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基于多色流式细胞术快速检测外周血免疫标记用于辅助诊断结核病的技术研究

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基于多色流式细胞术快速检测外周血免疫标记用于辅助诊断结核病的...

作者：赵慈余浙江中医药大学

学位级别：硕士

目的基于多色流式细胞术平台,建立多色标记检测外周血免疫标记用于辅助诊断结核病（简称TB.FACS）,并初步探讨机体免疫机制对结核病发生发展的影响。方法1.收集结核病患者148例、非结核疾患99例、健康人23例。将每个受试者的外周血经结... 详细信息

目的基于多色流式细胞术平台,建立多色标记检测外周血免疫标记用于辅助诊断结核病（简称TB.FACS）,并初步探讨机体免疫机制对结核病发生发展的影响。方法1.收集结核病患者148例、非结核疾患99例、健康人23例。将每个受试者的外周血经结核杆菌特异性抗原蛋白ESAT-6和CFP-10刺激培养,利用多色流式细胞术检测细胞表面免疫标记CD64、HLA-DR、CD69、HLA-G和CD134。并对培养条件进行优化,比较不同浓度的结核杆菌特异性抗原蛋白以及培养时间对检测免疫标记的影响。2.绘制ROC曲线,得出最具诊断意义的免疫标记包括各自的特异性、灵敏度、阳性预测值和阴性预测值,制定诊断方案和标准。3.收集了113例疑似结核的患者进行临床双盲实验,其中最终临床确诊为结核病的患者有45例,其余68例患者均为非结核病人。用流式细胞术分别检测细胞表面免疫标记,并根据ROC曲线的结果制定各个免疫标记的诊断标准并对结果进行判断,以此验证其诊断结核的效率并探寻诊断结核的最佳免疫标记。4.根据单一免疫标记的ROC曲线的结果制定了不同免疫标记组合的诊断方案及其诊断标准,并按照其诊断标准对193例结核病患者,167例非结核病人和23例健康人进行结果判读,以此来确定诊断结核的最佳方案,并命名为TB.FACS。5.TB.FACS分别与诊断结核的其他实验室方法进行比较（结核杆菌培养、涂片找结核分枝杆菌、TB.IGRA）,以此来探讨TB.FACS诊断结核的价值。6.收集结核病患者68例、非结核疾患组30例、健康人组20例。并收集每个受试者的外周血经结核杆菌特异性抗原蛋白ESAT-6和CFP-10刺激培养离心后的上清,利用CBA技术检测培养上清中细胞因子谱的水平。7.绘制ROC曲线,得出最具诊断意义的细胞因子包括各自的特异性、灵敏度、阳性预测值、阴性预测值。经logistic回归模型实现细胞因子两两联合诊断结核,绘制ROC曲线,确定细胞因子分别两两联合后的最佳组合。8.收集10例结核患者和6例健康人组的PMBC,应用抗CD134单抗阻断CD134/CD134L共刺激通路,观察CD134/CD134L共刺激分子对Th1/Th2细胞因子谱表达的影响。结果1.结核培养体系中测定管的结核杆菌特异性抗原蛋白ESAT-6和CFP-10浓度为5.0μg/m L,并且培养时间为24h为最优条件。经统计学分析,结核组的CD64指数,T细胞表面HLA-G、CD69和CD134的测定管-阴性对照管的荧光强度（T-N）以及HLA-DR指数,单核细胞DR百分比的阴性对照管-测定管的荧光强度（N-T）明显高于非结核疾患组和健康对照组,P均小于0.05;而CD64指数,HLA-DR指数,单核细胞DR百分比,T细胞表面HLA-G、CD69和CD134阴性对照管与测定管的差值在非结核疾患组和健康人组之间无统计学差异,P均大于0.05。2.根据ROC曲线的结果,CD64指数的ROC曲线下的面积（AUC）为81.5%,截断值为0.617,灵敏度为0.824,特异性为0.656,阳性预测值0.630,阴性预测值0.847,阳性似然比2.395,阴性似然比0.268;DR指数的ROC曲线下的面积（AUC）为70.1%,截断值为1.222,灵敏度为0.757,特异性为0.590,阳性预测值0.558,阴性预测值0.771,阳性似然比1.846,阴性似然比0.412;DR百分比的ROC曲线下的面积（AUC）为82.0%,截断值为2.950,灵敏度为0.743,特异性为0.820,阳性预测值0.737,阴性预测值0.789,阳性似然比4.127,阴性似然比0.313;HLA-G的ROC曲线下的面积（AUC）为79.2%,截断值为2.250,灵敏度为0.703,特异性为0.787,阳性预测值0.697,阴性预测值0.788,阳性似然比3.300,阴性似然比0.377;CD69的ROC曲线下的面积（AUC）为88.6%,截断值为0.750,灵敏度为0.851,特异性为0.836,阳性预测值0.738,阴性预测值0.886,阳性似然比5.189,阴性似然比0.178;CD134的ROC曲线下的面积（AUC）为86.8%,截断值为1.250,灵敏度为0.824,特异性为0.836,阳性预测值0.716,阴性预测值0.868,阳性似然比5.024,阴性似然比0.210。3.经临床双盲试验,CD64的灵敏度为0.800,特异性为0.691,阳性预测值0.787,阴性预测值0.839,阳性似然比2.589,阴性似然比0.289,诊断符合率0.734。DR指数的灵敏度为0.755,特异性为0.574,阳性预测值0.539,阴性预测值0.780,阳性似然比1.768,阴性似然比0.591,诊断符合率0.646。DR百分比的灵敏度为0.733,特异性为0.794,阳性预测值0.702,阴性预测值0.788,阳性似然比3.558

