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信号肽对浸麻类芽孢杆菌α-环糊精葡萄糖基转移酶在大肠杆菌中胞外表达的影响

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工业微生物 2011年第3期41卷 54-59页

作者：李彬吴敬陈坚食品科学与技术国家重点实验室江南大学无锡214122 工业生物技术教育部重点实验室江南大学生物工程学院无锡214122

为了筛选得到利于浸麻类芽孢杆菌Paenibacillus macerans α-环糊精葡萄糖基转移酶(α-CGT酶)分泌表达的信号肽,提高α-CGT酶的分泌表达量,本研究考察了大肠杆菌中外源蛋白分泌表达常用的OmpA、PelB、OmpT和Endoxylanase四个信号肽对重... 详细信息

为了筛选得到利于浸麻类芽孢杆菌Paenibacillus macerans α-环糊精葡萄糖基转移酶(α-CGT酶)分泌表达的信号肽,提高α-CGT酶的分泌表达量,本研究考察了大肠杆菌中外源蛋白分泌表达常用的OmpA、PelB、OmpT和Endoxylanase四个信号肽对重组α-CGT酶在大肠杆菌中胞外表达的影响。在相同的发酵条件下,OmpA信号肽介导的分泌效果最好,发酵72 h,胞外酶活达到了32 U/mL,分别是PelB、OmpT介导效率的2.4倍和4.3倍。Endoxylanase信号肽介导的分泌效果相对较差,在胞外只能检测到很低的α-CGT酶活性,大量α-CGT酶以不可溶性的包涵体形式存在。OmpA信号肽能够有效地介导Paenibacillus macerans α-CGT酶在重组大肠杆菌中的分泌表达。

关键词： Paenibacillus macerans α-CGT酶胞外表达信号肽大肠杆菌

信号肽序列对A型流感病毒H1N1 HA蛋白表达的影响

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畜牧与兽医 2020年第8期52卷 64-67页

作者：郑屠园李娅慧周继勇胡伯里南京农业大学动物医学院江苏南京210095 浙江大学动物医学系农业部动物病毒学重点实验室浙江杭州310058

为了探究信号肽对A型流感病毒血凝素蛋白(hemagglutinin,HA)表达的影响,扩增了病毒的HA基因,利用双酶切方法将HA基因分别克隆至pCMV-Flag-N及pCMV-Flag-C载体中,成功获得了包含HA信号肽的SP-HA-Flag载体和缺失信号肽的Flag-HA载体,将重... 详细信息

为了探究信号肽对A型流感病毒血凝素蛋白(hemagglutinin,HA)表达的影响,扩增了病毒的HA基因,利用双酶切方法将HA基因分别克隆至pCMV-Flag-N及pCMV-Flag-C载体中,成功获得了包含HA信号肽的SP-HA-Flag载体和缺失信号肽的Flag-HA载体,将重组质粒转染至293T细胞后利用Western blot及间接免疫荧光方法检测HA蛋白表达情况。结果表明,该信号肽显著下调HA蛋白的表达量,并调控HA在细胞内的定位:含信号肽序列的HA蛋白主要定位在细胞膜,而不含信号肽的HA蛋白则主要定位在细胞质。本研究为进一步研究流感病毒HA蛋白的生物学功能提供了基础信息。

关键词：血凝素载体构建信号肽重组蛋白表达

香蕉细菌性软腐病菌XJ8-3-3基因组中ORFs的信号肽及分泌蛋白功能预测分析

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果树学报 2014年第6期31卷 1057-1064页

作者：肖文超范会云白亭亭王婉李华平亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室广州510642 华南农业大学资源环境学院广州510642 广东省微生物信号与作物病害防控重点实验室广州510642

【目的】利用香蕉细菌性软腐病菌XJ8-3-3全基因组测序结果对其信号肽进行预测和分析,为深入研究其分泌蛋白、明确香蕉与病原微生物互作的分子机制奠定基础。【方法】应用Signal Pv4.1、TMHMMv2.0、THUMBUP、Target P1.1、Lipo P1.0、Tat... 详细信息

