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克伦特罗残留检测免疫芯片的研制

计量学报 2015年第6期36卷 657-661页

作者：孙来玉钱坤邵朝纲尹莉严琼琼陆云华杨金田湖州师范学院生命科学学院

为实现克伦特罗残留的规模检测设计其残留检测的免疫芯片。以玻片为载体并对玻片表面进行APTES-DGA化学修饰，将克伦特罗抗体偶联至玻片表面，以牛血清白蛋白封闭玻片表面活性基团，加待测品和标样，标样中辣根过氧化酶标记的克伦特罗... 详细信息

为实现克伦特罗残留的规模检测设计其残留检测的免疫芯片。以玻片为载体并对玻片表面进行APTES-DGA化学修饰，将克伦特罗抗体偶联至玻片表面，以牛血清白蛋白封闭玻片表面活性基团，加待测品和标样，标样中辣根过氧化酶标记的克伦特罗和待测品中的克伦特罗与克伦特罗抗体竞争性结合，借助辣根过氧化酶催化化学发光反应并检测光信号值，检测过程中考查加样体积、温育温度、温育时间、洗液浓度及化学发光积分时间等对检测结果的影响，检测方法学试验中考查检出限、定量限、线性和回收率等指标。结果显示：通过APTES。DGA修饰载玻片具有较好的信号均一性和抗体偶联能力，检测过程中加样体积为50μL、温育温度为37℃、温育时间为30min、洗液浓度为10倍稀释液、化学发光积分时间为60s具有较稳定的检测结果。本法研制的免疫芯片检测克伦特罗残留快速、简单、准确。

关键词：计量学免疫芯片药物残留检测克伦特罗化学发光

超高效合相色谱法对克伦特罗对映体的拆分及其在猪尿中的残留分析

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分析测试学报 2021年第12期40卷 1758-1764页

作者：张文华侯建波荣杰峰汪鹏谢文徐敦明李可郗存显韩超杭州海关技术中心浙江杭州310016 厦门海关福建厦门361001 重庆海关技术中心重庆400020 浙江树人大学生物与环境工程学院浙江杭州310015

该文建立了一种超高效合相色谱法(UPC2)拆分克伦特罗对映体及测定猪尿中克伦特罗对映体含量的分析方法。试样经乙酸乙酯提取,阳离子交换固相萃取柱净化后,采用CHIRALPAK IA-3(4.6 mm×100 mm,3μm)分离,以超临界CO2与10 mol/L醋酸铵-甲... 详细信息

该文建立了一种超高效合相色谱法(UPC2)拆分克伦特罗对映体及测定猪尿中克伦特罗对映体含量的分析方法。试样经乙酸乙酯提取,阳离子交换固相萃取柱净化后,采用CHIRALPAK IA-3(4.6 mm×100 mm,3μm)分离,以超临界CO2与10 mol/L醋酸铵-甲醇溶液(0.5∶99.5,体积比)为流动相,流速为2.0 mL/min,梯度洗脱,检测波长为241 nm时,克伦特罗对映体的分离效果最佳,且在50~10000μg/L范围内呈良好线性,相关系数大于0.9998,方法的定量下限(S/N=10)均为1.0μg/L。猪尿中克伦特罗对映体在1.0、5.0、20.0μg/L加标水平的回收率为76.4%~94.5%,相对标准偏差(RSD)为3.6%~6.6%。方法用于克伦特罗外消旋体标准品及20份猪尿实际样品的测定,结果显示,克伦特罗外消旋体中(+)-克伦特罗和(-)-克伦特罗含量分别为5.6 mg/L和5.5 mg/L,该计算结果与文献报道基本相符。猪尿样品中均未检出两种克伦特罗对映体。该方法具有分析速度快、分离效果好、重现性好、有机溶剂消耗少等特点,可用于猪尿样品中克伦特罗对映体含量的测定,为手性药物开发、使用及相关法规的制定提供了技术支撑。

关键词：超高效合相色谱(UPC2) 克伦特罗猪尿对映体手性分离

克伦特罗和莱克多巴胺多残留胶体金免疫层析试纸条的研制

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畜牧兽医学报 2013年第1期44卷 87-94页

作者：姜金庆杨雪峰王自良邓瑞广王选年张改平河南科技学院动物科学学院新乡453003 河南省动物免疫学重点实验室郑州453003

本试验旨在研制同时检测克伦特罗(CL)和莱克多巴胺(RAC)的多残留胶体金免疫层析试纸条(Multi-strip)。用细胞融合技术筛选CL和RAC杂交瘤细胞株,制备单克隆抗体,金标抗体竞争性膜层析技术研制Multi-strip。该试纸条由样品垫、偶联垫、双... 详细信息