关键词：结核病（TB）流式细胞术（FCM）免疫标记

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穴状稀土螯合剂的免疫标记技术研究

穴状稀土螯合剂的免疫标记技术研究

作者：孙延文吉林大学

学位级别：硕士

目的本研究旨在合成理想的穴状稀土螯合剂,并用于甲胎蛋白单克隆抗体(AFP-McAb)的标记,同时对标记的最佳条件进行探索,以检验自合成的穴状稀土螯合剂用于标记抗体的效果,为生物分子的标记提供参考,为进一步构建均相时间分辨荧光免疫分... 详细信息

目的本研究旨在合成理想的穴状稀土螯合剂,并用于甲胎蛋白单克隆抗体(AFP-McAb)的标记,同时对标记的最佳条件进行探索,以检验自合成的穴状稀土螯合剂用于标记抗体的效果,为生物分子的标记提供参考,为进一步构建均相时间分辨荧光免疫分析奠定基础。方法以2,6-二甲基吡啶-3,5-二羧酸乙酯为原料,优化合成Li+(?)2,6-{N,N’,N,N’-[二(2,2’-联吡啶-6,6’-二甲基)]二(氨甲基)}-吡啶-二羧酸乙酯(Li+(?)bpy.***.py(CO2Et)2),进一步选择乙腈和甲醇两种反应体系合成 Eu3+(?)2,6-{N,N’,N,N’-[二(2,2’-联吡啶-6,6’-二甲基)]二(氨甲基)}-吡啶-二羧酸乙酯(Eu3+(?)bpy.***.py(CO2Et)2),比较不同反应体系下合成的铕螯合物的光谱性质。将EU3+(?)bpy.***.py(CO2Et)2水解后的铕螯合剂Eu3+(?)2,6-{N,N’,N,N’-[二(2,2’-联吡啶-6,6’-二甲基)]二(氨甲基)}-吡啶-二羧酸(Eu3+(?)bpy.***.py(CO2H)2)作为示踪物,经交联剂EDC和NHS活化用于偶联AFP-McAb,通过标记抗体的荧光强度、标记率和相对免疫活性来评价标记的效果,获得铕螯合剂最佳的活化时间、偶联时间、反应pH以及反应比例。结果通过改变起始反应物的浓度,Li+(?)bpy.***.py(CO2Et)2的产率明显提高至51%。两种反应体系所得Eu3+(?)bpy.***.py(CO2Et)2的激发光谱(最大激发波长为310nm)、发射光谱(最大发射波长为616nm)、量子产率基本相同;荧光强度在4.0 × 10-8-2.5 × 10-5mol/1范围内与其浓度均成线性,相关系数分别为0.99373和0.98665;荧光寿命分别为825 μs、830 μs;乙腈反应体系合成的Eu3+(?)bpy.***.py(CO2Et)2的荧光强度略高。铕螯合剂标记AFP-McAb的最佳活化时间为24h,偶联时间为24h,反应pH为9,反应比例为60:1。结论两种反应体系均可合成荧光强度高、稳定性强的双功能穴状稀土螯合剂,可用于AFP-McAb的标记,获得了荧光强度强、免疫活性好的标记抗体,为进一步建立均相时间分辨荧光免疫分析奠定了基础。

关键词：穴状稀土螯合剂光谱性质免疫标记甲胎蛋白单克隆抗体均相时间分辨荧光免疫分析

免疫标记在甲状腺结节病变鉴别诊断中的应用价值

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临床与实验病理学杂志 2009年第1期25卷 97-98页

