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人脂肪间充质干细胞来源的外泌体对非小细胞肺癌细胞转移的影响

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人脂肪间充质干细胞来源的外泌体对非小细胞肺癌细胞转移的影响

作者：刘冬雪河北大学

学位级别：硕士

背景:间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)是一种成体多功能干细胞。由于MSCs的分化可塑性、强大的体外扩展能力和免疫特权已被广泛应用于细胞再生和组织修复领域,被认为是各种器官或组织再生的细胞治疗策略。间充质干细胞来源... 详细信息

背景:间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)是一种成体多功能干细胞。由于MSCs的分化可塑性、强大的体外扩展能力和免疫特权已被广泛应用于细胞再生和组织修复领域,被认为是各种器官或组织再生的细胞治疗策略。间充质干细胞来源的外泌体(Exosomes derived from mesenchymal stem cells,MSCs-Exos)作为一种微粒子免疫载体分布于全身多种组织,具有和MSCs相同的生物活性,已被应用于多种临床研究中。MSCs在癌症中的研究显示,MSCs可迁移至肿瘤微环境中,通过旁分泌作用发挥致瘤或抗肿瘤的活性,与肿瘤的发展和转移密切相关。肺癌是世界上发病率和死亡率最高的恶性肿瘤,其中非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer,NSCLC)占比80%以上。因此本研究旨在探究肺癌微环境中MSCs-Exos对NSCLC细胞转移的影响及作用机制,为研究人员可以更深刻地理解MSCs和肿瘤及微环境之间的相互联系提供理论依据,具有重要的指导意义。方法:本研究采用人脂肪间充质干细胞(Human adipose-derived stem cells,h ADSCs)和A549、H1299两种NSCLC细胞为研究对象,以浓度为100μg/m L的人脂肪间充质干细胞来源的外泌体(Exosomes derived from human adipose-derived stem cells,h ADSCs-Exos)处理NSCLC细胞来模拟体内肺癌微环境。研究内容包括以下四个方面:(1)探究h ADSCs以及h ADSCs-Exos对NSCLC细胞上皮间质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响,采用q RT-PCR、Western Blot实验检测NSCLC细胞内EMT相关因子的表达。(2)探究肺癌微环境是否可以提供激活CXCL12/CXCR4信号轴的条件,采用q RT-PCR实验检测CXCR4和CXCL12的基因表达水平。(3)探究h ADSCs-Exos是否通过CXCL12/CXCR4信号轴影响NSCLC细胞的活力、迁移和侵袭能力,采用MTT实验、细胞划痕实验和Transwell实验检测NSCLC细胞的活力、迁移和侵袭能力。(4)探究h ADSCs-Exos在NSCLC中发挥作用的潜在机制,运用Western Blot实验检测AMPK/m TOR信号通路蛋白的表达情况。结果:(1)h ADSCs和h ADSCs-Exos都可以促进NSCLC细胞发生EMT。(2)在肺癌微环境中CXCR4和CXCL12的基因表达水平显著增加。(3)h ADSCs-Exos可以增强NSCLC细胞活力、迁移和侵袭能力;加入CXCR4的抑制剂AMD3100后,以上细胞功能的变化被抵消。(4)h ADSCs-Exos处理A549细胞后,p-AMPKɑ表达量减少,p-m TOR表达量增加,促进m TOR信号通路的激活,加入CXCR4抑制剂AMD3100后,p-AMPKɑ的表达有增加的趋势,p-m TOR表达量显著降低。结论:本实验发现h ADSCs和h ADSCs-Exos都可以促进NSCLC细胞发生EMT,且h ADSCs-Exos可以通过CXCL12/CXCR4信号轴调节AMPK/m TOR信号通路参与NSCLC细胞的进展。本研究有力地证明了h ADSCs和h ADSCs-Exos对NSCLC细胞转移的促进作用,为深入探究MSCs与NSCLC及其微环境之间的相互联系提供了理论依据和指导作用。在将MSCs应用于临床之前,检查MSCs是否具有潜在的致癌性至关重要。

