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展青霉素免疫学检测方法研究进展

食品安全质量检测学报 2023年第3期14卷 207-214页

作者：袁敏煊吴泓靓游丹阳郑俊豪梁效贵彭文文傅小香江西农业大学农学院南昌330045

展青霉素(patulin,PAT)作为一种对人类和动物有致畸、致癌等多种危害的真菌毒素,极易污染水果、蔬菜和谷物及其制品等。鉴于PAT污染范围广、超标检出多等问题,针对该毒素的即时检测对保障食品安全至关重要。免疫分析是快速检测真菌毒素... 详细信息

展青霉素(patulin,PAT)作为一种对人类和动物有致畸、致癌等多种危害的真菌毒素,极易污染水果、蔬菜和谷物及其制品等。鉴于PAT污染范围广、超标检出多等问题,针对该毒素的即时检测对保障食品安全至关重要。免疫分析是快速检测真菌毒素污染的有效手段之一。但是,尚未有灵敏性好、实用价值高的PAT单克隆抗体和基因工程抗体报道。本文综述了PAT免疫学检测方法研究现状,并通过梳理其免疫学检测发展历程,提出高效特异性PAT单克隆抗体制备的阻碍主要包括PAT存在较大的极性、非免疫原性、在动物体内易被降解的特性及抗体制备选用的类似物结构偏差过大等。因此,本文认为筛选或制备结构稳定且更接近PAT的类似化合物可能是特异性PAT抗体制备的关键。另一方面,随着新型材料和技术(如电化学传感器)的发展,应用性能优良的抗体替代物建立新型免疫学或非免疫学检测方法的前景非常广阔,本文为PAT快速免疫检测方法的建立和应用提供理论依据和参考。

关键词：展青霉素污染免疫学检测单克隆抗体特异性

基于TMB介导金纳米双锥体蚀刻的玉米赤霉烯酮免疫学检测方法的建立

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基于TMB介导金纳米双锥体蚀刻的玉米赤霉烯酮免疫学检测方法的建立

作者：张黔长江大学

学位级别：硕士

玉米赤霉烯酮(ZEN)是一种主要由镰刀菌属霉菌产生的一类非甾体次生代谢产物,具有类雌激素活性。常存在于被镰刀菌属霉菌污染的谷物类作物中,在谷物收获、储运、加工、销售等环节均有可能被污染。ZEN具有生殖毒性、遗传毒性、细胞毒性和... 详细信息