作者：朱梅刚南方医科大学病理学教研室广州510515

甲状腺良恶性结节病变是临床病理诊断中常见且存在困难的部分。目前在甲状腺结节病变良恶性病理诊断存在的难题有:(1)滤泡性腺瘤(FA)与滤泡性癌(FC)微小浸润型鉴别,因FC浸润包膜与血管的改变未取及而漏诊;(2)伴乳头增生FA或甲状腺肿与... 详细信息

甲状腺良恶性结节病变是临床病理诊断中常见且存在困难的部分。目前在甲状腺结节病变良恶性病理诊断存在的难题有:(1)滤泡性腺瘤(FA)与滤泡性癌(FC)微小浸润型鉴别,因FC浸润包膜与血管的改变未取及而漏诊;(2)伴乳头增生FA或甲状腺肿与乳头状癌(PC)鉴别,特别是不典型病例;(3)FA与滤泡型乳头状癌变异型(FVPC)鉴别十分困难;(4)在甲状腺良恶性病变组织学诊断标准方面,病理学专家各自的诊断标准有差异,而造成漏诊或过诊断,给患者造成不应有的痛苦。[第一段]

关键词：甲状腺肿瘤免疫标记

免疫标记技术在广州管圆线虫病诊断中的应用进展

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大理学院学报（综合版） 2012年第9期11卷 47-50页

作者：杨毅梅张霄霄崔立云王菲曹淑祯大理学院基础医学院云南大理671000

目的:了解免疫标记技术在广州管圆线虫病诊断中的应用进展。方法:查阅并检索国内外相关免疫标记技术用于广州管圆线虫病诊断的文献,并进行分析、整理总结。结果:不同的免疫标记技术在诊断广州管圆线虫病的效能有所不同,可在不同的环境... 详细信息

目的:了解免疫标记技术在广州管圆线虫病诊断中的应用进展。方法:查阅并检索国内外相关免疫标记技术用于广州管圆线虫病诊断的文献,并进行分析、整理总结。结果:不同的免疫标记技术在诊断广州管圆线虫病的效能有所不同,可在不同的环境要求下,选取不同的诊断方法。结论:免疫标记技术在广州管圆线虫病诊断中具有很大的意义及潜力,但还需进一步改进并研发出新型的免疫标记技术。

关键词：广州管圆线虫免疫标记诊断

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骨肿瘤免疫标记与分子检测

骨肿瘤免疫标记与分子检测

细胞团块收集器联合免疫标记在良、恶性胸水中的应用研究

2021年中国肿瘤标志物学术大会暨第十五届肿瘤标志物青...

作者：刘丹丹张丽华丁会珍王宏伟中国人民解放军总医院第四医学中心

研究目的:骨肿瘤发病率较低,种类繁多,骨质沉积程度有限,相互间存在形态叠加等特点,尚缺乏有效辅助诊断方式,病理诊断存在巨大挑战,随着现代分子生物学技术的发展,骨肿瘤相关分子标记物被发现,我们的研究就新近我中心骨肿瘤病例检测与... 详细信息

