯鑫刘俊娥郭旭东王志钢刘东军内蒙古大学生命科学学院/哺乳动物生殖生物学与生物技术教育部重点实验室

【目的】构建绒山羊血管内皮生长因子164(vascular endothelial growth factor 164,VEGF164)基因的毛囊特异表达载体并稳定转染胎儿成纤维细胞,筛选获得稳定表达红色荧光蛋白和毛囊特异表达VEGF164并可用于核移植的转基因细胞克隆。【... 详细信息

【目的】构建绒山羊血管内皮生长因子164(vascular endothelial growth factor 164,VEGF164)基因的毛囊特异表达载体并稳定转染胎儿成纤维细胞,筛选获得稳定表达红色荧光蛋白和毛囊特异表达VEGF164并可用于核移植的转基因细胞克隆。【方法】以pCDsRed2载体为基本骨架将VEGF164基因亚克隆到KAP6-1启动子下游,接续连接红色荧光蛋白表达元件,构建VEGF164基因毛囊特异表达载体pCDsRed2-KV(6.3 kb)。外源表达载体以lipofectamineTM2000介导转染胎儿成纤维细胞,G418筛选获得稳定转染的细胞克隆。PCR鉴定外源基因在细胞基因组中的整合。【结果】在构建的表达载体pCDsRed2-KV中,VEGF164基因被正确连接在毛囊特异性启动子KAP6-1下游,基因下游按顺序连接CMV启动子和红色荧光蛋白基因;外源KAP6-1启动子和VEGF164基因整合到细胞基因组中。【结论】成功构建稳定表达红色荧光蛋白和毛囊特异表达VEGF164的真核表达载体,稳定转染绒山羊胎儿成纤维细胞,为下一步通过克隆技术获得转VEGF164基因绒山羊提供了条件。

关键词：内蒙古白绒山羊 VEGF 毛囊特异性表达载体稳定转染

内蒙古白绒山羊FGF5基因克隆及其靶向shRNA表达载体的构建和鉴定

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畜牧兽医学报 2014年第11期45卷 1793-1798页

作者：鲍文蕾其布日姚睿原郭志新朝格图王彦凤王志钢内蒙古大学生命科学学院呼和浩特010021

旨在构建内蒙古白绒山羊成纤维细胞生长因子Ⅴ(Fibroblast growth factor 5,FGF5)基因shRNA真核表达载体(pRNAT-shRNA)。以内蒙古白绒山羊胎儿成纤维细胞总RNA为模板,PCR扩增FGF5基因。设计并合成3条FGF5基因的靶向shRNA序列,分别插入pR... 详细信息

旨在构建内蒙古白绒山羊成纤维细胞生长因子Ⅴ(Fibroblast growth factor 5,FGF5)基因shRNA真核表达载体(pRNAT-shRNA)。以内蒙古白绒山羊胎儿成纤维细胞总RNA为模板,PCR扩增FGF5基因。设计并合成3条FGF5基因的靶向shRNA序列,分别插入pRNAT-U6.1/Neo载体中,构建重组干扰质粒载体pRNATshRNA1、pRNAT-shRNA2和pRNAT-shRNA3,用脂质体LipofectamineTM2000将各重组干扰质粒转染内蒙古白绒山羊胎儿成纤维细胞,Real time PCR检测FGF5mRNA表达量。结果表明:克隆获得813bp的目的基因,包含了完整的ORF,编码270个氨基酸。核苷酸序列及推导的氨基酸序列与绵羊FGF5基因(NM_001246263.1)及氨基酸序列同源性均为99%。FGF5基因shRNA重组质粒经测序鉴定证明构建成功。重组表达质粒转染绒山羊胎儿成纤维细胞48h后可见绿色荧光表达;pRNAT-shRNA1组、pRNAT-shRNA2组和pRNAT-shRNA3组FGF5的mRNA表达水平均低于干扰空载体对照组(P<0.01),pRNAT-shRNA2对FGF5的表达具有最佳的抑制效应。综上表明,成功构建pRNAT-U6.1/Neo-FGF5表达载体,为探讨FGF5在毛囊生长中的作用奠定了基础。

关键词：内蒙古白绒山羊成纤维细胞生长因子Ⅴ(FGF5) 短发夹RNA 荧光定量PCR 载体构建

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内蒙古白绒山羊年龄与绒毛生产性能的关系

中国农业大学学报 2007年第3期12卷 37-40页

作者：刘海英贾志海岳春旺于玲玲贾存灵朱晓萍中国农业大学动物科学技术学院西北农林科技大学动物科技学院陕西杨凌712100

为研究内蒙古白绒山羊年龄和绒毛生产性能的关系，对1～8岁内蒙古白绒山羊产绒性能与绒毛品质性状进行了试验研究。统计分析结果表明：1）不同年龄间产绒量、绒长度、毛长、绒纤维细度和伸直长度均有极显著差异（P〈0．01）；2）产绒量... 详细信息

为研究内蒙古白绒山羊年龄和绒毛生产性能的关系，对1～8岁内蒙古白绒山羊产绒性能与绒毛品质性状进行了试验研究。统计分析结果表明：1）不同年龄间产绒量、绒长度、毛长、绒纤维细度和伸直长度均有极显著差异（P〈0．01）；2）产绒量、绒长度和绒纤维伸直长度在2岁时达到最大（655．01g、6．18cm和9_80cm），2～4岁保持稳定（分别在655．01～596．89g、6．18～5．82cm和9．80～8．77cm），4～6岁下降，6岁后显著下降，-b2岁时相比分别下降了21％～31％、11％～13％和17％～22％；3）周岁羊绒毛细度最小（13．79μm），随年龄增加而加粗，5岁到达最大（15．21μm），之后下降；4）毛长在3岁时达到最大（18．11cm），之后小幅度下降直至6岁（17．91～17．58cm），6岁后又增大（17．96～18．19cm）；5）不同年龄间绒毛质量比和含绒率没有显著变化（P〉0．05）。由此可见，内蒙古白绒山羊2～4岁产绒性能和绒毛品质处于最佳阶段，5～6岁时产绒性能下降，6岁后大幅下降，绒毛品质明显降低。

关键词：内蒙古白绒山羊年龄产绒性能绒毛品质