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白藜芦醇抗黑碳颗粒对人鼻黏膜上皮细胞毒性作用及其机制

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解剖学研究 2023年第6期45卷 535-540页

作者：许险艳李琴王姗姗李德水许昭俊泉州医学高等专科学校福建泉州362000

目的探讨黑碳颗粒(BC)对人鼻黏膜上皮细胞(hNECs)的毒性作用、毒性机制以及白藜芦醇的保护作用。方法先用不同浓度的黑碳(0、6.5、12.5、25.0、50.0、100.0μg/mL)刺激hNECs,观察BC对hNECs的毒性作用;其次,将h NECs随机分成对照组、B... 详细信息

目的探讨黑碳颗粒(BC)对人鼻黏膜上皮细胞(hNECs)的毒性作用、毒性机制以及白藜芦醇的保护作用。方法先用不同浓度的黑碳(0、6.5、12.5、25.0、50.0、100.0μg/mL)刺激hNECs,观察BC对hNECs的毒性作用;其次,将h NECs随机分成对照组、BC组、白藜芦醇组,BC组用半致死剂量的BC浓度刺激细胞,白藜芦醇组的浓度为50μmol/L,分别检测3组细胞的存活率,细胞内ROS、SOD和CAT活性,以及8-OHdG蛋白的表达,用彗星试验检测3组细胞DNA损伤的程度。结果 BC对hNECs有细胞毒性作用,并呈剂量依赖性,BC浓度为50μg/mL时细胞存活率为(56.67±4.31)%,以此作为后续实验BC组的刺激浓度。与对照组相比,BC组细胞ROS活性升高、SOD和CAT活性下降,8-OHdG蛋白的表达上调,彗星实验中的各项指标尾长、彗星长、尾距显示DNA损伤,差异均有统计学意义(P鼻黏膜上皮细胞产生保护作用。

关键词：人鼻黏膜上皮细胞白藜芦醇黑碳颗粒氧化应激

白细胞介素13通过H3K4me3修饰调节人鼻黏膜上皮细胞分化的研究

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白细胞介素13通过H3K4me3修饰调节人鼻黏膜上皮细胞分化的研究

作者：于蕾青岛大学

学位级别：硕士

第一部分H3K4me3在慢性鼻窦炎伴鼻息肉中的表达及临床意义目的:对蛋白H3K4me3在慢性鼻窦炎伴鼻息肉组织及正常下鼻甲组织中表达水平进行比较,以探究其在鼻息肉发病过程中的临床意义。方法:收集2016年3月到2016年12月我院诊治慢性鼻-鼻... 详细信息

