检索结果-南通市图书馆

信号肽优化提高葡萄糖氧化酶在毕赤酵母中的表达量

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国农业科技导报 2023年第2期25卷 211-219页

作者：张娜闫亚茹武运张宇宏张伟新疆农业大学食品科学与药学学院乌鲁木齐830052 中国农业科学院生物技术研究所北京100081

葡萄糖氧化酶(glucose oxidase,GOD)广泛用于食品加工、饲料添加剂、生物传感器及工业生产等领域。较曲霉而言,毕赤酵母是更具高效生产GOD潜力的微生物,其副产物少,分离纯化简单。但由于外源基因、基因剂量以及分泌信号等因素的影响,毕... 详细信息

葡萄糖氧化酶(glucose oxidase,GOD)广泛用于食品加工、饲料添加剂、生物传感器及工业生产等领域。较曲霉而言,毕赤酵母是更具高效生产GOD潜力的微生物,其副产物少,分离纯化简单。但由于外源基因、基因剂量以及分泌信号等因素的影响,毕赤酵母GOD产量仍然较低,限制了GOD在食品加工等领域的大规模应用。基于毕赤酵母密码子偏好性和mRNA二级结构能量,对毕赤酵母重组表达盒中的α因子信号肽进行改造,得到4种含有不同信号肽的毕赤酵母重组菌株。结果表明,使用含最高密码子频率信号肽α1重组菌株的GOD酶活力是出发菌株的2.01倍;而使用含低密码子频率信号肽α4重组菌株的GOD酶活力仅为出发菌株的41%。综上所述,毕赤酵母表达载体中的信号肽核酸序列排布能够影响重组GOD的表达量,为提高毕赤酵母重组蛋白表达量提供了新的研究思路。

关键词：葡萄糖氧化酶信号肽毕赤酵母蛋白表达

信号肽类型对新布尼亚病毒SFTSV Gn蛋白靶向表达特征影响的研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国病原生物学杂志 2023年第2期18卷 132-135,140页

作者：张凡张娟徐家馨吴玉龙李波清乔媛媛滨州医学院基础医学院病原生物学教研室山东烟台264003

目的研究不同类型信号肽对新布尼亚病毒(SFTSV)包膜蛋白Gn表达的影响。方法以SFTSV(SD4毒株)M段为模板PCR扩增Gn基因,双酶切后分别连接至A16H和pHL表达载体,连接产物转染293T细胞,收集细胞和上清进行Western blot、免疫荧光以及质谱检... 详细信息

目的研究不同类型信号肽对新布尼亚病毒(SFTSV)包膜蛋白Gn表达的影响。方法以SFTSV(SD4毒株)M段为模板PCR扩增Gn基因,双酶切后分别连接至A16H和pHL表达载体,连接产物转染293T细胞,收集细胞和上清进行Western blot、免疫荧光以及质谱检测,分析Gn重组蛋白的表达情况;ELISA检测Gn重组蛋白的结合活性。结果成功构建缺失载体信号肽的pA16H-Gn质粒和包含信号肽的sp-pA16H-Gn质粒,以及携带另一种载体信号肽的pHL-Fc-Gn质粒。缺失载体信号肽的pA16H-Gn质粒在细胞内外均不表达Gn重组蛋白(rGn-Fc),包含A16H载体信号肽的sp-pA16H-Gn质粒在细胞内表达Gn重组蛋白(rGn-Fc),但不能分泌表达,包含pHL载体信号肽的pHL-Fc-Gn质粒可将Gn重组蛋白(rGn-Fc)分泌表达到胞外,且具有结合活性。结论载体本身携带的信号肽会影响SFTSV Gn重组蛋白的表达,不同信号肽影响重组蛋白的表达定位。该研究为SFTSV Gn重组蛋白的开发奠定了基础,同时也为SFTSV重组疫苗的研究提供了新思路。

关键词：发热伴血小板减少综合征病毒信号肽分泌重组蛋白

多个稻曲病菌效应因子的信号肽验证和表达分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国水稻科学 2024年第3期38卷 256-265页

作者：尹潇潇张芷菡颜绣莲廖蓉杨思葭 Beenish HASSAN 郭岱铭樊晶赵志学王文明四川农业大学西南作物基因资源发掘与利用国家重点实验成都611130

【目的】信号肽对效应因子的分泌至关重要,影响病原微生物的致病进程。前期鉴定到在稻曲病菌侵染水稻花器官过程中显著上调表达的10个效应因子基因,但这些效应因子是否含有功能性信号肽及其表达模式尚不明确。【方法】利用SignaIP-5.0... 详细信息

