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亚硫酸钠对人胚肾293细胞的毒性作用与胞内蛋白水平变化的关系

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毒理学杂志 2010年第1期24卷 15-18页

作者：白剑英雷佩玉邢锦王静山西医科大学公共卫生学院环境卫生学教研室山西太原030001

目的研究食品添加剂亚硫酸钠(Na2SO3)对人胚肾293细胞(HEK293)的毒性作用与胞内重要蛋白质p53、增殖细胞核抗原(PCNA)和三磷酸腺苷(ATP)结合转运子G2(ABCG2)含量改变之间的关系。方法采用细胞毒性试验(MTS)法观察Na2SO3对HEK293细胞的... 详细信息

目的研究食品添加剂亚硫酸钠(Na2SO3)对人胚肾293细胞(HEK293)的毒性作用与胞内重要蛋白质p53、增殖细胞核抗原(PCNA)和三磷酸腺苷(ATP)结合转运子G2(ABCG2)含量改变之间的关系。方法采用细胞毒性试验(MTS)法观察Na2SO3对HEK293细胞的毒性作用,用蛋白印记法检测HEK293细胞中p53、PCNA和ABCG2蛋白水平。结果0.625～10mmol/L NaSO3处理组的细胞活性与对照组相比,差异有统计学意义(P293细胞有明显的毒性作用;蛋白印记分析发现最高剂量组10mmol/L Na2SO3可同时降低细胞内p53、PCNA和ABCG2蛋白水平,而其余剂量组0.039～2.5mmol/L Na2SO3对HEK293细胞内p53、PCNA和ABCG2蛋白的水平无明显影响。结论在本试验条件下,当Na2SO3的接触浓度达到一定水平时对人胚肾293细胞具有明显的毒性作用,这种毒性作用很可能与其降低肾细胞内的蛋白水平,干扰肾细胞的正常功能相关。

关键词：亚硫酸钠 p53 增殖细胞核抗原转运子G2 人胚肾293细胞

亚硫酸钠对人胚肾293细胞APP蛋白表达影响

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中国公共卫生 2010年第2期26卷 206-207页

作者：白剑英王明衡王慧宇梁瑞峰山西医科大学公共卫生学院环境卫生学教研室太原030001

目的研究食品添加剂亚硫酸钠（Na2SO3）对β-淀粉样物质（Aβ）前体蛋白（APP）表达的影响。方法用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测人胚肾293（HEK293）中APP基因的mRNA表达水平,用蛋白印迹法（W est-ern-b lotting）检测HEK293中AP... 详细信息

目的研究食品添加剂亚硫酸钠（Na2SO3）对β-淀粉样物质（Aβ）前体蛋白（APP）表达的影响。方法用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测人胚肾293（HEK293）中APP基因的mRNA表达水平,用蛋白印迹法（W est-ern-b lotting）检测HEK293中APP蛋白水平。结果RT-PCR检测显示,HEK293接触0.039-10 mmol/L Na2SO324 h后细胞内APP基因的3个亚型APP695、APP751、APP770的mRNA水平均未见明显改变。蛋白印迹分析发现,10mmol/L Na2SO3可明显降低细胞内APP蛋白水平,为阴性对照组的0.908倍而较低剂量组0.039-2.5 mmol/LNa2SO3却可以明显增加细胞内APP蛋白的水平,分别达到阴性对照组的1.596,1.630,1.556和1.446倍。结论亚硫酸钠在一定剂量范围内影响HEK293细胞内APP蛋白水平,可能对老年性痴呆的发生有一定影响,但是细胞内APP蛋白水平的增加不是由该基因转录水平增加所致。

关键词：亚硫酸钠 Aβ前体蛋白人胚肾293细胞

VEGF165对人胚肾293细胞KCNQ1/KCNE1电流的影响及机制探讨

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VEGF165对人胚肾293细胞KCNQ1/KCNE1电流的影响及机制探讨

作者：乔元郑州大学

学位级别：硕士

研究背景和目的血管内皮生长因子165在机体内具有强大的促进血管生成的作用,利用这一特性,人们将其视为治疗心肌梗死等缺血性疾病的潜在突破点。许多研究表明:VEGF165能够减少心肌梗死面积,促进干细胞迁移至缺血部位,预防心室重构,抗心... 详细信息