第一部分H3K4me3在慢性鼻窦炎伴鼻息肉中的表达及临床意义目的:对蛋白H3K4me3在慢性鼻窦炎伴鼻息肉组织及正常下鼻甲组织中表达水平进行比较,以探究其在鼻息肉发病过程中的临床意义。方法:收集2016年3月到2016年12月我院诊治慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉患者11例,用Lund-Kennedy方法评估鼻息肉患者病情程度,以鼻息肉患者的鼻息肉组织为实验组,以同一患者正常的下鼻甲黏膜组织为对照组。对11例鼻息肉组织及正常鼻黏膜组织分别进行Western blot检测H3K4me3蛋白的表达水平;用RT-PCR检测两组组织中FOXJ1 m RNA、CLCA1 m RNA、DNAI2 m RNA、MUC5a m RNA m RNA的表达量,用△CT法进行相对定量分析,△CT与m RNA的表达量成反比。本研究用Prime 6.0软件软件对数据进行分析。结果:1.Western blot结果显示鼻息肉组织中蛋白H3K4me3表达量明显升高,息肉组织中蛋白水平灰度值比的均数±标准差(0.62±0.07);对照组中下鼻甲黏膜组织中蛋白H3K4me3表达量明显降低,黏膜组织中蛋白水平灰度值比的均数±标准差(0.31±0.07),两者差异有统计学意义(t=2.18,P黏膜组织,MUC5am RNA和CLCA1m RNA的△CT值明显低于正常下鼻甲组织黏膜组,并且各组之间差异有统计学意义(P黏膜组织表达降低,而病变鼻息肉组织中的MUC5am RNA和CLCA1m RNA较正常下鼻甲黏膜组织表达增高,且均有统计学意义。结论:H3K4me3蛋白可能参与了慢性鼻窦炎伴鼻息肉炎症反应的发生和维持过程,组蛋白H3第4位赖氨酸三甲基化(H3K4me3)有可能作为治疗慢性鼻窦炎伴鼻息肉的新靶点。第二部分IL-13对人鼻黏膜上皮细胞H3K4me3表达的影响及意义目的:在体外培养的人鼻腔黏膜上皮细胞的模型上,探索白细胞介素13(interleukin-13,IL-13)对上皮细胞分化的影响以及H3K4me3修饰和组蛋白甲基化特异性转移酶(mixed-lineage leukemia 1,MLL1)在IL-13调控细胞分化中发挥的作用,为治疗鼻腔炎性疾病提供新的切入点。方法:体外分离培养人鼻腔黏膜上皮细胞,用不同梯度浓度的IL-13处理后,以β-tubulin为对照,western blot检测蛋白H3K4me3的表达水平,选取合适的IL-13(10ng/ml)的浓度进行下一步实验。经IL-13处理后的人鼻腔黏膜上皮细胞中,用RT-PCR检测鼻黏膜上皮细胞分化关键基因FOXJ1、DNAI2、CLCA1和MUC5a以及H3K4me3相关的组蛋白甲基化相关基因MLL1、MLL2、MLL3、MLL4、MLL5、SETD1A和JARID1B的表达;以及western blot检测H3K4me3的特异性甲基转移酶MLL1蛋白的表达水平。Knockdown MLL1后,通过western blot和RT-PCR检测knockdown MLL1的效果;随后利用RT-PCR重复检测经knockdown MLL1处理后的鼻黏膜上皮细胞分化关键基因FOXJ1、DNAI2、CLCA1和MUC5a的表达与knockdown处理之前表达是否有差异性结果:与对照组相比,经过IL-13处理后,处理后的鼻黏膜上皮细胞中蛋白H3K4me3的表达水平显著升高,基因FOXJ1和DNAI2的m RNA呈低表达(P鼻黏膜上皮细胞相比,knockdown MLL1处理后,蛋白H3K4me3和MLL1表达水平下降,MLL1的m RNA呈低表达,RT-PCR结果显示FOXJ1和DNAI2的m RNA呈高表达(P<0.05),而CLCA1和MUC5a的m RNA呈低表达(P<0.05)。结论:从蛋白水平和基因水平检测H3K4me3和MLL1结果一致,均发现IL-13刺激组中H3K4me3和MLL1表达增高,存在H3K4me3修饰升高。

关键词：鼻息肉 H3K4me3 白细胞介素13 人鼻黏膜上皮细胞 H3K4me3modification MLL1

脂多糖对人鼻黏膜上皮细胞人β防御素2诱导表达的影响

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中国眼耳鼻喉科杂志 2017年第4期17卷 245-248页

作者：胡秀娟刘海兵贺广湘成都大学附属医院耳鼻咽喉头颈外科成都610081 中南大学湘雅三医院耳鼻咽喉头颈外科长沙410013

目的观察脂多糖(LPS)诱导人鼻黏膜上皮细胞人β防御素2(h BD-2)表达的影响。方法用LPS刺激人鼻黏膜上皮细胞,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测h BD-2 mRNA的表达,免疫细胞化学检测h BD-2蛋白的表达。结果 LPS刺激2 h后人鼻黏膜上皮细胞可... 详细信息

目的观察脂多糖(LPS)诱导人鼻黏膜上皮细胞人β防御素2(h BD-2)表达的影响。方法用LPS刺激人鼻黏膜上皮细胞,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测h BD-2 mRNA的表达,免疫细胞化学检测h BD-2蛋白的表达。结果 LPS刺激2 h后人鼻黏膜上皮细胞可见h BD-2 mRNA的表达,并呈剂量和时间依赖性;刺激4 h后人鼻黏膜上皮细胞胞质中可见h BD-2蛋白的表达。结论一定剂量的LPS可诱导人鼻黏膜上皮细胞h BD-2的表达,这种表达具有一定的剂量和时间依赖性。