关键词：人脂肪间充质干细胞外泌体非小细胞肺癌上皮间质转化 CXCR4

人脂肪间充质干细胞尾静脉移植治疗大鼠急性肝衰竭

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中国组织工程研究 2019年第9期23卷 1416-1421页

作者：张德国谭雪莹唐楠黄飞史光军青岛大学附属青岛市市立医院肝胆外科山东省青岛市266000

背景:间充质干细胞对肝衰竭大鼠的肝脏具有保护及修复作用,但具体机制尚未完全明确。目的:观察人脂肪间充质干细胞尾静脉注射对急性肝衰竭大鼠肝脏损伤的保护作用,并探讨其可能的机制。方法:将36只SD大鼠(购自青岛市大任富成畜牧有限公... 详细信息

背景:间充质干细胞对肝衰竭大鼠的肝脏具有保护及修复作用,但具体机制尚未完全明确。目的:观察人脂肪间充质干细胞尾静脉注射对急性肝衰竭大鼠肝脏损伤的保护作用,并探讨其可能的机制。方法:将36只SD大鼠(购自青岛市大任富成畜牧有限公司)随机等分为对照组、模型组和移植组。模型组和移植组大鼠通过腹腔注射D-氨基半乳糖建立急性肝衰竭模型。造模1 d后,移植组注射人脂肪间充质干细胞悬液,模型组注射等量生理盐水。细胞移植1 d和3 d,检测血清中丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、总胆红素水平。细胞移植3 d,检测血清中肿瘤坏死因子α、白细胞介素6、白细胞介素10水平;苏木精-伊红染色观察肝脏病理形态学变化;Western blot检测肝组织中糖原合成酶激酶3β蛋白的表达。结果与结论:(1)与模型组相比,移植组血清中丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、总胆红素、肿瘤坏死因子α、白细胞介素6和白细胞介素10水平降低(P人脂肪间充质干细胞可以减轻急性肝衰竭大鼠肝脏炎症反应和病理损伤,改善肝脏功能,其机制可能与抑制糖原合成酶激酶3β活性有关。

关键词：肝功能衰竭人脂肪间充质干细胞脂肪间充质干细胞移植血清肿瘤坏死因子α 糖原合成酶激酶3β 国家自然科学基金脂肪组织间质干细胞移植肝功能衰竭,急性糖原合成酶激酶3 组织工程

人脂肪间充质干细胞对异种小鼠间皮肤移植的免疫调节作用

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中国组织工程研究 2021年第1期25卷 73-77页

作者：华红解童玲郝贵亮青岛市中医医院(市海慈医院)检验科山东省青岛市266000 青岛市妇女儿童医院呼吸科山东省青岛市266000 青岛市妇女儿童医院检验科山东省青岛市266000

背景:皮肤移植是治疗大面积烧烫伤最有效的方法之一,如何有效抑制异体皮肤移植后的免疫排斥反应,是目前亟待解决的问题。目的:探讨人脂肪间充质干细胞对异种小鼠间皮肤移植免疫调节作用的影响。方法:取抽脂减肥术后人脂肪组织分离出人... 详细信息