研究背景和目的血管内皮生长因子165在机体内具有强大的促进血管生成的作用,利用这一特性,人们将其视为治疗心肌梗死等缺血性疾病的潜在突破点。许多研究表明:VEGF165能够减少心肌梗死面积,促进干细胞迁移至缺血部位,预防心室重构,抗心肌细胞凋亡,通过多个途径发挥保护心肌细胞的作用。但VEGF165对心肌细胞电活动的直接影响及可能的机制仍未阐明。I通道在哺乳动物的心肌细胞上广泛分布,是影响心肌细胞动作电位复极过程的重要离子通道。目前认为I通道由α亚单位(KCNQ1基因编码)和β亚单位(KCNE1基因编码)组成。本实验运用细胞转染和膜片钳等技术,分析VEGF165对异源表达的KCNQ1/KCNE1通道电流的影响,并探讨其可能的机制。研究方法将人胚肾293细胞随机分为对照组、实验A组和实验B组,对照组细胞正常培养,不做特殊处理,实验A组细胞导入含有KDR、KCNQ1和KCNE1基因的质粒,实验B组细胞导入含KDR和KCNQ1基因的质粒,外源基因导入约48小时后,PCR技术被用来验证转染是否成功。实验A组和实验B组人胚肾293细胞均经同样浓度的重组人VEGF165蛋白处理后,运用全细胞膜片钳技术观察并记录处理前、后2组细胞的电流大小,并进行比较。研究结果***结果提示实验A组和实验B组均成功的将目的基因导入人胚肾293细胞。2.实验A组的细胞经实验药物VEGF165处理后,在各个电压下(-20,0,+20,+40和+60 mV),处理前测量的标准化激活电流(0.078±0.060、0.243±0.090、0.465±0.080、0.750±0.060、1.000±0.000)均明显高于处理后(0.045±0.040、0.159±0.060、0.349±0.050、0.568±0.090、0.729±0.100),差异均具有统计学意义;处理前测量的标准化尾电流(0.068±0.030、0.252±0.080、0.526±0.070、0.766±0.060、1.000±0.000)均明显高于处理后(0.054±0.030、0.167±0.090、0.409±0.050、0.607±0.060、0.803±0.030),差异均具有统计学意义。3.实验B组的细胞经实验药物VEGF165处理后,在各个电压下(-20,0,+20,+40和+60 mV),处理前测量的标准化激活电流与处理后的数值没有统计学差异,处理前测量的标准化尾电流与处理后的数值没有统计学差异。结论在100 ng/mL的浓度条件下,VEGF165能直接抑制人胚肾293细胞KCNQ1/KCNE1电流的大小,但VEGF165不能直接抑制人胚肾293细胞KCNQ1电流,说明VEGF165对KCNQ1/KCNE1电流的抑制作用需要β亚单位(KCNE1)的参与。

关键词：血管内皮生长因子165 人胚肾293细胞转染 KCNQ1/KCNE1电流 KCNQ1电流

20(S)-原人参二醇对人胚肾293细胞生长的抑制作用

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南通大学学报（医学版） 2010年第5期30卷 315-318,F0002页

作者：翟旭光陈广通南通大学医学院生命化学教研室南通226001

目的:研究20(S)-原人参二醇(PPD)对人胚肾293细胞(HEK-293细胞)生长抑制作用。方法:采用台盼蓝染色和噻唑蓝(MTT)法观察PPD对HEK-293细胞增殖的抑制作用,同时通过Hoechst33258染色和DNA Ladder方法测定PPD对HEK-293细胞凋亡影响。结果:... 详细信息

目的:研究20(S)-原人参二醇(PPD)对人胚肾293细胞(HEK-293细胞)生长抑制作用。方法:采用台盼蓝染色和噻唑蓝(MTT)法观察PPD对HEK-293细胞增殖的抑制作用,同时通过Hoechst33258染色和DNA Ladder方法测定PPD对HEK-293细胞凋亡影响。结果:PPD可明显降低HEK-293细胞存活率和细胞活性,半数抑制浓度(IC50)为21.8μmol/L。PPD处理后HEK-293细胞核出现典型的凋亡形态学的改变,琼脂糖电泳呈现明显的DNALadder条带。结论:PPD对HEK-293细胞生长有明显的抑制作用并有剂量依赖关系。