关键词：人鼻黏膜上皮细胞人β防御素2 脂多糖

呼吸道合胞病毒感染对慢性鼻窦炎伴鼻息肉上皮屏障功能的影响

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中国耳鼻咽喉头颈外科 2024年第1期31卷 31-35页

作者：康子卿杨婧兴王向东蔡超首都医科大学附属北京佑安医院耳鼻咽喉头颈外科北京100069 首都医科大学附属北京同仁医院耳鼻咽喉头颈外科北京市耳鼻咽喉科研究所耳鼻咽喉头颈科学教育部重点实验室(首都医科大学)鼻病研究北京市重点实验室北京100730

目的为探索呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)感染对慢性鼻窦炎伴鼻息肉(CRSwNP)和对照黏膜来源的人鼻黏膜上皮细胞(human nasal epithelial cells,hNECs)物理屏障关键分子的影响。方法不同感染复数(multiplicity of infection,MOI)(0.1和0.3)的RSV分别感染鼻息肉(n=21)和对照黏膜(n=9)的hNECs 24 h和48 h后,提取总RNA,逆转录成cDNA后,采用实时荧光定量PCR检测ZO-1、ZO-2、Claudin-1、Claudin-4、Occludin、E-cadherin和N-cadherin的基因表达变化。结果RSV感染hNECs后,ZO-1、ZO-2、Claudin-1、Claudin-4、Occludin、E-cadherin和N-cadherin的基因表达水平均下降,但只在鼻息肉来源的hNECs中存在统计学差异(P细胞型CRSwNP(eosinophilic CRSwNP,ECRSwNP)与非嗜酸性粒细胞型CRSwNP(nonECRSwNP)的hNECs相比,无显著差异。结论RSV感染可破坏鼻黏膜上皮屏障,与对照组相比CRSwNP组受RSV感染影响更重,且ECRSwNP组与nonECRSwNP组无显著差异。

关键词：鼻窦炎鼻息肉呼吸道合胞病毒上皮细胞鼻粘膜紧密连接部人鼻黏膜上皮细胞

麻黄细辛附子汤对尘螨变应原Der p1诱导的鼻黏膜上皮细胞屏障损伤的影响

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中国中医药信息杂志 2023年第10期30卷 101-107页

作者：倪钰莹范淑月崔颖高婧罗再奕刘敏北京中医药大学北京100029

目的基于RhoA/ROCK信号通路探讨麻黄细辛附子汤及麻黄对尘螨变应原Der p1诱导的人鼻黏膜上皮细胞(HNEpC)屏障损伤的影响及作用机制。方法体外培养HNEpC,将细胞分为对照组、模型组、麻黄组、抑制剂组及麻黄细辛附子汤低、中、高剂量组。... 详细信息

目的基于RhoA/ROCK信号通路探讨麻黄细辛附子汤及麻黄对尘螨变应原Der p1诱导的人鼻黏膜上皮细胞(HNEpC)屏障损伤的影响及作用机制。方法体外培养HNEpC,将细胞分为对照组、模型组、麻黄组、抑制剂组及麻黄细辛附子汤低、中、高剂量组。电阻仪检测细胞跨膜电阻,酶标仪检测FITCDextran通透性,倒置显微镜观察细胞形态,Western blot检测紧密连接蛋白咬合蛋白(Occludin)、闭合蛋白1(Claudin-1)及通路蛋白RhoA、ROCK1表达,免疫荧光染色检测肌动蛋白(F-actin)表达。结果与对照组比较,模型组细胞间隙增大,出现环形损伤,标准化跨膜电阻显著降低(P细胞排列紧密,环形损伤被修复,标准化跨膜电阻显著升高(P细胞F-actin蛋白表达显著降低(P鼻黏膜通透性,修复Der p1诱导的HNEpC屏障损伤。

关键词：变应性鼻炎麻黄细辛附子汤屏障功能 RhoA/ROCK信号通路人鼻黏膜上皮细胞

IL-6通过STAT3、YAP1通路蛋白对慢性鼻窦炎鼻黏膜上皮细胞FOXJ1、DNAI2蛋白表达的影响

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IL-6通过STAT3、YAP1通路蛋白对慢性鼻窦炎鼻黏膜上皮细胞FOXJ1、...