背景:皮肤移植是治疗大面积烧烫伤最有效的方法之一,如何有效抑制异体皮肤移植后的免疫排斥反应,是目前亟待解决的问题。目的:探讨人脂肪间充质干细胞对异种小鼠间皮肤移植免疫调节作用的影响。方法:取抽脂减肥术后人脂肪组织分离出人脂肪间充质干细胞并培养至第3代,将60只2-4 d龄ICR小鼠随机分为4组,取其皮肤移植至C57BL/6小鼠背部建立皮肤移植免疫排斥模型,术后30 min内通过尾静脉将PBS(PBS组)和5×10^4,10×10^4,20×10^4个人脂肪间充质干细胞(脂肪间充质干细胞低、中、高剂量组)注射至受体小鼠体内,记录皮肤存活时间;术后第7天每组随机取5只小鼠,分离出脾脏及血清,采用RT-PCR及ELISA法检测白细胞介素10、肿瘤坏死因子α、干扰素γ水平,取移植部位皮肤制作病理切片观察淋巴细胞浸润情况。结果与结论:①与PBS组比较,脂肪间充质干细胞低剂量组皮肤存活时间延长但差异无显著性意义(P>0.05);与PBS组及脂肪间充质干细胞低剂量组比较,脂肪间充质干细胞中、高剂量组皮肤存活时间均延长(P0.05);②与PBS组比较,脂肪间充质干细胞低、中、高剂量组脾脏中肿瘤坏死因子α和干扰素γ的相对表达量均明显降低(P脂肪间充质干细胞低、中、高剂量组血清中肿瘤坏死因子α和干扰素γ水平均降低(P脂肪间充质干细胞中、高剂量组白细胞介素10水平升高(P人脂肪间充质干细胞可以明显延长异种小鼠间移植皮肤的存活时间,与其调节受体小鼠体内相关免疫因子的表达有关。

关键词：人脂肪间充质干细胞异种 ICR小鼠 C57BL/6小鼠皮肤移植免疫排斥

人脂肪间充质干细胞移植结合跑台训练对脊髓损伤大鼠运动功能的影响及机制

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中国康复医学杂志 2014年第6期29卷 504-510页

作者：张鑫陈银海南方医科大学珠江医院康复医学科广州510282 南方医科大学珠江医院门诊部

目的:探讨人脂肪间充质干细胞(hADSCs)结合跑台训练对脊髓损伤(SCI)大鼠运动功能的影响。方法:成年雄性SD大鼠60只,采用改良Allen打击法制作T10不完全SCI模型。术后随机分为损伤组(模型组,未行处理)、细胞移植组(细胞组,行细胞移植)、... 详细信息

目的:探讨人脂肪间充质干细胞(hADSCs)结合跑台训练对脊髓损伤(SCI)大鼠运动功能的影响。方法:成年雄性SD大鼠60只,采用改良Allen打击法制作T10不完全SCI模型。术后随机分为损伤组(模型组,未行处理)、细胞移植组(细胞组,行细胞移植)、跑台训练组(训练组,行跑台训练)和跑台训练结合细胞移植组(联合组,行跑台训练及细胞移植)。术前及术后采用BBB评分和Tarlov评分行运动功能评定,术后1、2、4周取脊髓行免疫荧光染色检测细胞存活,炎症反应相关细胞(ED1阳性巨噬细胞),胶质瘢痕[胶质纤维酸性蛋白,GFAP及神经丝蛋白(NF-200),5-羟色胺(5-HT)]。结果:治疗组行为学评分及荧光定量检测均优于模型组(P细胞组间无明显区别(P>0.05)。结论:hADSCs移植联合跑台训练对不完全性SCI大鼠运动功能恢复具有协同功效,治疗机制可能与进一步减轻伤后炎症反应,减少损伤面积,促进轴突再生有关。

关键词：脊髓损伤人脂肪间充质干细胞跑台训练运动功能脊髓可塑性

人脂肪间充质干细胞向胰岛素分泌细胞分化体系的建立和优化及miR-375过表达对分化的影响

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人脂肪间充质干细胞向胰岛素分泌细胞分化体系的建立和优化及miR-...

