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稻田和池塘养殖模式对中华绒螯蟹肠道菌群、免疫酶活及肌肉游离氨基酸的影响

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上海海洋大学学报 2022年第6期31卷 1404-1412页

作者：赵柳兰龙亚男张乐纪张纯徐来刘巧罗杰杜宗君杨淞四川农业大学动物科技学院四川成都611130 宜宾市翠屏区农业农村局四川宜宾644000

为了探究稻田和池塘养殖模式对中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)肠道菌群、免疫力和肌肉风味影响,选取同一批次稻田和池塘的中华绒螯蟹在5月和10月对其肠道菌群、免疫酶活和肌肉游离氨基酸进行测定。结果表明:中华绒螯蟹肠道优势菌群为... 详细信息

为了探究稻田和池塘养殖模式对中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)肠道菌群、免疫力和肌肉风味影响,选取同一批次稻田和池塘的中华绒螯蟹在5月和10月对其肠道菌群、免疫酶活和肌肉游离氨基酸进行测定。结果表明:中华绒螯蟹肠道优势菌群为软壁菌门、拟杆菌门、变形菌门和厚壁菌门。在季节和养殖模式均对蟹的肠道菌群造成影响的情况下,季节变化对菌群变化的影响更大。从5月到10月,稻田养殖模式下中华绒螯蟹肠道菌群的丰富度和多样性均出现上升趋势,而池塘养殖模式下肠道菌群的丰富度和多样性则无显著变化。两种养殖模式下中华绒螯蟹肠道中的超氧化物歧化酶(SOD)在5月的活性均高于10月,在10月池塘模式下的免疫酶活性溶菌酶(LZM)和酸性磷酸酶(ACP)显著高于稻田模式。各组肌肉中均检测出14种呈味氨基酸,呈味氨基酸中甜味氨基酸含量(TSAA)>总苦味氨基酸(TBAA)>总鲜味氨基酸(TUAA),且池塘养殖模式下中华绒螯蟹肌肉中TSAA和总游离氨基酸TFAA高于稻田养殖模式下含量。因此,池塘养殖模式较稻田养殖模式下的中华绒螯蟹肠道菌群时间上更稳定,免疫酶活更强,肌肉风味更优。

关键词：中华绒螯蟹养殖模式肠道菌群免疫酶活肌肉游离氨基酸

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池塘和稻田两种养殖模式下建鲤肠道菌群、免疫酶活性及肌肉氨基酸比较分析

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中国水产科学 2021年第1期28卷 48-56页

作者：赵柳兰龙亚男罗杰刘巧周剑杜军周亚杨佰维杨淞四川农业大学动物科技学院四川省长吻鮠原种场重庆三峡职业学院四川省农业科学院水产研究所

为了综合评价稻田和池塘两种养殖模式下建鲤(Cyprinus carpio ***)的肠道健康及肌肉风味,在夏秋两季对这两种养殖模式下建鲤的肠道菌群、肠道免疫酶活性及肌肉氨基酸含量进行比较分析。结果显示,与养殖模式相比较,建鲤肠道菌群受季节的... 详细信息

为了综合评价稻田和池塘两种养殖模式下建鲤(Cyprinus carpio ***)的肠道健康及肌肉风味,在夏秋两季对这两种养殖模式下建鲤的肠道菌群、肠道免疫酶活性及肌肉氨基酸含量进行比较分析。结果显示,与养殖模式相比较,建鲤肠道菌群受季节的影响更显著。夏秋两季两种模式下建鲤肠道的优势菌群为厚壁菌门(Firmicutes)、梭杆菌门(Fusobacteria)、变形菌门(Proteobacteria),且池塘模式下秋季肠道菌群多样性显著高于夏季(P免疫酶活性夏季比秋季显著降低(P<0.05),其中夏季和秋季池塘的碱性磷酸酶(AKP)活性显著高于稻田模式(P<0.05)。建鲤肌肉中共检测出18种游离氨基酸,其中肌肉中天冬氨酸、谷氨酸、丙氨酸、甘氨酸、苏氨酸、精氨酸、组氨酸及苯丙氨酸的含量在稻田模式显著高于池塘模式(P<0.05),且鲜、甜及苦3种呈味氨基酸总体含量均高于池塘模式(P<0.05)。综上所述,与池塘养殖建鲤相比,稻田养殖的建鲤肠道菌群更稳定,肌肉具有更强烈的呈味特性。