作者：钟艺杰南方医科大学

学位级别：硕士

研究背景和研究目的慢性鼻窦炎(chronic rhinosinusitis,CRS),在上呼吸道炎性疾病中十分常见,也为世界医疗卫生系统带来巨大的经济负担。目前,CRS的发病机制仍未明确,普遍认为是一种多因素所致的以鼻腔鼻窦黏膜上皮功能障碍为主要特点... 详细信息

研究背景和研究目的慢性鼻窦炎(chronic rhinosinusitis,CRS),在上呼吸道炎性疾病中十分常见,也为世界医疗卫生系统带来巨大的经济负担。目前,CRS的发病机制仍未明确,普遍认为是一种多因素所致的以鼻腔鼻窦黏膜上皮功能障碍为主要特点的慢性炎症性疾病。白细胞介素6(IL-6)是机体重要的促炎细胞因子,不仅可以通过诱导急性期反应蛋白的表达介导炎症反应,也能够通过影响JAK/STAT3、gp130/SRC/YAP1等信号转导通路在细胞的增殖和分化中发挥重要作用[1,2]。已知IL-6能诱导人支气管上皮基底细胞向纤毛细胞分化,促进气道纤毛细胞修复,且在鼻息肉细胞中高表达[3],因此,IL-6在CRS患者鼻黏膜上皮纤毛细胞的损伤修复中起重要作用。本研究旨在探究IL-6在CRS患者鼻黏膜上皮细胞中对纤毛蛋白表达的影响,通过检测IL-6相关通路蛋白p-STAT3、YAP1以及纤毛蛋白FOXJ1、DNAI2的表达情况,从而初步了解IL-6在鼻黏膜上皮细胞中对于FOXJ1和DNAI2的调控作用。研究方法本研究取CRS患者的下鼻甲(inferiorturbinate,IT)黏膜进行体外原代细胞培养(n=3)。通过免疫荧光鉴定细胞的性质和纯度。利用不同浓度IL-6进行处理后通过Western blot分别检测p-STAT3、YAP1、FOXJ1和DNAI2的蛋白表达情况。通过添加STAT3抑制剂(Stattic,20 μ g/ml)或YAP抑制剂(Verteporfin,5 μmol/L)的培养基对人鼻黏膜上皮细胞进行培养,再次利用IL-6进行处理,通过Western blot分别检测p-STAT3、YAP1、FOXJ1和DNAI2的蛋白表达情况,所有实验结果数据应用Prism软件进行统计学分析,采用t检验,P鼻黏膜上皮细胞经CK5染色鉴定为上皮源性细胞,且纯度较高。2.与未添加IL-6的对照组相比,IL-6处理后的鼻黏膜上皮细胞中p-STAT3、YAP1、FOXJ1和DNAI2的蛋白表达均显著上调。3.与仅用IL-6处理的细胞相比,同时使用STAT3抑制剂和IL-6处理后的细胞p-STAT3和FOXJ1的蛋白表达被抑制,而对YAP1与DNAI2的蛋白表达无显著影响。使用YAP抑制剂和IL-6处理的组别其YAP1、DNAI2和FOXJ1的蛋白表达下调,而p-STAT3的蛋白表达无明显改变。结论IL-6可以使鼻黏膜上皮细胞中p-STAT3、YAP1、FOXJ1和DNAI2蛋白表达升高。其中IL-6对FOXJ1的上调作用能够被STAT3抑制剂和YAP抑制剂所抑制,而IL-6对DNAI2的上调作用则仅能被YAP抑制剂所抑制。表明在鼻黏膜上皮细胞中IL-6可能通过p-STAT3调控FOXJ1表达,同时也通过YAP1对DNAI2和FOXJ1的表达进行调控。

关键词：慢性鼻窦炎 IL-6 STAT3 YAP1 FOXJ1 DNAI2 人鼻黏膜上皮细胞

微小RNA-155-5p通过靶向组蛋白去乙酰化酶1调控鼻黏膜上皮细胞上皮间质转化的实验研究

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实用临床医药杂志 2022年第21期26卷 14-19页

