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人era和人eraC端蛋白在大肠杆菌中的高表达

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第四军医大学学报 2001年第8期22卷 759-762页

作者：张俊杰吴元明纪宗玲陈南春陈苏民第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室陕西西安710033

目的　在大肠杆菌中的高表达人 era和人 era C端蛋白 .方法　 PCR扩增人 era基因 (h- era)的全长 c DNA和 h-era c DNA的 C端区域基因 . h- era c DNA克隆到 (His) 6融合表达载体 p RSET- C中 ,构建融合表达质粒并转化大肠杆菌BL 2 1(DE... 详细信息

目的　在大肠杆菌中的高表达人 era和人 era C端蛋白 .方法　 PCR扩增人 era基因 (h- era)的全长 c DNA和 h-era c DNA的 C端区域基因 . h- era c DNA克隆到 (His) 6融合表达载体 p RSET- C中 ,构建融合表达质粒并转化大肠杆菌BL 2 1(DE3) ,经 IPTG诱导表达 (His) 6 - h- era融合蛋白 ;h- erac DNA的 C端区域基因克隆到非融合表达载体 p DH中 PL 启动子下游 ,转化大肠杆菌 TAP10 6 ,42℃热诱导表达人 era C端蛋白 (h- era- C) . SDS- PAGE电泳、凝胶薄层扫描检测蛋白的表达 .结果　表达的 (His) 6 - h- era融合蛋白产物占全菌总蛋白的 80 % ;人 era C端蛋白占全菌总蛋白的 40 % .结论　人 era蛋白和 era C端蛋白在大肠杆菌中获得了高表达 .

关键词：人era 人era端蛋白大肠杆菌基因表达

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兔抗人era多克隆抗体的纯化

细胞与分子免疫学杂志 2001年第2期17卷 166-168页

作者：万亚坤张俊杰陈南春陈苏民第四军医大学生化与分子生物学教研室

目的纯化兔抗人era的多克隆抗体。方法在大肠杆菌中,表达重组MBPhera融合蛋白。表达产物先继以直链淀粉树脂亲和柱和Superose12凝胶柱过滤纯化。将纯化的MBPhera偶联于NHSactivatedSepharoseTM上,制备亲和层析柱,纯化兔抗人era多... 详细信息

目的纯化兔抗人era的多克隆抗体。方法在大肠杆菌中,表达重组MBPhera融合蛋白。表达产物先继以直链淀粉树脂亲和柱和Superose12凝胶柱过滤纯化。将纯化的MBPhera偶联于NHSactivatedSepharoseTM上,制备亲和层析柱,纯化兔抗人era多克隆抗体。结果①表达、纯化的MBPhera,相对分子质量Mr为78×103,其纯度为95%。②从抗血清中纯化获得可与MBPhera特异性结合的兔抗hera多克隆抗体。结论获得了特异性较好的纯化兔抗hera多克隆抗体。

关键词：人era 多克隆抗体纯化 era基因

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人era真核表达载体的构建

生物技术通讯 2002年第3期13卷 170-172页

作者：纪宗玲陈苏民刘继中吴元明路凡柴玉波李毅张俊杰第四军医大学生物化学与分子生物学教研室第四军医大学西京医院全军骨科研究所西安710032

era是一个独特的含有RNA结合KH结构域的G蛋白亚家族,哺乳类era新近被克隆,目前还没有关于其功能的研究报道。构建了带流感病毒血凝素9肽表位标签(HAtag)的野生型人era基因的真核表达载体,瞬时转染体外培养细胞CHO,Westernblot鉴定表明... 详细信息

era是一个独特的含有RNA结合KH结构域的G蛋白亚家族,哺乳类era新近被克隆,目前还没有关于其功能的研究报道。构建了带流感病毒血凝素9肽表位标签(HAtag)的野生型人era基因的真核表达载体,瞬时转染体外培养细胞CHO,Westernblot鉴定表明目的基因得到表达。为深入探讨人era基因的功能奠定了坚实的基础。