关键词：建鲤稻田养殖池塘养殖肠道菌群免疫酶活氨基酸

枯草芽孢杆菌对氨氮胁迫下半滑舌鳎非特异性免疫酶活性、血液生化指标及相关基因表达量的影响

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水产学报 2022年第5期46卷 857-869页

作者：张晶晶左志晗张晓月李文悦孙金生天津师范大学生命科学学院天津市动植物抗性重点实验室

为探究益生菌对氨氮胁迫下半滑舌鳎的非特异性免疫酶活、血液生化指标及相关基因表达是否具有调节作用，实验首先选用枯草芽孢杆菌Y2益生菌对半滑舌鳎进行饲喂，然后对半滑舌鳎进行氨氮胁迫，胁迫过程中持续饲喂Y2并对相关指标进行监测... 详细信息

为探究益生菌对氨氮胁迫下半滑舌鳎的非特异性免疫酶活、血液生化指标及相关基因表达是否具有调节作用，实验首先选用枯草芽孢杆菌Y2益生菌对半滑舌鳎进行饲喂，然后对半滑舌鳎进行氨氮胁迫，胁迫过程中持续饲喂Y2并对相关指标进行监测。其中宏观生长指标结果显示，氨氮胁迫组半滑舌鳎体质量、体长低于非氨氮胁迫组，在氨氮胁迫及非氨氮胁迫条件下Y2组舌鳎体质量、体长高于空白对照组。免疫酶活测定结果显示，氨氮胁迫后半滑舌鳎血清过氧化氢酶(CAT)、酸性磷酸酶(ACP)、过氧化物酶(POD)、碱性磷酸酶(AKP)活性均有所升高；在氨氮胁迫及非氨氮胁迫条件下饲喂Y2菌株的2组ACP、CAT和POD活性均高于其相应对空白照组。血液相关生化指标结果显示，非氨氮胁迫Y2组半滑舌鳎血清中白蛋白(ALB)和球蛋白(GLB)含量略高于空白对照组，白蛋白与球蛋白比值(A/G)较高，甘油三酯(TG)、胆固醇(CHO)含量差异较小；氨氮胁迫对照组舌鳎血清中ALB、CHO含量下降，GLB含量略有升高，血清中总蛋白(TP)及总脂肪呈下降趋势，且A/G降低，而氨氮胁迫Y2组比空白组舌鳎血清中ALB、TG及CHO含量升高，导致A/G升高。同时氨氮胁迫使血清中丙二醛(MDA)、谷草转氨酶(AST)及谷丙转氨酶(ALT)的含量显著升高，Y2在氨氮胁迫及非氨氮胁迫条件下均可以降低MDA、AST及ALT的含量。相关基因表达结果显示，氨氮胁迫使半滑舌鳎肠、肝脏、肌肉及鳃组织热休克蛋白基因(HSP70)及血红蛋白α1基因(Hb-α1)表达量升高，且HSP70的表达量Y2组高于空白组，其中在肝脏组织中上调最明显，相反，氨氮胁迫下Y2组的Hb-α1表达量下降，在肝脏及肌肉组织中下降最明显。此外氨氮胁迫使半滑舌鳎相应组织中生长因子基因(IGF)的表达量均降低，但在氨氮及非氨氮胁迫条件下Y2组的IGF表达量均高于其空白对照组。综上，Y2可以改善氨氮胁迫对半滑舌鳎的免疫能力、血液生化指标、氧气运输、应激能力及生长等造成的多方面影响，降低氨氮胁迫对半滑舌鳎造成的负面作用，在水产养殖行业中具有良好的应用前景。

关键词：半滑舌鳎枯草芽孢杆菌氨氮胁迫免疫酶活血清生化指标基因表达

饲料中添加餐厨剩余物发酵产物对克氏原螯虾生长性能、肌肉品质、免疫酶活和消化功能的影响

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饲料中添加餐厨剩余物发酵产物对克氏原螯虾生长性能、肌肉品质、...

