检索结果-南通市图书馆

作者：李晓娜北京协和医学院

学位级别：硕士

目的:矽肺病是由于长期大量吸入晶体SiO2,以肺部弥漫性纤维化为特征的疾病,为主要的职业病类型,给相关劳动者带来严重的疾病负担,造成严重的公共卫生问题。肺泡巨噬细胞吞噬SiO2后破裂释放大量炎症因子,主要为肿瘤坏死因子(TNF-α)、白... 详细信息

目的:矽肺病是由于长期大量吸入晶体SiO2,以肺部弥漫性纤维化为特征的疾病,为主要的职业病类型,给相关劳动者带来严重的疾病负担,造成严重的公共卫生问题。肺泡巨噬细胞吞噬SiO2后破裂释放大量炎症因子,主要为肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)和白介素6(IL-6),这些炎性因子在矽肺病发生发展中起着关键的作用。免疫球蛋白g fc段受体ⅲ(fcγRⅢ)具有促炎作用,可能促进矽肺病进展。因此探讨fcγRⅢ对SiO2诱导小鼠肺泡巨噬细胞炎性因子表达的影响,以及fcγRⅢ抗体对矽肺病是否具有缓解作用,对矽肺病的治疗具有意义。方法:在本研究中,我们通过使用fcgr3 shRNA的慢病毒质粒,构建稳定沉默fcgr3的肺泡巨噬细胞系MH-S。通过定量多聚酶链式反应(qPCR)和蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测MH-S巨噬细胞系中fcγRⅢ的转录水平和蛋白水平。稳定转染细胞系成功建立后,将MH-S细胞分为MH-S+sh-NC、MH-S+SiO2+sh-NC、MH-S+sh-fcgr3 和 MH-S+SiO2+sh-fcgr3,其中 SiO2 处理条件为 100μg/mL 连续刺激12 h。通过qPCR检测炎性因子转录水平,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞培养上清中炎性因子的含量,包括TNF-α、IL-1β和IL-6。使用气道SiO2滴注建立矽肺病小鼠模型,将C57 BL/6J小鼠分为PBS+同型对照Igg组,PBS+fcγRⅢ抗体组,SiO2+同型对照Igg组,SiO2+fcγRⅢ抗体组。其中SiO2处理条件为8 mg/只,造模第3周喉镜给予同型对照Igg与fcγRⅢ抗体给药治疗,同型对照Igg与fcγRⅢ抗体处理条件为2 mg/只,每周3次,一共3周。造模第6周测定小鼠肺功能,收取肺组织和肺泡灌洗液(BALF)样本,进行肺组织HE染色,肺组织炎性因子转录水平检测,肺组织Masson染色,羟脯氨酸水平检测及Ⅰ型胶原(COL1)水平检测和BALF中TNF-α、IL-1β和IL-6的含量检测。结果:细胞实验中,与对照组相比,沉默fcgr3的MH-S细胞系中fcγRⅢ的转录与蛋白表达水平降低(Pfcgr3的MH-S细胞系构建成功。与对照组相比,SiO2刺激后Tnf、Il1b和Il6的转录水平明显升高(Pfcgr3后炎性因子转录水平显著下降(Pfcgr3后炎症因子分泌水平显著下降(Pgg组相比,SiO2+同型对照Igg组肺容量(VC)、肺动态顺应性(Cdyn)显著降低(Pgg组相比,SiO2+fcγRⅢ抗体组VC、Cdyn明显升高(Pfcgr3降低SiO2诱导的肺泡巨噬细胞系炎性因子的表达,fcγRⅢ抗体能延缓矽肺病所致的心肺功能降低、炎症及纤维化。

关键词：免疫球蛋白g fc段受体ⅲ 巨噬细胞炎性因子抗体治疗

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沉默fcgr3降低SiO_(2)诱导的小鼠肺泡巨噬细胞系MH-S炎性因子表达

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基础医学与临床 2023年第6期43卷 904-908页

作者：李晓娜齐先梅张田甜王婧中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院病理生理学系北京100005

目的探讨沉默免疫球蛋白g fc段受体ⅲ(fcγRⅢ)对SiO_(2)诱导的小鼠肺泡巨噬细胞系MH-S炎性因子表达的影响。方法构建fcgr3 shRNA的慢病毒质粒;人胚肾细胞系293T培养包装产生慢病毒;慢病毒感染沉默MH-S中的fcγRⅢ,并筛选稳定感染的细... 详细信息

目的探讨沉默免疫球蛋白g fc段受体ⅲ(fcγRⅢ)对SiO_(2)诱导的小鼠肺泡巨噬细胞系MH-S炎性因子表达的影响。方法构建fcgr3 shRNA的慢病毒质粒;人胚肾细胞系293T培养包装产生慢病毒;慢病毒感染沉默MH-S中的fcγRⅢ,并筛选稳定感染的细胞。定量多聚酶链反应(qPCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测MH-S巨噬细胞系中fcγRⅢ的mRNA和蛋白表达。将MH-S细胞分为MH-S+sh-NC、MH-S+SiO_(2)+sh-NC、MH-S+sh-fcgr3和MH-S+SiO_(2)+sh-fcgr3,其中SiO_(2)处理条件为100 mg/L连续刺激12 h。通过qPCR检测炎性因子转录水平,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞培养上清中的炎性因子的含量,包括肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)和白介素6(IL-6)。结果包装慢病毒并感染细胞后建立稳定沉默fcgr3的MH-S细胞系,稳定转染细胞中fcγRⅢ的转录与蛋白表达水平较对照组降低(Pfcgr3后炎症因子转录水平显著下降(Pfcgr3后炎症因子分泌水平显著下降(Pfcgr3能够降低SiO_(2)诱导的肺泡巨噬细胞炎性因子的表达。

关键词：免疫球蛋白g fc段受体ⅲ 巨噬细胞炎性因子

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