研究目的:骨肿瘤发病率较低,种类繁多,骨质沉积程度有限,相互间存在形态叠加等特点,尚缺乏有效辅助诊断方式,病理诊断存在巨大挑战,随着现代分子生物学技术的发展,骨肿瘤相关分子标记物被发现,我们的研究就新近我中心骨肿瘤病例检测与诊断情况做出分析与评价,旨在为骨肿瘤的诊断与鉴别诊断提供可靠依据,为临床骨肿瘤个体化治疗与靶点药物的开发提供思路,使得骨肿瘤早期预警及保肢成为可能。研究方法:收集中国人民解放军总医院第四医学中心病理科骨肿瘤病例资料50例,切片均经三级病理医生复诊,石蜡包埋法制片,切片厚度约3-3.5微米/张,并进行HE染色,SP法免疫组织化学染色,PCR法分子检测以及荧光原位杂交的FISH测,结果采用Graphpad8.0.1进行数据统计与制图,OLYMPUS显微成像系统进行图像采集。研究结果:1.软骨性肿瘤:8例软骨母细胞瘤中,H3K36M阳性率100%,H3F3BK36M位于17号染色体,研究报道其在软骨母细胞瘤中突变率高达95%,可作为鉴别软骨母细胞瘤的特异指标。11例软骨肉瘤中,S-100阳性率90.90%,S-100可反应软骨细胞分化程度。同时我们也进行Vim,EMA,CEA,CK,SATB2,Brachyury,F8,Ki67等指标鉴别与辅助检测。此外,IDH1/2分子检测发现IDH1/2在内生性软骨瘤及去分化软骨肉瘤存在突变,除外软骨母细胞瘤。2.成骨性肿瘤:SATB2位于2号染色体,10例骨肉瘤中发现SATB2阳性率达90.00%,骨旁骨肉瘤与中央型低级别骨肉瘤中除SATB2阳性外常伴有MDM2和CDK4的扩增,应用二者可与普通型成骨骨肉瘤区分,同样利用MDM2 FISH检测可明显看到基因扩增,敏感性达95.00%以上。3.脊索瘤:Brachyury和INI1是脊索瘤的可依赖性指标,在4例脊索瘤病例中,Brachyury阳性100%,INI1阳性率100%,4.尤文肉瘤及原始神经外胚层瘤:该类典型特点是形成融合基因,基因重排检测发现EWSR1-FLI-1和EWSR1-ERG融合,（以EWSR1-FLI-1融合为主达85.00%以上）.免疫组织化学采用NKX2.2/PAX7标记,7例病例中呈特异性染色阳性率达85.71%。5.富于破骨巨细胞肿瘤:骨巨细胞瘤中H3.3 G34W突变抗体是诊断GCTB高度灵敏和特异的标志物,10例骨巨细胞瘤病例中,我们检测到H3.3 G34W阳性率达87.50%,与Amary等报道基本一致。研究结论:我们的研究阐明了当前骨肿瘤病理诊断最新的辅助检测手段,旨在为骨肿瘤抗体制剂临床应用以及骨肿瘤鉴别诊断提供证据,为骨肿瘤精准医疗做出贡献,由于病例有限,部分数据值过低,日后工作中将逐渐补充更新。

关键词：骨肿瘤免疫标记分子检测个体化治疗

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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中国现代医学杂志 2015年第35期25卷 62-65页

作者：韩军平王丽曾罗文潇马文霞达春和甘肃省白银市第一人民医院病理科甘肃白银730900 甘肃省白银市第一人民医院呼吸科甘肃白银730900

目的探讨细胞团块收集器联合免疫标记在良、恶性胸水中的应用.方法采用细胞团块收集器收集胸水,将临床送检的115例胸水制作细胞切片,苏木精-伊红染色法（HE）、免疫组织化学法染色,行细胞形态学观察及鉴别诊断,并与2009～2013年送检... 详细信息

目的探讨细胞团块收集器联合免疫标记在良、恶性胸水中的应用.方法采用细胞团块收集器收集胸水,将临床送检的115例胸水制作细胞切片,苏木精-伊红染色法（HE）、免疫组织化学法染色,行细胞形态学观察及鉴别诊断,并与2009～2013年送检的胸水标本经传统细胞涂片或液基薄层技术细胞诊断结果进行比较研究.结果 115例胸水中,经免疫及形态学证实为恶性胸水18例,恶性细胞检出率为16％,传统细胞涂片胸水癌细胞检测阳性率为5％,差异有统计学意义（P＜0.05）.在异型性细胞中,Ki-67、癌胚抗原（CEA）、甲状腺转录因子-1（TTF-1）、Napsin-A、细胞角蛋白7（CK7）在肺腺癌细胞中表达较好;而Calretinin、间皮细胞（MC）、Wilms肿瘤基因（WT1）在间皮细胞中表达较好,其表达率在良、恶性胸水中比较,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论利用细胞团块联合免疫标记能极大地提高良、恶性胸水诊断的准确率,并能客观地对恶性肿瘤细胞进行分型,提高癌细胞检出率、准确率,有利于肿瘤分型.

关键词：细胞团块收集器良、恶性胸水肺腺癌免疫标记

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基于SERS标记免疫检测的研究进展

军事医学 2016年第9期40卷 773-776页

作者：李敏汪崇文肖瑞王升启河南中医药大学郑州450003 军事医学科学院放射与辐射医学研究所北京100850

随着表面增强拉曼光谱(SERS)技术的发展,SERS与标记免疫技术的结合已成为一种新的医学研究技术。该文从SERS标记免疫检测技术的原理、研究进展、存在问题等方面叙述了SERS标记免疫检测及其最新发展。归纳了目前提高SERS标记免疫检测灵... 详细信息