作者：焦婷华中农业大学

学位级别：硕士

为探究餐厨剩余物在克氏原螯虾(Procambarus clarkii)饲料中应用的可行性,本研究分别在基础饲料中添加0%(对照组)、3%、6%和9%比例的餐厨剩余物发酵产物,制成4组等氮等脂的饲料,在网箱和池塘模式下对克氏原螯虾进行为期30 d的养殖试验,... 详细信息

为探究餐厨剩余物在克氏原螯虾(Procambarus clarkii)饲料中应用的可行性,本研究分别在基础饲料中添加0%(对照组)、3%、6%和9%比例的餐厨剩余物发酵产物,制成4组等氮等脂的饲料,在网箱和池塘模式下对克氏原螯虾进行为期30 d的养殖试验,探究其对克氏原螯虾生长性能、肌肉品质、免疫酶活和消化功能的影响,综合评估餐厨剩余物发酵产物的效果与应用价值。主要研究结果和结论如下:1.网箱试验(1)饲料中添加餐厨剩余物发酵产物饲喂30 d对克氏原螯虾的增重率、肝胰腺指数、出肉率和特定生长率等无显著影响(P>0.05),可显著提高存活率、总产出和总增重率,显著降低饵料系数(P0.05),可显著提高肌肉弹性(P免疫力、消化功能整体提升,综合效益最好。2.池塘效果验证试验在池塘试验中,饲料投喂30 d后,9%添加组克氏原螯虾的增重率、肝胰腺指数和特定生长率最大,且与3%添加组存在显著差异(P0.05)。当餐厨剩余物发酵产物添加比例为6%时,克氏原螯虾肌肉中的ΣDAA达到最大值,当添加比例达9%时,必需氨基酸总量(ΣEAA)和必需氨基酸总量/非必需氨基酸总量(ΣEAA/ΣNEAA)最大。各组肌肉质构指标均无显著差异(P>0.05)。添加9%餐厨剩余物发酵产物后,克氏原螯虾血清中活性最大的LZM活性出现大幅降低,并且肝胰腺中淀粉酶和胰蛋白酶活性均最低,同时肠道组织出现结构缺损。与网箱模式相比,池塘模式下的克氏原螯虾肌肉粗脂肪含量更高,且ΣDAA较大,同时克氏原螯虾的肌肉硬度、胶黏性、咀嚼性变大。总的来说,添加9%餐厨剩余物发酵产物对克氏原螯虾生长性能的效果较好,获得的肌肉蛋白质质量也较高,但鲜美度不佳,免疫力与消化功能也总体下降。各组克氏原螯虾的风味和口感比网箱模式下好,食用营养价值略低于网箱模式。考虑到实际应用中饲料的制粒性因素,本试验建议可在克氏原螯虾饲料中添加6%餐厨剩余物发酵产物,此时综合效果最佳。

关键词：餐厨剩余物发酵产物克氏原螯虾生长性能肌肉品质免疫酶活消化功能

饲料中益生菌对凡纳滨对虾部分免疫酶活的影响

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饲料中益生菌对凡纳滨对虾部分免疫酶活的影响

氨氮对拟穴青蟹的急性毒性及对其血清免疫相关酶活力的影响

2010年中国水产学会学术年会

作者：李桂英宋晓玲孙艳中国水产科学院黄海水产研究所中国海洋大学教育部海水养殖重点实验室

研究了在饲料中添加分离自对虾肠道的益生菌及其复合物对凡纳滨对虾部分免疫酶活的影响。以基础饲料为对照组,在基础饲料中分别添加坚强芽孢杆菌(Bacillus firmus)活菌(1.0×10CFU/g)、坚强芽孢杆菌活菌(1.0×10CFU/g)+美人鱼发光杆菌(P... 详细信息

研究了在饲料中添加分离自对虾肠道的益生菌及其复合物对凡纳滨对虾部分免疫酶活的影响。以基础饲料为对照组,在基础饲料中分别添加坚强芽孢杆菌(Bacillus firmus)活菌(1.0×10CFU/g)、坚强芽孢杆菌活菌(1.0×10CFU/g)+美人鱼发光杆菌(Photobacterium damsela)灭活菌(1%)、坚强芽孢杆菌活菌(1.0×10CFU/g)+溶藻胶弧菌(Vibrio alginolyticus)灭活菌(1%)配制3种实验饲料。实验结果显示,饲料中添加益生菌不同程度提高了凡纳滨对虾超氧化物歧化酶活力、碱性磷酸酶活力、酸性磷酸酶活力、一氧化氮合酶活力、溶菌酶活力。上述结果表明,饲料中添加来自对虾肠道的益生菌对凡纳滨对虾免疫力具有促进作用。