关键词：人era 真核表达载体构建基因表达 CHO细胞

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人era的细胞内定位

细胞与分子免疫学杂志 2001年第2期17卷 169-170,185页

作者：纪宗玲陈苏民陈南春张俊杰吴元明卢兹凡路凡第四军医大学生物化学和分子生物学教研室陕西西安710032

era 是大肠杆菌生存必需的 GTP酶〔1， 2〕，降低其表达或者破坏其 GTP酶活性，均可使细菌分裂周期停滞于染色体分隔之后、细胞分裂之前的双细胞期，因此认为 era是细胞分裂的关卡调控分子 (checkpoint)〔3， 4〕。

关键词：人era EGFP 原位免疫细胞化学细胞内定位基因表达

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兔抗人era抗血清的制备

细胞与分子免疫学杂志 2001年第1期17卷 73-75页

作者：张俊杰吴元明刘慧萍纪宗玲陈南春陈苏民第四军医大学生物化学与分子生物学教研室

目的在大肠杆菌中表达人ＥＲＡ蛋白（ｈ－ＥＲＡ）和ｈ－ＥＲＡＣ端结构域蛋白，并制备兔抗ｈ－ＥＲＡ抗血清。方法以ＰＣＲ扩增人ｅｒａ基因（ｈ－ｅｒａ）全长ｃＤＮＡ和ｈ－ＥＲＡＣ端的结构域基因，并分别克隆到（Ｈｉｓ）６融... 详细信息

目的在大肠杆菌中表达人ＥＲＡ蛋白（ｈ－ＥＲＡ）和ｈ－ＥＲＡＣ端结构域蛋白，并制备兔抗ｈ－ＥＲＡ抗血清。方法以ＰＣＲ扩增人ｅｒａ基因（ｈ－ｅｒａ）全长ｃＤＮＡ和ｈ－ＥＲＡＣ端的结构域基因，并分别克隆到（Ｈｉｓ）６融合表达载体ＰＲＳＥＴ－Ｃ和非融合表达载体ｐＤＨ中，诱导表达（Ｈｉｓ）６－ｈ－ＥＲＡ融合蛋白和ｈ－ＥＲＡＣ端结构域蛋白。用ｈ－ＥＲＡＣ端结构域蛋白免疫兔，制备兔抗ｈ－ＥＲＡ抗血清，并以Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ对免抗ｈ－ＥＲＡ抗血清进行鉴定。结果大肠杆菌中表达的ｈ－ＥＲＡＣ端结构域蛋白和（Ｈｉｓ）６－ｈ－ＥＲＡ融合蛋白，分别占菌体总蛋白的４０％和８０％。用兔抗血清可检出大肠杆茵中表达的（Ｈｉｓ）６－ｈ－ＥＲＡ融合蛋白。结论ｈ－ＥＲＡ和ｈ－ＥＲＡＣ端结构域蛋白在大肠杆菌中获得高效表达，并成功地制备了兔抗ｈ－ＥＲＡ抗血清。

关键词：人era 原核表达抗血清 era蛋白制备

重组人era蛋白的可溶性表达、纯化及生物学活性测定

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细胞与分子免疫学杂志 2008年第6期24卷 560-563页

作者：吴元明张晓楠邢小红张俊杰陈南春陈苏民第四军医大学DNA分型中心第四军医大学基础部生物化学教研室陕西西安710032

目的:为了得到可溶性表达的人era(hera)蛋白,并检测其生物学活性。方法:把人era的cDNA基因从pUC19质粒亚克隆入表达质粒pMAL-p2x中。pMAL-hera转化大肠杆菌TB1,用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达。结果:pMAL-hera载体表达的融... 详细信息

目的:为了得到可溶性表达的人era(hera)蛋白,并检测其生物学活性。方法:把人era的cDNA基因从pUC19质粒亚克隆入表达质粒pMAL-p2x中。pMAL-hera转化大肠杆菌TB1,用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达。结果:pMAL-hera载体表达的融合蛋白是以可溶状态存在,表达量占菌体总蛋白的23.9%。再利用直链淀粉亲和色谱柱对表达的融合蛋白进行纯化,接着用因子X将融合部分切除,但切除后的hera蛋白不稳定,随着时间的延长而被降解。活性测定结果表明人era蛋白能与GTP结合,并具有GTP酶的活性。结论:可溶性表达了人era蛋白,并用体外实验证实人era蛋白是一种G蛋白,这对人era基因的功能研究具有重要意义。

关键词：人era 可溶性表达生物活性测定