玉米赤霉烯酮(ZEN)是一种主要由镰刀菌属霉菌产生的一类非甾体次生代谢产物,具有类雌激素活性。常存在于被镰刀菌属霉菌污染的谷物类作物中,在谷物收获、储运、加工、销售等环节均有可能被污染。ZEN具有生殖毒性、遗传毒性、细胞毒性和免疫毒性,可对人体的生殖系统、免疫系统以及肝肾等主要代谢器官产生损害。因此,建立灵敏、快速、高效低成本的ZEN检测方法,对于控制ZEN污染、保障食品安全具有重要的现实意义。目前ZEN的检测主要采用的是以高效液相色谱法(HPLC)、液相色谱-串联质谱法(LC-MS)、薄层色谱法(TLC)等为代表的传统仪器分析方法以及免疫学分析方法。传统仪器分析方法具有分析结果准确可靠以及重复性好的特点,但是也存在样品预处理复杂、操作繁琐、检测时间长、成本高昂的不足,无法应用于现场大规模样品的快速筛查。免疫分析方法因其快速高效、操作简单、成本低廉,已逐渐成为现场大规模样品筛查的主要方法。本研究利用ZEN单克隆抗体(McAb)、金纳米双锥体(Au NBPs)以及二氧化锰纳米片(MnO NS)建立了三种用于检测ZEN的免疫学分析方法。1.ZEN间接竞争ELISA(ic-ELISA)方法。包被在酶标板中的BSA-ZEN与样品中的ZEN竞争结合McAb,经过洗涤最终形成BSA-ZEN～McAb～Ab-HRP三元免疫复合物,在HRP催化下,HO与TMB反应生成具有蓝色的氧化型TMB,加入硫酸停止反应后展现出黄色,在450 nm处具有明显的吸收峰,通过酶标仪读取OD得出分析结果。检测条件经过优化后得到标准曲线,其校准方程:Y=6.56X–0.139,R=0.9864,线性范围(IC-IC)是0.04 ng/mL～0.15ng/mL,检测限(IC)是0.036 ng/mL。在玉米粉样品中的回收率为97%～116%。2.基于ALP和MnO NS-TMB介导Au NBPs蚀刻的ZEN多色免疫传感器。基于ic-ELISA体系,MnONS催化TMB氧化,并在酸性条件下转化为TMB,在CTAB参与下,Au NBPs被TMB蚀刻,导致Au NBPs的几何外形发生改变,从而使Au NBPs的LSPR吸收峰出现蓝移。Ab-ALP可以催化抗坏血酸磷酸酯(去磷酸化)生成具有还原性的抗坏血酸(AA),AA降解MnO NS,从而抑制TMB氧化,降低Au NBPs的局部表面等离子共振(LSPR)吸收峰偏移值(Δλ)。ZEN的浓度与Au NBPs的Δλ值成正比。经过优化检测条件,得到标准曲线,校准方程为Y=137.486X-9.153(Y=Δλ,R=0.9785)。在0.1～2ng/mL范围内具有良好线性关系,检测限为0.01 ng/mL,当ZEN浓度为0.1 ng/mL时,裸眼依然可分辨出溶液颜色的显著变化。在玉米粉样品中的平均检测回收率为109.9%～125.2%。3.基于HRP-TMB介导Au NBPs蚀刻的ZEN多色免疫传感器基于ic-ELISA体系,HRP催化HO与TMB反应生成TMB,在CTAB的存在下,TMB将Au NBPs蚀刻,使Au NBPs的形状和尺寸发生改变,导致Au NBPs的LSPR吸收峰发生偏移,同时展现出肉眼可见的颜色变化。通过多功能酶标仪读取结果,对ZEN进行定量分析,通过裸眼读取结果对ZEN进行半定量分析。检测条件经过优化后得到标准曲线,其校准方程:Y=6.16-139.50X(Y=Δλ,X=lg C,R=0.9799)。在0.02～0.8 ng/mL范围内具有良好线性关系,检测限为0.01 ng/mL。ZEN浓度为0.02 ng/mL时,裸眼依然可分辨出溶液颜色的显著变化。在玉米粉样品中的平均检测回收率为89.50%～106.50%。本研究建立的三种用于ZEN的免疫学分析方法,均具有快速、灵敏度高的特点,ic-ELISA方法具有技术成熟、操作简单、成本低廉的优点。相比ic-ELISA方法,基于ALP和MnO NS-TMB介导Au NBPs蚀刻的ZEN多色免疫传感器以及基于HRP-TMB介导Au NBPs蚀刻的ZEN多色免疫传感器具有更高灵敏度、检测信号更明显、可通过裸眼实现半定量分析的优点。三种检测方法的灵敏度均能满足ZEN残留限量国家标准的要求,平均检测回收率满足美国分析化学家协会(AOAC)的相关标准,具有一定的推广应用的潜力。

关键词：玉米赤霉烯酮免疫学检测金纳米双锥体二氧化锰纳米片

Rh缺失型D(D--)血型的免疫学检测及稀有血型库分析

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细胞与分子免疫学杂志 2021年第2期37卷 164-167页

作者：赵瑛李双玉黄娴解金辉李彤彤天津市血液中心天津300110

目的探讨Rh缺失型D(D--)的基因型和血清学特点。方法采用血型血清学对1例表型为D--患者血清进行检测并通过基因测序对其进行基因分型。结果被检者血清抗筛、主侧配血在微柱凝胶法中均为4+凝集,而在盐水法中不凝集;自身对照及次侧配血在... 详细信息

目的探讨Rh缺失型D(D--)的基因型和血清学特点。方法采用血型血清学对1例表型为D--患者血清进行检测并通过基因测序对其进行基因分型。结果被检者血清抗筛、主侧配血在微柱凝胶法中均为4+凝集,而在盐水法中不凝集;自身对照及次侧配血在盐水法及微柱凝胶法中均不凝集。经血清学方法检测,该被检者血型表现为D--表型;基因分型证实,RHD基因未见突变,其相应抗原正常表达,而RHCE基因第1外显子第48碱基发生了48G>C的纯合突变,同时缺失了第2至第9外显子,导致RHCE基因相应抗原无法正常表达。结论D--与RHCE基因异常有关,怀孕或者输血均可能诱发机体血清中产生抗Hr0抗体。因此,亟需完善我国D--稀有血型库。