关键词：凡纳滨对虾益生菌免疫酶活

来源： cnki会议评论

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渔业科学进展 2018年第5期39卷 114-121页

作者：彭军辉陈丽英程长洪冯娟马红玲郭志勋中国水产科学研究院南海水产研究所农业农村部水产品加工重点实验室广州510300 水产科学国家级实验教学示范中心上海海洋大学上海210306 广州大学生命科学学院广州510006

采用静水法研究氨氮对拟穴青蟹(Scylla paramamosain)的急性毒性及在氨氮初始浓度分别为0(C0,对照组)、10(C10组)、20(C20组)、30(C30组)、40(C40组)、50 mg/L(C50组),胁迫时间分别为0、6、24、48、72 h的条件下对其血清中碱性磷酸酶(A... 详细信息

采用静水法研究氨氮对拟穴青蟹(Scylla paramamosain)的急性毒性及在氨氮初始浓度分别为0(C0,对照组)、10(C10组)、20(C20组)、30(C30组)、40(C40组)、50 mg/L(C50组),胁迫时间分别为0、6、24、48、72 h的条件下对其血清中碱性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)、溶菌酶(LZM)、超氧化物歧化酶(SOD)和酚氧化酶(PO)活力的影响。结果显示,总氨氮对拟穴青蟹24 h和48 h的半致死浓度分别为104.793、66.124 mg/L,安全浓度为7.90 mg/L,非离子氨对拟穴青蟹24 h和48 h的半致死浓度分别为8.396、5.298 mg/L,安全浓度为0.63 mg/L。在胁迫6、24、48与72 h时,各实验组的LZM活力均显著低于对照组(P<0.01)。相较于对照组,C10、C20及C40组在24 h的AKP、ACP活力均显著升高(P<0.05)。C20组在24 h的SOD活力则显著低于其他胁迫时间点(P<0.05)。胁迫72 h时,C30、C40及C50组的PO活力显著高于对照组(P<0.05)。该实验条件下,不高于40 mg/L的氨氮可在24 h内使拟穴青蟹血清中的AKP与ACP活力显著升高,而50 mg/L的氨氮则对其具有抑制作用;各实验组浓度氨氮均在72 h内对拟穴青蟹血清中的LZM活力具有显著的抑制作用,对PO活力具有明显的刺激作用,对SOD活力无显著影响。

关键词：拟穴青蟹氨氮安全浓度免疫酶活

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福建地区刺激隐核虫对养殖大黄鱼的致病力研究及其临床防控

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福建地区刺激隐核虫对养殖大黄鱼的致病力研究及其临床防控

作者：焦恺强上海海洋大学

学位级别：硕士

大黄鱼刺激隐核虫病是刺激隐核虫大量寄生于鱼类体表、鳃丝等部位引起的鱼类疾病。刺激隐核虫没有宿主特异性,且环境适应性较强,苗种与成鱼均可被感染。该病的传染速度极快,且具有非常高的发病率和死亡率,如果控制不及时,1 d内即可造成... 详细信息