【目的】利用香蕉细菌性软腐病菌XJ8-3-3全基因组测序结果对其信号肽进行预测和分析,为深入研究其分泌蛋白、明确香蕉与病原微生物互作的分子机制奠定基础。【方法】应用Signal Pv4.1、TMHMMv2.0、THUMBUP、Target P1.1、Lipo P1.0、Tat P1.0、big-PI predictor 7个软件对香蕉细菌性软腐病菌基因组中4 313个ORFs进行预测分析,并通过swisspot数据库预测信号肽所在ORFs的功能。【结果】香蕉细菌性软腐病菌中存在具有信号肽的ORFs 218个,占其基因组编码ORFs的5.05%,其中有184个ORFs属于Ⅰ型信号肽,32个ORFs属于Ⅱ型信号肽,2个ORF为CYT型,未发现Prepilin-like型信号肽的存在。在所有分泌蛋白中,有122个具有可预测的功能,其余96个为功能未知的推定蛋白。【结论】解析了香蕉细菌性软腐病菌基因组ORFs中的信号肽及分泌蛋白的可能功能,发现存在很多果胶酶、蛋白酶、纤维素酶等致病因子和一系列其他可能的致病因子,这为后续致病机理的研究提供了众多候选基因。

关键词：香蕉细菌性软腐病菌信号肽分泌蛋白

促进米黑根毛霉脂肪酶分泌的毕赤酵母内源信号肽的筛选

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现代食品科技 2019年第10期35卷 155-163页

作者：苗杨利李站胜韩双艳华南理工大学生物科学与工程学院广东省发酵与酶工程重点实验室

米黑根毛霉脂肪酶(Rhizomucor miehei Lipase,RML)在造纸、食品、化妆品以及医药等行业应用广泛。本研究通过SignalP 4.1在线预测软件预测出9种具有分泌潜力的毕赤酵母内源信号肽序列:FLO10、CPR5、PRY2、DSE4、NUP145、MSB2、SSP120、F... 详细信息

米黑根毛霉脂肪酶(Rhizomucor miehei Lipase,RML)在造纸、食品、化妆品以及医药等行业应用广泛。本研究通过SignalP 4.1在线预测软件预测出9种具有分泌潜力的毕赤酵母内源信号肽序列:FLO10、CPR5、PRY2、DSE4、NUP145、MSB2、SSP120、FRE2、FLO9。以广泛应用的酿酒酵母α-交配因子(α-mating factor,α-MF)信号肽为对照,考察这九种内源信号肽对增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)和RML在蛋白酶缺陷型PichiaPinkTM表达系统的分泌效果。结果发现FLO10、PRY2、DSE4、MSB2、SSP120、FRE2能有效介导EGFP分泌,且PRY2、DSE4、MSB2、FRE2介导EGFP的分泌水平优于α-MF,分别是α-MF的2.15倍、1.15倍、1.33倍、1.30倍;FLO10、PRY2、DSE4、FRE2能有效介导RML的分泌,且FLO10介导RML的分泌水平最高,是α-MF的1.50倍,说明内源信号肽FLO10更能有效分泌RML。本研究为提高米黑根毛霉脂肪酶在蛋白酶缺陷型毕赤酵母的表达量奠定了一定的基础。

关键词：蛋白酶缺陷型毕赤酵母信号肽增强型绿色荧光蛋白(EGFP) 米黑根毛霉脂肪酶(RML)

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信号肽及其在蛋白质表达中的应用

生物技术通报 2006年第6期22卷 38-42页

作者：韦雪芳王冬梅刘思周鹏热带作物生物技术国家重点实验室华南热带农业大学海口校区海口571101

分子生物学研究已进入后基因组时代,其中心任务是更多地关注基因组表达的蛋白质的结构和功能。由于基因功能最终通过其表达产物——蛋白质来实现,因此,要了解基因组全部功能活动,最终也必须回到蛋白质上。另外,在菌株、培养和发酵等逐... 详细信息