作者：王忠巧高妍司峰志新疆医科大学第二附属医院耳鼻喉科新疆乌鲁木齐830000

目的观察微小RNA(miR)-155-5p对人鼻黏膜上皮细胞(HNEPC)上皮间质转化(EMT)的影响及其与组蛋白去乙酰化酶1(SIRT1)的靶向关系。方法选取2019年5月—2021年12月行鼻内镜手术治疗的患者50例为研究对象。根据是否合并鼻息肉分为慢性鼻窦... 详细信息

目的观察微小RNA(miR)-155-5p对人鼻黏膜上皮细胞(HNEPC)上皮间质转化(EMT)的影响及其与组蛋白去乙酰化酶1(SIRT1)的靶向关系。方法选取2019年5月—2021年12月行鼻内镜手术治疗的患者50例为研究对象。根据是否合并鼻息肉分为慢性鼻窦炎伴鼻息肉(CRSwNP)组36例和慢性鼻窦炎不伴鼻息肉(CRSsNP)组14例,另选取同期行鼻中隔偏曲手术治疗的20例鼻中隔偏曲患者为对照组。将miR-155-5p mimics、miR-155-5p inhibitor、miR-NC及Vector质粒转染至细胞,分为miR-155-5p组、miR-155-5p inhibitor组、miR-NC组和Vector组。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测细胞、组织miR-155-5p表达水平;Western blot、免疫荧光检测组织、细胞SIRT1、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤黏蛋白(Fibronectin)表达;生物信息学工具、荧光素酶报告实验分析miR-155-5p与SIRT1的靶向关系。结果 CRSwNP组鼻腔黏膜组织miR-155-5p表达水平高于CRSsNP组及对照组,CRSsNP组鼻腔黏膜组织miR-155-5p表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P黏膜组织E-cadherin、SIRT1表达水平低于CRSsNP组及对照组,CRSsNP组鼻腔黏膜组织E-cadherin、SIRT1表达水平低于对照组,差异有统计学意义(P黏膜组织Vimentin、α-SMA、Fibronectin表达水平高于CRSsNP组及对照组,CRSsNP组鼻腔黏膜组织Vimentin、α-SMA、Fibronectin表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P细胞EMT,沉默miR-155-5p抑制了HNEPC细胞EMT。miR-155-5p负性靶向调控SIRT1。结论 miR-155-5p、EMT相关标记物在CRSwNP中表达升高,上调miR-155-5p可通过负性靶向调控SIRT1促进HNEPC的EMT过程。

关键词：微小RNA-155-5p 组蛋白去乙酰化酶1 人鼻黏膜上皮细胞上皮间质转化

人参皂苷Rg1对LPS诱导的人鼻黏膜上皮细胞凋亡及黏蛋白分泌的影响

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现代医学 2022年第1期50卷 15-22页

作者：王明香张绍芳陈薇黄凌峰郴州市第一人民医院小儿耳鼻喉科湖南郴州423000

目的:探讨人参皂苷Rg1(ginsenoside Rg1,GRg1)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导人的鼻黏膜上皮细胞中糖黏蛋白5AC(MUC5AC)表达的影响,并阐明其可能的作用机制。方法:采用不同浓度LPS或GRg1处理人鼻黏膜上皮细胞HNEpC,CCK-8法检测... 详细信息