大黄鱼刺激隐核虫病是刺激隐核虫大量寄生于鱼类体表、鳃丝等部位引起的鱼类疾病。刺激隐核虫没有宿主特异性,且环境适应性较强,苗种与成鱼均可被感染。该病的传染速度极快,且具有非常高的发病率和死亡率,如果控制不及时,1 d内即可造成全部养殖鱼类死亡。本论文结合刺激隐核虫生活史对其致病力进行了研究,并对复方中草药HD-2抑制刺激隐核虫世代繁殖和阻断感染的效果进行验证,检测HD-2对大黄鱼血清相关免疫酶的影响,同时研发一种缓释型消毒剂。其研究结果如下:1、感染刺激隐核虫的大黄鱼体型规格与携带总数量呈正相关趋势,但按照单位体重来分析,规格250 g、100 g、40 g的大黄鱼产生包囊数量分别为8.12个/g、10.57个/g和5.89个/g;包囊直径约340.79±64.91μm,孵化率为76.39%,每个包囊可产生280±42.25个幼虫;幼虫体外最长存活时间超过24 h,孵化30 min内收集的幼虫在收集后0 h、2 h、4 h、8 h、12 h、16 h的感染率分别是91.61%、80.63%、57.27%、31.42%和9.50%;超过16 h的幼虫未检测到感染的个体。幼虫感染大黄鱼7天的LD为9 712幼虫/鱼,LD为4 366幼虫/鱼。感染实验结果显示,感染进行5 min时,已有刺激隐核虫幼虫进入鳃组织;10 min时,已经有虫体附着到鳃丝上;30 min时已有多个虫体附着到鳃丝上,鳃丝出现轻微弯曲变形;感染1 h后,鳃丝组织弯曲变形严重,呈现波浪状;4 h时鳃丝局部肿胀,严重弯曲变形,并伴有细胞脱落;12 h鳃丝肿胀,局部组织增生,形成团状;24 h时虫体寄生部位鳃丝黏连肿胀,周围组织增生,伴有细胞脱落;48 h时鳃丝组织增生严重,黏连在一起将虫体包围,局部鳃丝糜烂;感染72 h后,鳃组织损伤严重,鳃丝肿胀、增生、黏连,失去呼吸功能,刺激隐核虫寄生处留下圆形空洞。2、复方中草药HD-2对刺激隐核虫幼虫进行体外杀灭实验显示,50 mg/L、80mg/L、100 mg/L、200 mg/L和400 mg/L浓度的中草药药液4 h内分别可以杀死0、20%、60%、80%、100%的幼虫。大黄鱼分别投喂含复方中草药HD-2 0 g/kg(对照)、5 g/kg(G1)、10 g/kg(G2)、15 g/kg(G3)的饲料30 d,投药组G1、G2、G3的相对感染强度比对照组分别下降31.98%、44.53%、51.82%;在LD攻毒后,存活率分别达到40.00%、55.00%和58.33%,对比对照组存活率8.33%显著提高,且鳃丝、胸鳍上滋养体数量较对照组显著下降。LD攻毒后,G1、G2、G3组收集得到的包囊较少,包囊直径较对照组显著变短,包囊体积对比对照组分别减少35.43%、36.14%和37.26%,孵化率下降16.28%、23.26%和27.91%。HD-2治疗患病大黄鱼实验第15 d时,投药组大黄鱼掉落包囊数量分别比对照组下降73.12%、87.7%、93.78%,鱼死亡率分别为58.33%、36.67%和21.67%,较对照组83.33%的死亡率明显降低。投药组大黄鱼鳃丝上白点大大减少且肉眼难以观察,而对照组剩余存活的大黄鱼鳃丝、胸鳍上有大量虫体寄生,处于濒死状态。3、本文通过对大黄鱼进行口服复方中草药HD-2,研究其对血清相关免疫指标的影响。结果表明,随着投喂时间的延长各投药组溶菌酶(LZM)活性会出现先升高后下降的趋势,在第21 d取样时达到最高值,10 g/kg和15 g/kg组效果最好;添加不同剂量中草药均可以显著提高血清超氧化物歧化酶(SOD)活性(p0.05);不同投喂剂量对大黄鱼血清中免疫球蛋白M(IgM)的含量均无明显影响;大黄鱼血清中过氧化氢酶(CAT)、一氧化氮合酶(NOS)的活性均出现显著升高趋势,第28 d,各组CAT、NOS活性均达到最高值,其中15 g/kg组效果最好。4、生石灰与沸石粉比例为1:1和1:2两组在前4天可以保持水中细菌浓度远远低于初始值,5至7天能抑制细菌生长保持相对较低水平,具有较好的缓释效果。一定浓度的生石灰可以有效杀灭刺激隐核虫

关键词：大黄鱼刺激隐核虫致病力中草药阻断感染免疫酶活

聚β-羟基丁酸酯对凡纳滨对虾几个重要性状和基因表达的影响

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聚β-羟基丁酸酯对凡纳滨对虾几个重要性状和基因表达的影响

作者：邓康裕南京农业大学

学位级别：硕士

本研究选用中国水产科学研究院黄海水产研究所培育的"壬海1号"凡纳滨对虾(Litopenaeusvannamei)新品种,利用单因子浓度梯度法,通过在基础饲料中添加不同质量分数的聚β-羟基丁酸醋(poly-β-hydroxybutyrate,PHB)比较对凡纳滨对虾生长性... 详细信息