关键词： Rh缺失型D(D--) RHCE 抗Hr0抗体免疫学检测 D--稀有血型库

小分子环境污染物PAHs和PAEs的免疫学检测方法研究

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小分子环境污染物PAHs和PAEs的免疫学检测方法研究

作者：周勇上海交通大学

学位级别：硕士

随着工业化的发展,水环境中的小分子污染物被越来越多的检出,其中最为典型的两类小分子污染物为多环芳烃类（PAHs）和邻苯二甲酸酯类（PAEs）化合物。本研究以PAHs中的萘（NAP）和PAEs中的邻苯二甲酸二乙酯（DEP）为研究对象,旨在利用... 详细信息

随着工业化的发展,水环境中的小分子污染物被越来越多的检出,其中最为典型的两类小分子污染物为多环芳烃类（PAHs）和邻苯二甲酸酯类（PAEs）化合物。本研究以PAHs中的萘（NAP）和PAEs中的邻苯二甲酸二乙酯（DEP）为研究对象,旨在利用免疫学检测方法,制备可以特异性快速检测NAP和DEP的试纸条,以满足对现场水样中该类环境污染物的快速检测需求。首先依据半抗原的设计原理,设计2-萘丁酸和邻苯二甲酸单乙酯分别作为NAP和DEP的半抗原,并优化碳二亚胺法和混合酸酐法配比方案,制备2-萘丁酸-钥孔血蓝蛋白（KLH）和邻苯二甲酸单乙酯-牛血清蛋白（BSA）人工免疫抗原,其偶联比均介于10-20之间。在人工免疫抗原的基础上,制备NAP和DEP单克隆抗体,所获得的NAP和DEP单克隆抗体效价分别可以达到1:15625和1:30000以上。筛选出单克隆抗体标记胶体金颗粒的最优条件为p H=7.2,抗体标记量为6μL/m L,从而获得稳定的DEP金标抗体溶液。通过胶体金酶联免疫层析法,将包被抗原、金标抗体和羊抗鼠Ig G结合到空白试纸条上,获得DEP酶联免疫层析试纸条,该试纸条对DEP的检测灵敏度可以达到20μg/L,对11种结构类似物的交叉反应率小于2%,试纸条在室温干燥条件下至少可以保存90天。利用本试纸条和GB5009.271-2016国标法对所模拟的DEP污染的海水样品进行检测,结果显示当试纸条显色结果为-时,对应GC-MS测定浓度低于7.32μg/L;当显色结果为+时,对应浓度范围为38.93-156.72μg/L;当显色结果为++时,对应浓度范围为156.72-628.69μg/L;当显色结果为+++时,对应浓度高于628.69μg/L。对于实际水体检测,选取苏州太湖流域和东海区域共计36个采样点位的水样DEP进行检测,结果为均低于7.32μg/L。表明,实际水样中受到DEP的污染程度较小。

关键词：萘邻苯二甲酸二乙酯小分子环境污染物免疫学检测胶体金酶联免疫层析

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大豆过敏原免疫学检测方法研究进展

中国粮油学报 2015年第8期30卷 143-146页

作者：王耀邓瑞广张改平王方雨李志西胡骁飞农业部动物免疫学重点实验室河南省动物免疫学重点实验室河南省农业科学院郑州450002 西北农林科技大学食品科学与工程学院杨凌712100 河南农业大学牧医工程学院学院郑州450002

作为一种重要的粮食作物,大豆应用广泛并在人类和动物营养方面起着至关重要的作用,但大豆中也含有多种过敏原,能够诱发超敏反应,导致机体损伤。随着人们对食品过敏问题的日益重视,各种针对大豆过敏原的快速、准确的检测方法得到了发展,... 详细信息

作为一种重要的粮食作物,大豆应用广泛并在人类和动物营养方面起着至关重要的作用,但大豆中也含有多种过敏原,能够诱发超敏反应,导致机体损伤。随着人们对食品过敏问题的日益重视,各种针对大豆过敏原的快速、准确的检测方法得到了发展,其中免疫学方法具有灵敏性高、特异性强的特点,能够对过敏原进行定性、定量检测而成为研究热点。本文综述了针对大豆过敏原的免疫学检测方法,并对今后的研究方向进行了初步探讨。

关键词：大豆过敏原免疫学检测

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花生致敏蛋白免疫学检测方法研究进展

粮食与油脂 2020年第11期33卷 14-16页

作者：刘胜男孟继秋王珊王耀三门峡海关河南三门峡472000 河南科技大学食品与生物工程学院食品加工与安全国家级实验教学示范中心/食品原料河南省工程技术研究中心河南洛阳471023 河南安必诺检测技术有限公司河南郑州450001