本试验旨在研制同时检测克伦特罗(CL)和莱克多巴胺(RAC)的多残留胶体金免疫层析试纸条(Multi-strip)。用细胞融合技术筛选CL和RAC杂交瘤细胞株,制备单克隆抗体,金标抗体竞争性膜层析技术研制Multi-strip。该试纸条由样品垫、偶联垫、双检测线和质控线标记的NC膜、吸收垫等几部分构成,其中偶联垫上灌注有CL和RAC两种金标单克隆抗体,双检测线由检测抗原CL-OVA和RAC-BSA喷膜构成,间距2mm。结果表明:多残留试纸条的CL和RAC目测检测限分别为1和2ng·mL-1,检测时间5～8min。基质呈阳性的真实样品用单残留试纸条、ELISA和GC-MS检测,结果一致,无假阳性或假阴性案例。该试纸条具有快速、敏感、特异、简便等特点,适合于现场检测和筛选。

关键词：克伦特罗莱克多巴胺单克隆抗体胶体金多残留试纸条

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克伦特罗的检测方法研究进展

食品研究与开发 2017年第4期38卷 203-207页

作者：伍晓红邢磊聂婉陈秋玲王琤(韦华) 江西科技师范大学生命科学学院江西南昌330013 江西省兽药饲料监察所江西南昌330029

综述克伦特罗的检测方法研究进展,分别对各种检测方法的特点进行讨论,并对克伦特罗的检测方法的研究前景进行了展望,以期对畜产品安全检测有一定的参考作用。

关键词：畜产品克伦特罗检测

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克伦特罗在猪体内立体选择性降解行为研究

中国兽药杂志 2015年第12期49卷 27-31页

作者：于遵波张艳吴银良中国兽医药品监察所北京100081 宁波市农业科学研究院浙江宁波315040

为了解克伦特罗在猪体内是否存在立体选择性降解行为,手性分离制备了克伦特罗单一对映体,然后对生猪进行饲喂含有克伦特罗外消旋体(2.0 mg/kg)和单一对映体(1.0 mg/kg)的饲料,7 d后进行屠宰,定期采集猪的肌肉、肝脏、肾脏、心脏、肺脏... 详细信息

为了解克伦特罗在猪体内是否存在立体选择性降解行为,手性分离制备了克伦特罗单一对映体,然后对生猪进行饲喂含有克伦特罗外消旋体(2.0 mg/kg)和单一对映体(1.0 mg/kg)的饲料,7 d后进行屠宰,定期采集猪的肌肉、肝脏、肾脏、心脏、肺脏和尿液,测定克伦特罗对映体含量。结果表明,克伦特罗在猪体内存在立体选择性降解行为,肝脏、肾脏和肺脏中对映体(右旋体/左旋体)比例较高,心脏和肌肉中的对映体比例相对较低;休药3 d时,肝脏、肾脏、猪尿中的对映体比例均处于最高点。同时克伦特罗对映体在猪体内不存在相互转化现象。该研究为科学评估动物性食品残存的克伦特罗对人体健康造成的危害提供了科学依据。

关键词：克伦特罗手性对映体立体选择性降解液相色谱串联质谱法

蛋白芯片法同时检测食品中克伦特罗与莱克多巴胺的残留量

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分析测试学报 2019年第8期38卷 913-919页

作者：李周敏王颖冷寒雪李心爱康希南京大学金陵学院江苏南京210089 南京晓庄学院环境科学学院江苏南京211171

建立了食品中克伦特罗和莱克多巴胺残留含量同时检测的微阵列蛋白芯片法。结果显示:克伦特罗的线性范围为0.07~1.2ng/g;莱克多巴胺的线性范围为0.05~0.8ng/g。猪肉、猪肝中上述两种物质的加标回收率为74%~132%,相对标准偏差均小于10%。... 详细信息

建立了食品中克伦特罗和莱克多巴胺残留含量同时检测的微阵列蛋白芯片法。结果显示:克伦特罗的线性范围为0.07~1.2ng/g;莱克多巴胺的线性范围为0.05~0.8ng/g。猪肉、猪肝中上述两种物质的加标回收率为74%~132%,相对标准偏差均小于10%。将所建立的方法与HPLC-MS方法进行对比,两者检测结果一致。该方法简单、快速、通量高,可用于实际样品中克伦特罗和莱克多巴胺残留量的检测。

关键词：蛋白芯片克伦特罗莱克多巴胺人工抗原

克伦特罗单克隆抗体的纯化及其生物学特性的研究

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中国应用生理学杂志 2014年第5期30卷 413-416页

作者：李晓丽宁保安刘楠马新华欧国荣高志贤军事医学科学院卫生学环境医学研究所天津市环境与食品安全风险监控技术重点实验室天津300050

目的:将自制克伦特罗(CL)单克隆抗体纯化并研究其生物学特性,进行性质鉴定并建立检测标准曲线。方法:用ELISA法测定克伦特罗单克隆抗体的亲和常数和抗体活性,ELISA测定单克隆抗体与BSA的交叉反应及与几种结构和功能类似物的交叉反应,然... 详细信息