本研究选用中国水产科学研究院黄海水产研究所培育的"壬海1号"凡纳滨对虾(Litopenaeusvannamei)新品种,利用单因子浓度梯度法,通过在基础饲料中添加不同质量分数的聚β-羟基丁酸醋(poly-β-hydroxybutyrate,PHB)比较对凡纳滨对虾生长性状、相关的非特异性免疫基因的影响,以期获得PHB在水产养殖中的理论支持。具体研究结果如下:1.选取同一家系生长状况良好的360尾大小均匀、体型正常的凡纳滨对虾仔虾,分为6组,每组3重复。实验对虾分别用含0.0%(即不含PHB的空白对照组)、0.5%、1.0%、2.5%、5.0%、10.0%PHB的饲料投喂凡纳滨对虾6周,实验结束时计算其存活率,增长率,非特异性免疫酶活力等。实验结果显示PHB对对虾存活率无影响(P免疫酶活进行测定,发现在PHB浓度为1.0%-2.5%时对虾的免疫酶活性上升。以上结果表明,1.0%-2.5%PHB浓度为最适浓度,该浓度范围内显著促进***的体重增长及非特异性免疫酶活力。2.利用生长测试实验材料,选取0.0%及2.5%PHB浓度组,对其进行氛氮胁迫实验。在养殖水体中加入氯化铵(NH4Cl),使水体中氨氮终浓度为15mg/L。实验中取0、3、6、12、24、48 h的凡纳滨对虾,测定其鳃丝、肝胰腺、肌肉及血淋巴中免疫因子的基因表达量。实验结果显示,饲喂2.5%PHB的对虾体内丙二醛(Malonaldehyde,MDA)含量均低于空白对照组,且免疫基因表达量高于不含PHB的对照组。相对于对照组,投喂2.5%PHB的对虾体内免疫基因表达量均高于对照组。在氨氮胁迫后,血淋巴中超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)及过氧化物酶(peroxidase,CAT)基因表达比值呈现先上升后下降再上调的趋势,到48h表达量是对照组的3.81倍和1.56倍(P0.05)。而谷胱甘肽过氧化物酶(glutathion peroxidase,Gsh-px)、溶菌酶(lysozyme,LZM)基因表达在肝胰腺中均呈现先上升后下降的趋势,至实验结束时仍是对照组的2.24倍和2.36倍。而在血淋巴及鳃中gsh-px和lzm比值在胁迫后略微下降后上升再下降。实验结果表明,P HB对氨氮胁迫下的凡纳滨对虾具有一定的保护作用。3.选取同一家系平均体重为3.95-4.52 g的同一家系的凡纳滨对虾分为6组,分别用含 0.0%((即不含 PHB 的空白对照组)、0.5%、1.0%、2.5%、5.0%、10.0%PHB的饲料投喂投喂,4周后通过肌肉注射鳗孤菌悬液方式使其感染鳗孤菌,每组6重复(30尾/重复):3重复用于统计感染鳗弧菌后对虾死亡率,3组用于取样。实验结束后统计各组对虾存活率并选择免疫保护率(RPS)最高组,利用实时荧光定量PCR技术测定感染鳗弧菌后48 h内免疫基因表达量。结果发现对虾的存活率随PHB浓度升高呈现先上升后下降再上升的趋势,饲喂PHB的实验组对虾平均存活时间均高于未饲喂PHB的实验组;且饲料中含有1.0%PHB对对虾的免疫保护率最高。对比1.0%PHB及空白组血淋巴免疫基因表达水平,发现1.0%PHB组对虾体内免疫基因表达水平高于空白对照组。实验结果说明,PHB能增强凡纳滨对虾抵抗鳗孤菌感染的能力。4.选取同一家系平均体重为3.95-4.52 g的凡纳滨对虾分为6组,每组6重复:3重复用于统计感染白斑综合症病毒(whitespotsyndromevirus,WSSV)后对虾死亡率,3组用于取样。以含不同质量分数(0.0%,0.5%,1.0%,2.5%,5.0%,10.0%)PHB的人工配合饲料饲喂凡纳滨对虾20天后,经人工注射的方式使对虾感染WSSV;利用实时荧光定量PCR技术分析PHB对凡纳滨对虾抵御WSSV侵染能力的影响,并选择最高免疫保护率(RPS)组进行不同时间点基因表达量分析。研究发现,经PHB饲喂的对虾在感染WSSV后与未饲喂PHB的对虾存活率无显著影响(P>0.05);但感染WSSV的对虾平均存活时间随PHB浓度上升呈现先上升后下降再上升的趋势,饲喂PHB对虾的平均存活时间均高于对照组,其中1.0%PHB浓度组对虾平均存活时间最长,且显著高于空白对照组及5.0%PHB实验组(P<0.05)。分析各组对虾体内病毒含量,发现1.0%PHB浓度组对虾病毒含量在实验前期显著低于对照组(尸<0.05)。对虾感染WSSV后,对对照组及1.0%PH