分子生物学研究已进入后基因组时代,其中心任务是更多地关注基因组表达的蛋白质的结构和功能。由于基因功能最终通过其表达产物——蛋白质来实现,因此,要了解基因组全部功能活动,最终也必须回到蛋白质上。另外,在菌株、培养和发酵等逐渐成熟的条件下,构建高效的表达载体以提高外源蛋白质的表达量是降低工业化生产成本的关键。随着研究的深入,发现信号肽对蛋白质的定位有着非常重要的作用,使得信号肽的研究不仅具有重要的理论意义,而且也具有潜在的应用价值。就信号肽的结构和功能,信号肽的捕获方法及其在原核表达系统和真核表达系统中表达外源蛋白质的应用做一些介绍。

关键词：信号肽捕获原核表达系统真核表达系统蛋白质表达

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运用计算机软件预测木质部寄生属信号肽

浙江农业学报 2017年第3期29卷 515-520页

作者：张志超黄勇徐可成宋红杨俊誉张彧黄琼云南农业大学教育部生物多样性与病虫害控制重点实验室云南昆明650201 云南省医疗器械检验所云南昆明650034 云南生物资源保护与利用国家重点实验室云南昆明650201

利用已经公布的木质部寄生属(Xylella fastidiosa)2 766个基因组数据信息,运用在线计算机预测软件,分析了木质部寄生属(Xylella fastidiosa)的分泌蛋白组。运用Signal P version 2.0预测得到204个开放阅读框架具有编码蛋白质的N-端信号... 详细信息

利用已经公布的木质部寄生属(Xylella fastidiosa)2 766个基因组数据信息,运用在线计算机预测软件,分析了木质部寄生属(Xylella fastidiosa)的分泌蛋白组。运用Signal P version 2.0预测得到204个开放阅读框架具有编码蛋白质的N-端信号肽;运用TMHMM、GPI-anchored预测具有非跨膜蛋白(或者在N-端信号肽只有1个跨膜区),不具有锚定位点的173个,运用Target P预测除去分泌到线粒体以及位置不确定的分泌蛋白,最终得到X.fastidiosa的分泌蛋白为149个。分泌类信号肽(Sec-type)114个和具双精氨酸结构的信号肽(RR-motif)32个,分别占分泌蛋白的76.5%和21.5%,脂蛋白信号肽3个,仅占2%,没有预测到类前菌毛信号肽和细菌素及外激素信号肽。

关键词：木质部寄生属分泌蛋白信号肽

带有丝素重链信号肽序列的家蚕丝胶蛋白启动子驱动DsRed的瞬时分泌表达

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昆虫学报 2009年第11期52卷 1177-1182页

作者：彭云潘远旺钱琰琰郑清银姜岚曹广力薛仁宇贡成良苏州大学医学部基础医学与生物科学学院江苏苏州215123

为了探讨家蚕Bombyxmori丝素蛋白重链信号肽序列在中部丝腺组织中是否具有功能活性,根据家蚕丝蛋白基因的启动子活性高、丝蛋白具有高效分泌的特性,构建了带有丝素重链基因fib-H信号肽的家蚕丝胶-1(ser-1)启动子(ser-HS),用ser-HS驱动Ds... 详细信息

为了探讨家蚕Bombyxmori丝素蛋白重链信号肽序列在中部丝腺组织中是否具有功能活性,根据家蚕丝蛋白基因的启动子活性高、丝蛋白具有高效分泌的特性,构建了带有丝素重链基因fib-H信号肽的家蚕丝胶-1(ser-1)启动子(ser-HS),用ser-HS驱动DsRed基因构建了分泌型瞬时表达载体pSK-SerHS-DsRed-polyA。转染细胞实验显示,该载体能在家蚕BmN细胞中瞬时表达DsRed。家蚕注射载体后,可在中部丝腺腔中检测到红色荧光,表明瞬时表达的DsRed已分泌到丝腺腔内。据此提出克隆的fib-H信号肽序列在家蚕中部丝腺组织中具有信号肽的功能。