【目的】信号肽对效应因子的分泌至关重要,影响病原微生物的致病进程。前期鉴定到在稻曲病菌侵染水稻花器官过程中显著上调表达的10个效应因子基因,但这些效应因子是否含有功能性信号肽及其表达模式尚不明确。【方法】利用SignaIP-5.0数据库预测、烟草瞬时表达系统和酵母信号肽分泌实验,分析并鉴定这些效应因子的信号肽。利用实时荧光定量PCR技术,检测效应因子基因的表达模式。【结果】UV_44、UV_1548、UV_1567等10个稻曲病菌效应因子均含有信号肽。烟草瞬时表达结果显示,含有信号肽的eYFP融合蛋白在细胞质壁分离后均能分泌到质外体空间。酵母菌信号肽分泌结果显示,分别携带这10个信号肽的酵母菌株可在以棉子糖为唯一碳源的培养基上生长,且与TTC发生显色反应。实时荧光定量结果表明,除了UV_6754,其余9个效应因子基因的表达模式不尽相同,其中UV_44、UV_1567、UV_3667、UV_4213、UV_4989、UV_5215和UV_8184的表达量在接种后显著升高。【结论】这10个稻曲病菌效应因子均含有分泌功能的信号肽,编码效应因子的基因在稻曲病菌侵染过程中具有不同的表达模式。该结果为深入研究以上稻曲病菌效应因子的功能奠定了基础。

关键词：水稻稻曲病菌效应因子信号肽

维普期刊数据库博看期刊

信号肽对O型口蹄疫病毒重组表位蛋白在CHO中表达及分泌的影响

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国兽医科学 2020年第3期50卷 276-282页

作者：孙振文邵军军常惠芸中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃兰州730046

构建融合不同信号肽的O型口蹄疫病毒重组表位蛋白真核表达载体,筛选不同的分泌型信号肽以提高O型口蹄疫病毒重组表位蛋白在中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cell,CHO)中的表达并使其分泌到CHO培养基中。通过PCR方法将10种不同... 详细信息

构建融合不同信号肽的O型口蹄疫病毒重组表位蛋白真核表达载体,筛选不同的分泌型信号肽以提高O型口蹄疫病毒重组表位蛋白在中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cell,CHO)中的表达并使其分泌到CHO培养基中。通过PCR方法将10种不同的分泌型信号肽与串联表位基因的5′端相连,分别构建了真核表达载体并转染哺乳动物细胞CHO,采用Western-blot检测CHO培养基中重组表位蛋白累积量,研究结果表明,O型口蹄疫病毒重组表位蛋白在CHO中成功分泌表达,不同的分泌型信号肽明显改变O型口蹄疫病毒重组表位蛋白在CHO培养基中的累积SCGB1D1 isoform信号肽介导的O型口蹄疫病毒重组表位蛋白表达量最高。综上所述,合适的分泌型信号肽促进O型口蹄疫病毒重组表位蛋白在CHO中的分泌。

关键词：表位蛋白质分泌口蹄疫病毒信号肽

信号肽在大肠杆菌分泌系统中的研究与应用进展

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国生物工程杂志 2021年第5期41卷 87-93页

作者：何若昱林福玉高向东刘金毅中国药科大学生命科学与技术学院南京210009 北京三元基因药业股份有限公司北京102600

大肠杆菌以其明显的优势成为表达重组蛋白常用的系统,但是大肠杆菌本身不具备细胞内形成二硫键的氧化条件和分子机制,而且高水平表达时常容易聚集形成包涵体,限制了其使用,改善这一缺点的重要方法是通过信号肽实现蛋白质的分泌表达。信... 详细信息

大肠杆菌以其明显的优势成为表达重组蛋白常用的系统,但是大肠杆菌本身不具备细胞内形成二硫键的氧化条件和分子机制,而且高水平表达时常容易聚集形成包涵体,限制了其使用,改善这一缺点的重要方法是通过信号肽实现蛋白质的分泌表达。信号肽一般存在于分泌蛋白的氨基端,能够引导蛋白质通过大肠杆菌中的Sec或/和Tat系统分泌至周质空间。简要概述了大肠杆菌中两种跨膜分泌系统和信号肽的结构,并结合近年来常用6种信号肽的研究与应用进展,阐述了信号肽在使用中存在的问题及改进措施。旨在为研究者合理选择信号肽、优化重组蛋白的表达提供更多可用的信息与策略。