关键词：凡纳滨对虾 PHB 生长免疫酶活基因表达 WSSV

HD-3复方中草药对凡纳滨对虾免疫酶影响和抗WSSV感染分析

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HD-3复方中草药对凡纳滨对虾免疫酶影响和抗WSSV感染分析

作者：景亚运大连海洋大学

学位级别：硕士

随着国内外学者对对虾白斑综合征病毒(WSSV)的研究深入,在病原分子基因水平、感染传播和对虾免疫保护方面取得了丰硕的研究成果,但在防控技术上未能获得理想的防治效果。本实验旨在调查了解养殖凡纳滨对虾WSSV检出率和发病情况,应用前... 详细信息

随着国内外学者对对虾白斑综合征病毒(WSSV)的研究深入,在病原分子基因水平、感染传播和对虾免疫保护方面取得了丰硕的研究成果,但在防控技术上未能获得理想的防治效果。本实验旨在调查了解养殖凡纳滨对虾WSSV检出率和发病情况,应用前期筛选的抗WSSV专用中草药HD-3进行感染临床试验,通过统计分析对虾死亡率和对虾免疫酶活数据,结合荧光定量PCR、组织病理学检测和超微病理学检测,确定投喂中草药的最佳预防方案,并开展中试试验检验生产疗效。1.在2014年7月-2015年12月,对辽宁、河北、天津、山东和浙江五省份,杨家泊、滨州、潍坊、胶南等环黄渤海凡纳滨对虾主产区,共采集29批次样品。每个养殖场样品定义为同一批次,进行WSSV病原携带率和养殖工艺调查。通过DNA提取,利用套式PCR和荧光定量PCR诊断凡纳滨对虾的WSSV阳性率。结果显示,在北方凡纳滨对虾主要产区通过套式PCR方法,WSSV阳性检出率高达72.4%;通过荧光定量方法,WSSV检出率达86.2%。荧光定量检测方法敏感度在101copies/mg优于套式PCR。传统土塘养殖工艺凡纳滨对虾WSSV检出率和感染程度高于大棚养殖和工厂化养殖模式。2.基础饲料添加3%HD-3复方中草药做药饵,每天2次投喂量占对虾体重5%,水体温度25～28℃,盐度18～20‰,溶解氧6.5mg/L以上。投喂1d、4d、7d、10d、13d、16d和19d药饵后进行口服WSSV毒饵感染方式攻毒,统计对虾症状表现和死亡率,测定对虾酚氧化酶(PO)、超氧化物歧化酶(SOD)、碱性磷酸酶(AKP)和酸性磷酸酶(ACP)四种免疫因子。结果显示:在饲料中添加HD-3中草药,可以起到保护对虾的作用,预防13d、16d和19d在试验结束后仍有存活对虾,其中实验组16d获得最高的免疫保护率,达到36.7±3.3%,存活者健康与空白对照组对虾无异。服用HD-3 10d以后,可以显著提高对虾PO、SO D和AKP活力(P0.05)。攻毒后服用较长时间中草药的实验组对虾,PO、SOD、AKP和ACP活力可以获得更持久的免疫活性。3.通过荧光定量对阳性对照组和各实验组不同感染时期凡纳滨对虾腮组织内病毒进行定量分析,显示随着服用中草药时间的延长,对虾体内病毒增长幅度和最大峰值总体上低于阳性对照组。在感染72h后,阳性对照组病毒含量达到106 copies/mg峰值时,服用中草药10d以后实验组病毒含量显著小于阳性对照组(P免疫活力,尤其在高温期,PO和ACP显著高于对照组。通过定量PCR,显示中草药对WSSV有减缓增殖的趋势。

关键词：凡纳滨对虾中草药荧光定量组织病理免疫酶活