关键词：家蚕丝胶启动子丝素重链基因信号肽 DsRed BmN细胞丝腺

一株拮抗香蕉枯萎病的内生细菌的分离及其几丁质酶基因信号肽的分泌活性分析

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中国生物工程杂志 2010年第9期30卷 24-30页

作者：夏启玉王宇光孙建波卢雪花顾文亮中国热带农业科学院热带生物技术研究所农业部热带作物生物技术重点开放实验室海口571101

目的:旨在分离并选择一株香蕉内生细菌作为内生基因工程生防菌,并克隆其几丁质酶基因的信号肽序列。方法:从香蕉植株杆下部分离并选择了一株拮抗香蕉枯萎病且具有分泌几丁质酶能力的内生细菌,对该菌株进行了形态观察、生理生化测定和16S... 详细信息

目的:旨在分离并选择一株香蕉内生细菌作为内生基因工程生防菌,并克隆其几丁质酶基因的信号肽序列。方法:从香蕉植株杆下部分离并选择了一株拮抗香蕉枯萎病且具有分泌几丁质酶能力的内生细菌,对该菌株进行了形态观察、生理生化测定和16SrDNA序列分析,克隆了其几丁质酶基因的编码序列并预测了其信号肽,构建了含有信号肽和不含信号肽的几丁质酶的表达菌株BL-chi1和BL-chi2。结果:结合形态观察、生理生化特征和16SrDNA序列比对分析确定该菌株为Klebsiella属,将该菌株命名为KKWB-5;BL-chi1和BL-chi2经IPTG诱导后,均表达了与预期蛋白大小一致的蛋白,同时BL-chi1诱导后的培养基上清中出现一条约45kDa的条带,而BL-chi2和空载体的BL-pET22b诱导后的培养基上清中均无此条带;几丁质水解试验发现,BL-chi1诱导后的培养基上清中的蛋白经浓缩和纯化后都能在几丁质平板上形成透明水解圈。结论:该几丁质酶的信号肽能被BL21(DE3)所识别,将几丁质酶分泌到培养基中,并且分泌的几丁质酶具有水解几丁质的生物学活性。内生菌KKWB-5的分离及其几丁质酶分泌信号肽序列的克隆为进一步构建内生工程菌来防治香蕉枯萎病打下了基础。

关键词：香蕉枯萎病内生细菌克雷伯氏菌几丁质酶信号肽分泌活性

菜豆根瘤菌Rhizobium etli CFN42全基因组含信号肽分泌蛋白的鉴定与分析

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基因组学与应用生物学 2014年第5期33卷 961-969页

作者：张武马金田潘伟雷腾英大理学院农学与生物科学学院大理671003 大理学院艺术学院大理671003

利用菜豆根瘤菌Rhizobium etli CFN42全基因组测序结果,结合计算机技术和生物信息学分析方法,对菜豆根瘤菌蛋白质组中的分泌蛋白进行预测和分析,以便更深入地了解共生固氮的分子机制。经过分析发现,在该根瘤菌5 963个蛋白质中,具有信号... 详细信息

利用菜豆根瘤菌Rhizobium etli CFN42全基因组测序结果,结合计算机技术和生物信息学分析方法,对菜豆根瘤菌蛋白质组中的分泌蛋白进行预测和分析,以便更深入地了解共生固氮的分子机制。经过分析发现,在该根瘤菌5 963个蛋白质中,具有信号肽的分泌蛋白332个,占总数的5.4%主要涉及底物转运、物质代谢和信号转导等方面。在有功能描述的186个分泌蛋白中,识别了Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型分泌系统和丝氨酸蛋白酶,这些蛋白质可能参与了根瘤菌对宿主植物的侵染,是两者分子对话的关键参与者;在假定蛋白中,通过结构域分析,发现了SH3b、BA14K和EFh结构域,含有这些结构域的分泌蛋白可能参与了根瘤信号转导途径。在根瘤菌共生结瘤过程中,分泌蛋白发挥了重要作用。

关键词：菜豆根瘤菌全基因组分泌蛋白信号肽