关键词：信号肽大肠杆菌分泌系统

不同信号肽及其组合对果聚糖蔗糖酶异源表达的影响

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国生物工程杂志 2023年第5期43卷 37-44页

作者：王茂军色依德·斯马依蔡逸安李庆刚路福平李玉工业发酵微生物教育部重点实验室天津科技大学生物工程学院天津300457

为了实现果聚糖蔗糖酶在解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens 018(简称G3)中的高效表达,选择来源于不同芽孢杆菌的4个果聚糖蔗糖酶基因lsLich、lsAmy、lsSub和lsMega进行异源表达,并将课题组前期确定的对碱性蛋白酶酶活提升较高的... 详细信息

为了实现果聚糖蔗糖酶在解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens 018(简称G3)中的高效表达,选择来源于不同芽孢杆菌的4个果聚糖蔗糖酶基因lsLich、lsAmy、lsSub和lsMega进行异源表达,并将课题组前期确定的对碱性蛋白酶酶活提升较高的5种信号肽进行筛选和组合。其中来源于地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis RN-01的lsLich在重组菌株G3/pLY-2-lsLich中的酶活力最高,酶活力为62.73 U/mL。以LS-Lich作为目的蛋白筛选单信号肽和双信号肽,其中信号肽SP_(DacB)和SP_(AmyE)组合的重组菌株G3/pLY-2-SDA-ls酶活最高,胞外酶活达到125.76 U/mL,较重组菌G3/pLY-2-SD-ls和G3/pLY-2-SA-ls分别提高了31.3%和39.2%,较原始菌株提高了100.49%。该结果表明双信号肽较单信号肽有助于提高LS-Lich的分泌量,同时信号肽组合顺序不同也产生一定的差异。

关键词：信号肽果聚糖蔗糖酶解淀粉芽孢杆菌异源表达

信号肽优化对嵌合抗原受体（CAR）T细胞功能的影响研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

信号肽优化对嵌合抗原受体（CAR）T细胞功能的影响研究

作者：李帆武汉科技大学

学位级别：硕士

目的:信号肽是一段存在于前体蛋白N-端的短肽链,能够调节前体蛋白的折叠和转移,在蛋白质的分泌过程中扮演着极其重要的角色。近年来,靶向CD19的嵌合抗原受体(Chimeric Antigen Receptor,CAR)T细胞在白血病治疗中取得了重大突破,关于CAR... 详细信息

目的:信号肽是一段存在于前体蛋白N-端的短肽链,能够调节前体蛋白的折叠和转移,在蛋白质的分泌过程中扮演着极其重要的角色。近年来,靶向CD19的嵌合抗原受体(Chimeric Antigen Receptor,CAR)T细胞在白血病治疗中取得了重大突破,关于CAR结构的胞内域改造方面也有诸多研究,而对sc Fv的N端信号肽研究进展缓慢。该研究旨在探讨不同信号肽以及信号肽的氨基酸序列优化对CD19-CAR-T细胞的转染效率及细胞因子的分泌水平和其对CD19肿瘤细胞杀伤作用的影响。同时也探讨了不同信号肽对CD19-CAR-T细胞的分型、增殖和凋亡等功能的影响。方法:通过基因合成和分子克隆技术,构建含四种不同信号肽(SP1、SP2、SP3、SP4)的靶向CD19抗原的CAR载体,以及对信号肽SP4进行氨基酸序列改造的突变体载体(SP4K-CD19-CAR和SP4R-CD19-CAR载体)。进行慢病毒包装,将得到的慢病毒转染T细胞,利用流式细胞术检测细胞转染效率、细胞分型和凋亡,钙黄绿素释放法检测该细胞对靶细胞的杀伤作用,ELISA法检测细胞因子IFN-γ和TNF-α的分泌水平。结果:成功构建四种不同信号肽的重组慢病毒质粒,进行慢病毒包装后,将四种慢病毒转导T细胞,结果显示分别有20.9%、22.6%、31.5%、38.6%的T细胞表面能够表达CD19-CAR(分别命名为SP1-CD19、SP2-CD19、SP3-CD19和SP4-CD19细胞),进一步杀瘤实验证明,SP4-CD19细胞对CD19肿瘤细胞的杀伤作用显著高于SP1-CD19、SP2-CD19和SP3-CD19细胞(P信号肽的CAR-T细胞对CD19肿瘤细胞K562的杀伤作用无明显差异(P>0.05)。且结果显示不同信号肽对CAR-T细胞的分型、增殖活性以及细胞凋亡无显著影响(P>0.05)。最后再对筛选出的信号肽SP4进行定点突变,构建了两种突变体质粒(SP4K-CD19-CAR和SP4R-CD19-CAR),进行慢病毒包装转染T细胞后,结果显示三组慢病毒(SP4、SP4K和SP4R)感染的T细胞成功表达CD19-CAR的比例分别为21.2%、26.4%、30.9%,进一步杀瘤实验证明,SP4K-CD19和SP4R-CD19细胞对CD19肿瘤细胞的杀伤作用以及IFN-γ和TNF-α的分泌水平显著高于对照组SP4-CD19细胞(P信号肽对CAR-T细胞的分型、增殖活性以及细胞凋亡无显著影响。经SP4突变后的两个突变体(SP4K-CD19和SP4R-CD19)的转染效率及细胞因子的分泌水平和其对CD19肿瘤细胞的杀伤作用均显著高于SP4-CD19细胞,该研究成果为CAR-T细胞优化改造及其高效的临床应用奠定了科学基础。