作者：李夏伟内蒙古大学

学位级别：硕士

糖尿病是一种常见的严重代谢性疾病,而胰岛移植是目前效果最好的治疗方法,但是胰岛来源匮乏严重制约了该疗法的使用。通过定向诱导或基因工程的方法可以使非胰β细胞具有胰岛素分泌功能,从而代替胰β细胞用于糖尿病的细胞治疗,为糖尿病... 详细信息

糖尿病是一种常见的严重代谢性疾病,而胰岛移植是目前效果最好的治疗方法,但是胰岛来源匮乏严重制约了该疗法的使用。通过定向诱导或基因工程的方法可以使非胰β细胞具有胰岛素分泌功能,从而代替胰β细胞用于糖尿病的细胞治疗,为糖尿病患者带来了新希望。本研究以脂肪间充质干细胞为研究对象,建立了诱导其形成胰岛素分泌细胞的分化体系并研究了 miR-375过表达对分化的影响,为脂肪间充质干细胞在糖尿病治疗中的应用奠定了基础。基于胚胎干细胞分化为胰岛素分泌细胞(insulinproducing cells,IPCs)期间的关键步骤和规律,以及前期对人脂肪间充质干细胞(human adipose tissue-derived mesenchymal stem,haMSCs)胰向分化的探索,确立五种含有不同诱导因子的分化方案。通过使用这五种方案分别对脂肪间充质干细胞进行诱导分化以及对分化细胞进行基因表达检测和细胞形态学比较,最终确定了以第一阶段添加小分子CYC、NOGGIN、B27和RA的基础高糖培养液;第二阶段添加Nic、GLP1、NOGGIN和B27的基础高糖培养液;第三阶段添加Nic、GLP1、IGF1和NOGGIN的IMDM培养液的三阶段分化方案为最优分化方案。我们通过使用该方案成功诱导haMSCs分化为IPCs,分化细胞表达胰腺相关基因Foxa2、Pdx1、Ngn3、Ins和Gcg,细胞胰岛素免疫荧光染色为阳性,分泌胰岛素的ELISA检测为阳性。并发现BMP信号通路对胰岛素分泌细胞的形成有调节作用,NOGGIN的加入有促进Ins表达的作用。实验室所保存的人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hucMSC)可以作为 haMSC 分化过程中同期处理的对照细胞。miR-375在胰腺、胰岛细胞发育和成熟起到重要的调控作用,控制其表达可能有助于干细胞向胰岛素分泌细胞分化。为了探究基于前期建立的诱导分化方案过表达miR-375后对分化究竟有何影响,我们利用慢病毒载体,成功构建稳定过表达miR-375的haMSC细胞株,并将其诱导分化为IPCs;同时,我们构建了一种在分化第三阶段瞬时过表达/抑制miR-375的脂质体转染体系,来探究过表达/抑制miR-375后对haMSC分化的影响。通过以上两种方法,得出:miR-375 和 Ins表达呈正相关;过表达 miR-375 可以降低分化所得细胞中 Gcg 的表达;在分化第三阶段起始瞬时过表达miR-375可以上调Ngn3;miR-375过表达对Pdx1、Foxa2基因表达影响不大。总之,过表达miR-375可以促进细胞向胰岛素分泌细胞分化,并减少向胰高血糖素分泌细胞分化。

关键词：人脂肪间充质干细胞诱导分化胰岛素分泌细胞 miR-375过表达

人脂肪间充质干细胞外泌体治疗骨质疏松的疗效与机制研究

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人脂肪间充质干细胞外泌体治疗骨质疏松的疗效与机制研究

人脂肪间充质干细胞外泌体对毒邪侵袭PC12细胞模型的修复作用及机制的研究

2021年中华口腔医学会口腔颌面修复专业委员会第六次全...