对花生中主要致敏蛋白及其免疫学检测方法进行综述,为花生致敏蛋白检测方法的深入研究提供参考。

关键词：花生致敏蛋白免疫学检测

牛传染性鼻气管炎病毒免疫学检测方法研究进展

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中兽医医药杂志 2023年第4期42卷 41-46页

作者：刘婧杨晨孙续丁学智杨峰中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所、农业农村部兽用药物创制重点实验室、甘肃省新兽药工程重点实验室甘肃兰州730050 兰州理工大学生命科学与工程学院甘肃兰州730050

牛传染性鼻气管炎(传染性脓疱外阴阴道炎)是由牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)感染引起的传染病,流行范围较广。该病在临床上主要有呼吸道和生殖道两种表现型,引发多种症状,给牛养殖业造成了巨大的经济损失。病毒侵入牛体后造成持续性感染,... 详细信息

牛传染性鼻气管炎(传染性脓疱外阴阴道炎)是由牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)感染引起的传染病,流行范围较广。该病在临床上主要有呼吸道和生殖道两种表现型,引发多种症状,给牛养殖业造成了巨大的经济损失。病毒侵入牛体后造成持续性感染,病牛长期或终生带毒,给防控带来极大困难,IBR的综合防控依赖于精准的检测方法。基于抗原-抗体特异性识别反应的免疫学检测方法在特异性、敏感性、样品前处理简便性、现场适用性、检测效率等方面优势突出。IBRV的gB蛋白、gC蛋白、gE蛋白、gG蛋白等常被作为靶抗原进行检测试剂盒的研发,从IBRV的基因组结构、结构蛋白特点、选用的IBRV毒株、靶抗原的表达方式、酶联免疫吸附法和胶体金免疫层析法的建立、不同方法的符合率等方面综合论述了IBRV免疫学检测方法的研究进展,以期为该病原快速、精准、便捷的检测诊断试剂的研发提供参考。

关键词：牛传染性鼻气管炎牛传染性鼻气管炎病毒牛疱疹病毒1型免疫学检测酶联免疫吸附法胶体金免疫层析法

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甲状腺激素的免疫学检测方法新进展

中文科技期刊数据库（文摘版）医药卫生 2023年第4期 0016-0018页

作者：陈镇广西玉林市第二人民医院广西玉林537000

近几年,临床甲状腺疾病的病发率呈现为持续上升的态势,据相关数据显示,甲状腺的发病率距今已经达到3%—10%。而影响甲状腺疾病形成的主要因素都是与人体的免疫系统有着密切关联。而在人体血液之中的甲状腺技术含量将会直接经由免疫标记... 详细信息

近几年,临床甲状腺疾病的病发率呈现为持续上升的态势,据相关数据显示,甲状腺的发病率距今已经达到3%—10%。而影响甲状腺疾病形成的主要因素都是与人体的免疫系统有着密切关联。而在人体血液之中的甲状腺技术含量将会直接经由免疫标记方法进行检测,这样就会促使这些没有办法精准的去定量检测分析的细微物质可以运用免疫分析进行定量精准的去检测。目前伴随临床检验技术的不断发展,临床先进的免疫分析检测方法在持续诞生,能够在检测的敏感度以及特异性还有精准性等方面都有着显著作用,已经广泛应用在临床对内分泌检测和分析上面。本次将对甲状腺激素的免疫学检测方法进行深入探究,通过对国内外相关的研究文献进行整理和分析,总结自己的观点形成如下综述。

关键词：甲状腺激素免疫学检测探究

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猪圆环病毒免疫学检测技术研究进展

新疆畜牧业 2022年第3期37卷 12-17页

作者：高朝峰加娜尔·阿布扎里汗周婷婷吐鲁番市鄯善县畜牧兽医站新疆鄯善838200 新疆维吾尔自治区动物卫生监督所乌鲁木齐830000 新疆维吾尔自治区牧业信息中心乌鲁木齐830004

为了更好的掌握猪圆环病毒(Porcine Circovirus,PCV)快速、准确的检测鉴定方法,现就近年来国内外研究的实验室免疫学检测PCV抗原和抗体的技术,包括:免疫组织化学、夹心ELISA、免疫荧光方法、胶体金免疫层吸法等,进行综述,以期对临床快... 详细信息

为了更好的掌握猪圆环病毒(Porcine Circovirus,PCV)快速、准确的检测鉴定方法,现就近年来国内外研究的实验室免疫学检测PCV抗原和抗体的技术,包括:免疫组织化学、夹心ELISA、免疫荧光方法、胶体金免疫层吸法等,进行综述,以期对临床快速诊断和防控提供一定的参考。

关键词：猪圆环病毒免疫学检测抗体