目的:将自制克伦特罗(CL)单克隆抗体纯化并研究其生物学特性,进行性质鉴定并建立检测标准曲线。方法:用ELISA法测定克伦特罗单克隆抗体的亲和常数和抗体活性,ELISA测定单克隆抗体与BSA的交叉反应及与几种结构和功能类似物的交叉反应,然后采用间接竞争ELISA方法建立检测标准曲线。将制备的含克伦特罗单克隆抗体的小鼠腹水用盐析法和免疫亲和柱层析法进行抗体纯化。结果:经ELISA法测定,单克隆抗体亲和常数为2.90×1010mol/L,抗体效价最高达106。单克隆抗体对BSA无反应,对几种结构和功能类似物的交叉反应率均小于0.005%。建立的标准曲线R2=0.9812,最低检测限为1.0 ng/ml。结论:建立了间接竞争ELISA检测CL的标准曲线。自制的克伦特罗单克隆抗体亲和力好,特异性高。为以后实际样品的检测及制备CL免疫检测试纸条和试剂盒奠定了基础。

关键词：克伦特罗单克隆抗体性质鉴定酶联免疫吸附分析法

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克伦特罗单克隆抗体的研制及初步鉴定

动物医学进展 2011年第6期32卷 68-72页

作者：王帅兵朱善元袁宗辉江苏畜牧兽医职业技术学院江苏泰州225300 江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室江苏泰州225300 农业部兽药残留基准实验室/农业部食品安全评价重点开放实验室湖北武汉430070

为制备克伦特罗(clenbuterol,CL)单克隆抗体,鉴定其特性,采用重氮化法合成克伦特罗-人血清白蛋白(CL-HSA)作为免疫原免疫小鼠,通过杂交瘤技术建立杂交瘤细胞株,利用体内诱生法制备单克隆抗体,用间接ELISA和间接竞争ELISA分别测定抗体效... 详细信息

为制备克伦特罗(clenbuterol,CL)单克隆抗体,鉴定其特性,采用重氮化法合成克伦特罗-人血清白蛋白(CL-HSA)作为免疫原免疫小鼠,通过杂交瘤技术建立杂交瘤细胞株,利用体内诱生法制备单克隆抗体,用间接ELISA和间接竞争ELISA分别测定抗体效价和特异性。将细胞反复冻存和传代,考察稳定性。获得细胞株C611,诱生腹水中抗体的效价为1∶64 000,抗体对CL的灵敏度为0.1 ng/mL,IC50约为1 ng/mL,与其他同类药物交叉反应均特异性强,可用于CL快速检测试剂盒的研制。

关键词：克伦特罗单克隆抗体效价特异性鉴定

同位素稀释质谱法测定猪肉中克伦特罗含量的国际比对APMP.QM-S6

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色谱 2014年第10期32卷 1104-1110页

作者：许森李秀琴罗锡明张庆合中国计量科学研究院北京100029 中国地质大学北京100083

建立了同位素稀释质谱法(IDMS)测定猪肉中克伦特罗含量的高准确度方法,并应用于亚太计量规划组织(Asia Pacific Metrology Programme,APMP)开展的国际比对"猪肉中克伦特罗含量测定"(APMP.QM-S6)。本研究考察了影响测定结果的喷雾电压值... 详细信息

建立了同位素稀释质谱法(IDMS)测定猪肉中克伦特罗含量的高准确度方法,并应用于亚太计量规划组织(Asia Pacific Metrology Programme,APMP)开展的国际比对"猪肉中克伦特罗含量测定"(APMP.QM-S6)。本研究考察了影响测定结果的喷雾电压值、流动相、色谱柱、提取条件、净化条件等主要因素并进行了优化,并对测定结果的不确定度进行了评定。结果表明:流动相组成以及pH值会影响克伦特罗的质谱响应以及最优的电喷雾电压值;样品溶剂会影响克伦特罗的色谱保留,甲醇溶剂会引起严重的溶剂效应,甚至导致峰分裂;克伦特罗易在固相萃取柱及亲水性滤膜上吸附,且吸附材料和滤膜上吸附的杂质有可能被洗脱,引起基质效应,干扰测定。提取效率最高的方法是采用0.1%(v/v)甲酸乙腈溶液为提取溶剂,通过匀浆进行提取。方法检出限(以信噪比大于3计)为0.2μg/kg。比对样品中克伦特罗的含量为5.18μg/kg±0.50μg/kg(k=2),比对结果与参考值等效一致,取得国际互认。该方法准确可靠,可为猪肉中克伦特罗的日常检测提供参考。

关键词：同位素稀释质谱法克伦特罗猪肉国际比对