作者：盛春辉吕珑薇周永胜北京大学口腔医院修复科

目的:骨质疏松是中老年人群常见的全身性骨病。然而目前临床上用于治疗骨质疏松的药物,长期使用存在许多的问题与副作用。人脂肪间充质干细胞(hASCs)来源的外泌体具有一定的促进骨再生的作用。hASCs外泌体可否用于治疗骨质疏松,以及其... 详细信息

目的:骨质疏松是中老年人群常见的全身性骨病。然而目前临床上用于治疗骨质疏松的药物,长期使用存在许多的问题与副作用。人脂肪间充质干细胞(hASCs)来源的外泌体具有一定的促进骨再生的作用。hASCs外泌体可否用于治疗骨质疏松,以及其作用机制如何,尚未见报道。本研究旨在研究hASCs外泌体治疗骨质疏松的效果及机制。方法:超速离心法提取hASCs外泌体。通过尾静脉注射将外泌体注射入卵巢去势(OVX)骨质疏松小鼠体内。取小鼠股骨进行microCT分析和组织切片染色以确定小鼠骨质情况,评价治疗效果。对增殖培养基中脂肪干细胞分泌的外泌体与成骨诱导培养基中脂肪干细胞分泌的外泌体进行小RNA测序,筛选关键miRNA并预测基靶基因。通过荧光素酶报告基因实验验证靶基因并通过qPCR,western blot和RNA pull down实验验证关键miRNA下游通路。建立敲低/过表达细胞系,研究关键miRNA及靶基因对成骨分化的影响。根据关键miRNA构建功能优化的外泌体,并检验其治疗骨质疏松的效果。结果:注射经过成骨诱导hASCs外泌体(OM-exo)组的OVX小鼠,其股骨的骨密度(BMD),骨体积分数(BV/TV),骨小梁厚度(TbTh)和骨小梁数量(TbN)均显著高于注射未经过成骨诱导hASCs外泌体(PM-exo)组的OVX小鼠,且两组数值均显著高于注射PBS组OVX小鼠;注射OM-exo组的OVX小鼠的骨表面积体积比(BS/BV)和骨小梁间隙(TbSp)显著低于注射PM-exo组的OVX小鼠,且两组数值均显著低于注射PBS组OVX小鼠。高通量测序发现经成骨诱导的hASCs及OM-exo两组数值均显著高于注射PBS组OVX小鼠内包裹的miRNA-335-3p的表达量显著下降。荧光素酶报告基因实验和RNA pulldown实验证明XIRP2是miRNA-335-3p的靶基因。结论:hASCs外泌体对小鼠骨质疏松具有一定的治疗效果,OM-exo对骨质疏松的治疗效果优于PM-exo。OM-exo所包裹的miRNA-335-3p表达下调,OMexo可能通过该microRNA促进骨质疏松状态下骨髓间充质干细胞的成骨分化,并改善骨质疏松状态下的骨质情况。

关键词：人脂肪间充质干细胞外泌体骨质疏松 miRNA-335-3p

来源： cnki会议评论

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人脂肪间充质干细胞外泌体对毒邪侵袭PC12细胞模型的修复作用及机...

作者：李超大连医科大学

学位级别：硕士

目的:观察人脂肪间充质干细胞（adipose-derived mesenchymal stem cells,AMSC）来源的外泌体（exosomes）是否对毒邪侵袭（谷氨酸兴奋毒损伤）的PC12细胞模型具有保护作用和修复作用,并讨论其可能的机制,为AMSCs来源外泌体的进一步探... 详细信息