目的:探讨人参皂苷Rg1(ginsenoside Rg1,GRg1)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导人的鼻黏膜上皮细胞中糖黏蛋白5AC(MUC5AC)表达的影响,并阐明其可能的作用机制。方法:采用不同浓度LPS或GRg1处理人鼻黏膜上皮细胞HNEpC,CCK-8法检测细胞增殖活性,筛选LPS和GRg1干预浓度。采用400 ng·ml^(-1)LPS或40μmol·L^(-1)GRg1分别或同时处理HNEpC细胞,将细胞分为空白对照组(Blank组)、LPS组、LPS+GRg1组、LPS+3-MA和LPS+GRg1+3-MA组。采用ELISA法检测各组细胞上清液中MUC5AC含量;qRT-PCR检测各组细胞中MUC5AC mRNA表达水平;Annexin V/PI双染色法检测各组细胞凋亡情况;单丹磺酰尸胺(monodansylcadaverin,MDC)染色检测细胞自噬囊泡聚集情况;透射电镜观察细胞自噬体形成情况;Western blot检测各组细胞中MUC5AC、Beclin 1、LC3Ⅰ和LC3Ⅱ蛋白表达水平。结果:与Blank组比较,LPS组细胞中MUC5AC mRNA和蛋白表达水平以及上清液中MUC5AC含量均显著上升(P细胞凋亡率升高(P细胞自噬水平增加,自噬相关蛋白Beclin 1表达水平和LC3Ⅱ/Ⅰ值均显著升高(P细胞中MUC5AC mRNA和蛋白表达水平以及上清液中MUC5AC含量均显著下降(P细胞凋亡率降低(P细胞自噬水平降低,自噬相关蛋白Beclin 1表达水平和LC3Ⅱ/Ⅰ值均显著降低(P细胞以上各项指标均无显著性变化(P>0.05)。结论:人参皂苷Rg1可抑制LPS诱导的人鼻黏膜上皮细胞MUC5AC高表达,并同时抑制细胞凋亡,其机制可能与抑制细胞自噬有关。

关键词：人参皂苷Rg1 脂多糖人鼻黏膜上皮细胞糖黏蛋白5AC 细胞凋亡

微小RNA-142-3p靶向肿瘤坏死因子-α对脂多糖诱导的人鼻黏膜上皮细胞炎症反应的影响

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实用临床医药杂志 2023年第7期27卷 30-34页

作者：司峰志周旭新疆医科大学第二附属医院耳鼻喉科新疆乌鲁木齐830000

目的探讨微小RNA(miR)-142-3p对脂多糖(LPS)诱导的人鼻黏膜上皮细胞(HNEPC)炎症反应的影响及其与TNF-α的靶向关系。方法选取HNEPC为研究对象,使用LPS诱导建立炎症反应模型。将miR-142-3p上调、miR-142-3p下调、空质粒转染至细胞,分为... 详细信息

目的探讨微小RNA(miR)-142-3p对脂多糖(LPS)诱导的人鼻黏膜上皮细胞(HNEPC)炎症反应的影响及其与TNF-α的靶向关系。方法选取HNEPC为研究对象,使用LPS诱导建立炎症反应模型。将miR-142-3p上调、miR-142-3p下调、空质粒转染至细胞,分为对照组、LPS组、miR-142-3p上调组、miR-142-3p下调组、空质粒组;将TNF-α下调、下调对照质粒分别与miR-142-3p上调质粒共同转染至细胞,记为miR-142-3p上调+TNF-α下调组、空质粒+TNF-α下调组、miR-142-3p上调组和空质粒组。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测细胞增殖能力;采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-142-3p和白细胞介素(IL)-6、IL-10、干扰素γ(IFN-γ)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA水平;采用酶联免疫吸附试验检测细胞上清液中IL-6、IL-10、IFN-γ、TNF-α含量;通过TargetScan网站、荧光素酶报告实验分析miR-142-3p与TNF-α的靶向关系。结果LPS组细胞增殖能力高于对照组,miR-142-3p上调组细胞增殖能力高于空质粒组,miR-142-3p下调组细胞增殖能力低于空质粒组,差异有统计学意义(P细胞IL-6、IL-10、IFN-γ及TNF-α蛋白及其mRNA表达水平高于对照组,miR-142-3p上调组细胞相关炎性因子表达水平高于空质粒组,miR-142-3p下调组细胞相关炎性因子表达水平低于空质粒组,差异有统计学意义(P细胞IL-6、IL-10、IFN-γ及TNF-αmRNA及细胞上清液中蛋白表达水平低于下调对照组,差异有统计学意义(P鼻黏膜组织中高表达,过表达miR-142-3p可促进LPS诱导HNEPC炎性反应,可能与上调TNF-α基因表达有关。

关键词：微小RNA-142-3p 肿瘤坏死因子-α 脂多糖人鼻黏膜上皮细胞炎症反应