关键词：信号肽嵌合抗原受体 CD19-CAR-T细胞体外杀瘤细胞因子

不同信号肽对嵌合抗原受体T细胞杀伤作用的影响研究

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

中国癌症杂志 2022年第2期32卷 142-151页

作者：李帆张琴星童祥文田高辉顾力行徐瑶武汉科技大学生命科学与健康学院生物医学研究院湖北武汉430081

背景与目的:信号肽(signal peptide,SP)是一段存在于前体蛋白N-端的短肽链,能够调节前体蛋白的折叠和转移,在蛋白质的分泌过程中扮演着极其重要的角色。近年来,靶向CD19的嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)T细胞在白血病治... 详细信息

背景与目的:信号肽(signal peptide,SP)是一段存在于前体蛋白N-端的短肽链,能够调节前体蛋白的折叠和转移,在蛋白质的分泌过程中扮演着极其重要的角色。近年来,靶向CD19的嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)T细胞在白血病治疗中取得了重大突破,关于CAR结构的胞内域改造方面也有诸多研究,而对单链可变片段(scFv)的N端SP研究进展缓慢。探讨4种不同SP的CD19-CAR在T细胞表面表达及对CD19+靶细胞的杀伤作用。方法:通过基因合成和分子克隆技术,构建含4种不同SP(SP1、SP2、SP3、SP4)的靶向CD19抗原的CAR载体,进行慢病毒包装,将得到的慢病毒转染T细胞,利用流式细胞术检测细胞转染效率,采用钙黄绿素释放法检测该细胞对靶细胞的杀伤作用,采用酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞因子IFN-γ和TNF-α的分泌水平。结果:成功构建4种不同SP的重组慢病毒载体,将4种慢病毒转导T细胞后,结果显示,分别有20.9%、22.6%、31.5%、38.6%的T细胞表面能够表达CD19-CAR(分别命名为SP1-CD19、SP2-CD19、SP3-CD19和SP4-CD19细胞),进一步杀瘤实验证明,SP4-CD19细胞对CD19+肿瘤细胞的杀伤作用显著高于SP1-CD19、SP2-CD19和SP3-CD19细胞(P0.05)。结论:SP4-CD19细胞的转染效率、细胞因子分泌水平及对CD19+肿瘤细胞的杀伤作用均显著高于SP1-CD19、SP2-CD19和SP3-CD19细胞,该研究成果为CAR-T优化改造及其高效的临床应用奠定了科学基础。

关键词：信号肽嵌合抗原受体靶向CD19的嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)T细胞体外杀瘤细胞因子

重组蛋白融合信号肽在大肠杆菌周质空间表达的研究进展

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

微生物学通报 2022年第2期49卷 794-806页

作者：王寅竹孙涛吴昊马江锋南京工业大学生物与制药工程学院材料化学工程国家重点实验室江苏南京211816 南京工业大学江苏先进生物与化学制造协同创新中心江苏南京211816

重组蛋白在大肠杆菌中表达时,往往面临着形成包涵体的问题,而重组蛋白若是分泌至周质空间则基本解决了这一问题,周质空间的周质蛋白不仅能帮助重组蛋白正确折叠还有利于二硫键的生成。信号肽是一段由15-30个氨基酸组成,被融合在重组蛋白... 详细信息

重组蛋白在大肠杆菌中表达时,往往面临着形成包涵体的问题,而重组蛋白若是分泌至周质空间则基本解决了这一问题,周质空间的周质蛋白不仅能帮助重组蛋白正确折叠还有利于二硫键的生成。信号肽是一段由15-30个氨基酸组成,被融合在重组蛋白N端的短肽,按照结构、功能的不同可以划分为N区、H区和C区,具有引导重组蛋白转运至细胞周质空间的作用。本文综述了信号肽的结构组成、作用机理和基本分泌途径,讨论了信号肽的高效转运和筛选方法,总结了在大肠杆菌中重组蛋白融合信号肽实现周质表达的新进展,并对未来高效信号肽选择方面的研究进行了探讨。

关键词：信号肽大肠杆菌周质空间分泌表达