目的:观察人脂肪间充质干细胞（adipose-derived mesenchymal stem cells,AMSC）来源的外泌体（exosomes）是否对毒邪侵袭（谷氨酸兴奋毒损伤）的PC12细胞模型具有保护作用和修复作用,并讨论其可能的机制,为AMSCs来源外泌体的进一步探索提供理论依据和实验基础。方法:本实验主要分两部分进行:第一部分首先大量培养人脂肪间充干细胞,传代至第三代后收集其不含血清的条件培养基,通过超速离心法去除细胞碎片和杂质,得到人脂肪间充质干细胞来源的外泌体,采用透射电镜技术观察所得外泌体的形态特征进行鉴定,采用BCA试剂盒初测外泌体浓度备用;建立毒邪侵袭PC12细胞模型,参考本实验室既往研究结果,采用不同浓度外泌体作用于该细胞模型,共孵育不同时间,通过台盼蓝染色和LDH检测对比不同浓度外泌体在不同共孵育时间下对损伤细胞的作用,确定最适宜的外泌体浓度和作用时间。在本实验第二部分中,通过酶消化法分离培养新生SD大鼠大脑皮质神经元并通过MAP2免疫荧光染色法对神经元进行鉴定;大量收集PC12细胞和神经元的条件培养基,通过超速离心法提取PC12细胞来源和神经元来源的外泌体;建立毒邪侵袭PC12细胞模型和神经元模型,按照第一部分结果加入AMSCs外泌体作用于损伤细胞,通过LDH和MTT观察其作用效果,同时通过NAD+/NADH检测和Lc3II/I抗体检测来探索AMSCs外泌体作用于PC12细胞的可能作用机制。结果:经过原代提取和传代培养,可以获得人脂肪间充质干细胞,从其条件培养基中通过超速离心法得到了30-100nm的微囊泡结构,透射电镜检测证明所得微囊泡即外泌体。采用谷氨酸和甘氨酸混合损伤PC12细胞,镜下可见细胞皱缩变圆,贴壁能力变差,LDH检测和台盼蓝染色提示细胞受损,在谷氨酸浓度为40μmol/l时细胞损伤率接近50%,向损伤PC12细胞模型中加入不同浓度的外泌体,结果显示最佳治疗浓度为40ng/μl,最佳孵育时间为12h。原代培养SD大鼠皮质神经元,细胞生长状态良好,能够正常生长至12天左右,培养第9天通过MAP2免疫荧光检测并拍照,可见细胞生长良好,神经纤维丰富。不同浓度谷氨酸加入神经元中,LDH检测确定最适谷氨酸浓度,建立毒邪侵袭神经元模型,并采用第一部分所得条件,将人脂肪间充质干细胞来源的外泌体作用于损伤的神经元细胞,检测MTT和LDH释放率均无显著变化。通过NAD+/NADH检测PC12细胞模型的能量代谢变化,结果提示人脂肪间充质干细胞外泌体对PC12细胞的能量代谢并无显著影响。通过免疫印记实验（Western Blot）检测各组PC12细胞Lc3II/I的表达,证明外泌体可以通过增强PC12细胞自噬来保护受损细胞。结论:人脂肪间充质干细胞来源的外泌体可以有效降低毒邪侵袭（谷氨酸兴奋毒损伤）PC12细胞模型的LDH释放率,对PC12细胞具有保护作用;人脂肪间充质干细胞来源的外泌体对谷氨酸损伤的神经元模型无显著效果;人脂肪间充质干细胞外泌体对PC12细胞的保护作用与能量代谢无显著关联,与自噬作用有关。

关键词：人脂肪间充质干细胞外泌体 PC12细胞神经元兴奋毒

人脂肪间充质干细胞与再生障碍性贫血患者T淋巴细胞的体外共培养

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中国组织工程研究 2014年第10期18卷 1603-1608页

作者：王椋徐敏张慕华邢健赵霞韩芳刘国强胜利油田中心医院血液内科山东省东营市257034

背景:目前已有临床应用造血干细胞联合间充质干细胞输注治疗再生障碍性贫血的报道。目的:观察人脂肪间充质干细胞对再生障碍性贫血T淋巴细胞分泌功能的调节作用。方法:从健康人脂肪中提取并培养人脂肪间充质干细胞,从再生障碍性贫血患... 详细信息