随着表面增强拉曼光谱(SERS)技术的发展,SERS与标记免疫技术的结合已成为一种新的医学研究技术。该文从SERS标记免疫检测技术的原理、研究进展、存在问题等方面叙述了SERS标记免疫检测及其最新发展。归纳了目前提高SERS标记免疫检测灵敏度的研究技术及消除SERS免疫标记研究中非特异性吸附的方法。对SERS标记免疫技术未来的研究方向与发展前景进行了展望。

关键词：表面增强拉曼光谱技术免疫检测免疫标记非特异性吸附灵敏度

骨髓细胞学检查结合免疫标记对全血细胞减少症的诊断价值研究

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中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生 2021年第11期 0024-0025页

作者：黎华连谢祖林欧红娟广西柳州市人民医院广西柳州545006

探讨骨髓细胞学检查联合免疫标记对全血细胞减少症的诊断价值。方法:选取我院收治的80例全血细胞减少症患者作为研究对象,根据病因对患者进行分组,由于造血系统疾病引起的全血细胞减少症患者设为造血性组(n=65),非造血系统疾病者则设为... 详细信息

探讨骨髓细胞学检查联合免疫标记对全血细胞减少症的诊断价值。方法:选取我院收治的80例全血细胞减少症患者作为研究对象,根据病因对患者进行分组,由于造血系统疾病引起的全血细胞减少症患者设为造血性组(n=65),非造血系统疾病者则设为血性组(n=15)。分析不同病因患者的骨髓细胞学表现,统计骨髓细胞学联合免疫标记检查对该疾病的诊断准确率。结果:骨髓细胞学诊断准确率为97.50%(78/80),骨髓细胞学+免疫标记诊断准确率为100%(80/80)。造血系统疾病组外周血红细胞计数、血小板计数、白细胞计数、血红蛋白与非造血性组比较,有明显差异(p免疫标记对全血细胞减少症有较高诊断价值。

关键词：全血细胞减少症骨髓细胞学检查免疫标记

C57BL/6J小鼠耳蜗内毛细胞传入神经突触的免疫学标记观察及其意义

维普期刊数据库评论

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中华耳科学杂志 2010年第4期8卷 456-460页

作者：施磊赵宁陈丽平商秀丽徐义策王雪峰柳柯中国医科大学附属第一医院耳鼻咽喉-头颈外科沈阳110001 辽宁医学院附属第一医院耳鼻咽喉-头颈外科锦州121001 中国人民解放军总医院耳鼻咽喉-头颈外科中国人民解放军总医院耳鼻咽喉研究所北京100853

目的探讨小鼠耳蜗内毛细胞传入神经突触的免疫学标记特点及其应用方法。方法在成年的C57BL/6J小鼠上剥取新鲜的耳蜗基底膜标本,灌洗及漂洗处理之后分别使用Ctbp2(C-terminal binding protein 2,C末端结合蛋白2;1∶200),GluR 2/3(glutama... 详细信息

目的探讨小鼠耳蜗内毛细胞传入神经突触的免疫学标记特点及其应用方法。方法在成年的C57BL/6J小鼠上剥取新鲜的耳蜗基底膜标本,灌洗及漂洗处理之后分别使用Ctbp2(C-terminal binding protein 2,C末端结合蛋白2;1∶200),GluR 2/3(glutamate receptor2/3,AMPA receptor subunit 2/3,谷氨酸受体亚单位2/3;1∶200)和Dapi(4',6-Diamidino-2-phenylindole,4',6-二脒基-2-苯基吲哚)染色剂对内毛细胞突触的前膜特异结构RIBEYE、突触后膜的谷氨酸受体以及细胞核进行单独、双重和三重免疫标记,并利用激光共聚焦显微镜能够连续扫描和叠加图像的特性,观察耳蜗内毛细胞带状突触的表达、空间分布情况以及与内、外毛细胞之间的位置关系。结果单独应用Ctbp2可以清晰显示内毛细胞突触前膜所标记的结构,结合使用抗体GluR2/3进行免疫双标则可以完整显示内毛细胞突触前后膜的相关蛋白,而结合应用Dapi细胞核染色的方法可以明确标记其存在的位置以及和内、外毛细胞之间的关系,如果在此基础上加上激光共聚焦显微镜下的平光图像,则会使标记结果更加清晰、客观和准确。结论本方法可以准确显示耳蜗内毛细胞带状突触的表达、空间分布情况以及与内外毛细胞之间的位置关系,如果在实验中合理应用多重免疫荧光标记方法,将会对不同生理和病理条件下深入研究耳蜗内毛细胞突触的可塑性及其在听力变化中的作用具有重要的价值。

关键词：内毛细胞传入神经突触 RIBEYE/Ctbp2 免疫标记激光共聚焦显微镜