背景:目前已有临床应用造血干细胞联合间充质干细胞输注治疗再生障碍性贫血的报道。目的:观察人脂肪间充质干细胞对再生障碍性贫血T淋巴细胞分泌功能的调节作用。方法:从健康人脂肪中提取并培养人脂肪间充质干细胞,从再生障碍性贫血患者外周血中分离T淋巴细胞,将两者共培养后,以健康志愿者的T淋巴细胞单独培养及与人脂肪间充质干细胞共培养做对照。ELISA法检测上清白细胞介素2、白细胞介素4、白细胞介素10和γ-干扰素的水平,Realtime RCR和Western blot测定T-bet和GATA-3的表达。结果与结论:共培养7 d后,间充质干细胞+再生障碍性贫血T淋巴细胞组Th1类细胞因子γ-干扰素、白细胞介素2水平明显低于再生障碍性贫血T淋巴细胞组(P细胞因子白细胞介素4、白细胞介素10水平明显高于再生障碍性贫血T淋巴细胞组(P间充质干细胞+再生障碍性贫血T淋巴细胞组T-bet mRNA及蛋白表达水平均低于再生障碍性贫血T淋巴细胞组,GATA-3 mRNA及蛋白水平均高于再生障碍性贫血T淋巴细胞组。提示人脂肪间充质干细胞在体外对再生障碍性贫血患者T淋巴细胞具有免疫调节作用,其机制可能是通过调节转录因子T-bet和GATA-3的表达从而抑制Th细胞向Th1细胞方向分化。

关键词：干细胞脂肪干细胞间充质干细胞人脂肪间充质干细胞再生障碍性贫血免疫调节 T淋巴细胞细胞因子

人脂肪间充质干细胞体外向黑素细胞分化的研究

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中华皮肤科杂志 2014年第2期47卷 85-89页

作者：闵敏张雪静马红许辉李遇梅江苏大学附属医院皮肤科江苏镇江212000 镇江市第二人民医院

目的建立体外诱导人脂肪间充质干细胞（hADSC）向黑素细胞分化的方法。方法由人皮下脂肪分离培养获得hADSC，流式细胞仪检测细胞表型，成骨成脂分化证明分化潜能。将干细胞生长因子（SCF）、内皮素3 （EDN-3）、碱性成纤维细胞生长... 详细信息

目的建立体外诱导人脂肪间充质干细胞（hADSC）向黑素细胞分化的方法。方法由人皮下脂肪分离培养获得hADSC，流式细胞仪检测细胞表型，成骨成脂分化证明分化潜能。将干细胞生长因子（SCF）、内皮素3 （EDN-3）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）等加到条件培养基中，促使第5代hADSC向黑素细胞方向诱导，诱导至第10周。未诱导组为正常对照组。使用实时荧光定量PCR检测黑素相关基因小眼畸形转录因子（MITF），酪氨酸激酶受体c-Kit（KIT），多巴色素异构酶（DCT），酪氨酸酶（TYR），酪氨酸酶相关蛋白1（TYRP1），性别决定区域相关转录因子10（SOX10） mRNA的表达量，统计学分析采用单因素方差分析及LSD-t检验。诱导结束后，通过免疫细胞化学法、细胞免疫荧光法进行鉴定。结果流式细胞仪显示分离培养获得的hADSC高表达CD29、CD44、CD73、CD90、CD105、CD166，阳性率均在95%以上；低表达或不表达CD31、CD34、CD45，人白细胞DR抗原（HLA-DR）。成骨成脂分化结果显示hADSC具有分化潜能。实时荧光定量PCR结果显示，诱导10周后，MITF、KIT、DCT、TYR、TYRP1、SOX10 mRNA的表达水平分别为0.325 ± 0.012，0.042 ± 0.006，0.046 ± 0.013，0.036 ± 0.005，0.041 ± 0.003，0.225 ± 0.014，与诱导0周组相比，均有上调（P 〈 0.05）。诱导结束后，免疫细胞化学MITF、HMB45染色阳性，细胞免疫荧光TYRP1、S100阳性表达。结论由人脂肪间充质干细胞诱导所得细胞具有一定的黑素细胞生物学特性。

关键词：人脂肪间充质干细胞分化黑素细胞