关键词： 20(S)-原人参二醇人胚肾293细胞 Hoechst33258 噻唑蓝

人CD7 cDNA在HEK293细胞中的表达

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免疫学杂志 2001年第5期17卷 356-358页

作者：周艳春朱锡华黄云辉第三军医大学免疫学教研室重庆400038

目的建立表达人白细胞分化抗原 CD7蛋白的哺乳动物细胞模型 ,为深入研究 CD7的功能奠定基础。方法采用 PCR方法扩增 CD7c DNA,将目的片段定向克隆于真核表达载体 pc DNA3 ,限制性内切酶酶切分析重组质粒并进行序列测定 ;通过电穿孔法将... 详细信息

目的建立表达人白细胞分化抗原 CD7蛋白的哺乳动物细胞模型 ,为深入研究 CD7的功能奠定基础。方法采用 PCR方法扩增 CD7c DNA,将目的片段定向克隆于真核表达载体 pc DNA3 ,限制性内切酶酶切分析重组质粒并进行序列测定 ;通过电穿孔法将重组真核表达载体 pc DNA 3 / CD7转染于人胚肾 2 93细胞 ( HEK2 93 ) ,经 G4 18筛选得到抗性克隆 ;利用FCM检测 CD7分子在 HEK2 93细胞的表达。结果得到了含 CD7全长 c DNA的重组真核表达载体 pc DNA3 / CD7。FCM分析表明 :转染了 pc DNA3 / CD7的 HEK2 93细胞表达人 CD7蛋白。结论为深入研究

关键词： CD7 人胚肾293细胞真核表达 cDNA HEK293细胞

负载人microRNA-149的复制缺陷型腺病毒对人肝癌细胞株增殖的影响

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肿瘤防治研究 2015年第6期42卷 548-552页

作者：王洪斌王宗华陈俊颖邹利全宋航陈陵中国人民解放军第324医院消化内科重庆400020 中国人民解放军第三军医大学护理学院重庆400038 中国人民解放军第324医院病理科重庆400020

目的包装负载人micro RNA-149的复制缺陷型腺病毒(Ad-mi R149),并检测其对人肝癌细胞株增殖的影响。方法全基因合成micro RNA-149前体核苷酸序列,插入腺病毒穿梭质粒的多克隆位点,随后与包装质粒共转染人胚肾293细胞,包装负载micro RNA-... 详细信息

目的包装负载人micro RNA-149的复制缺陷型腺病毒(Ad-mi R149),并检测其对人肝癌细胞株增殖的影响。方法全基因合成micro RNA-149前体核苷酸序列,插入腺病毒穿梭质粒的多克隆位点,随后与包装质粒共转染人胚肾293细胞,包装负载micro RNA-149的复制缺陷型腺病毒;采用MMT方法检测Ad-mi R149对人肝癌细胞株增殖的影响。结果成功包装负载人micro RNA-149的复制缺陷型腺病毒,采用倍比稀释法检测病毒滴度为5×109 pfu/ml。采用电子显微镜技术,观察到HEK293细胞中大量包装病毒颗粒。采用PCR扩增,Ad-mi R149可获得腺病毒及micro RNA-149特异片段,而对照AdLac Z只能扩增出腺病毒特异片段;采用MTT方法发现,Ad-mi R149可显著抑制肝癌细胞株增殖。结论成功包装负载人micro RNA-149的复制缺陷型腺病毒并初步证实其对肝癌细胞增殖的抑制作用。

关键词：人胚肾293细胞腺病毒 hsa-microRNA-149 微小RNAs 肝癌

溶质转运体26A家族在HEK-293细胞中的表达和功能

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南方医科大学学报 2015年第6期35卷 801-806,811页

作者：范超傅鸣宇肖中举唐杰南方医科大学基础医学院生理学教研室广东广州510515

目的构建能在HEK-293细胞膜上表达的溶质转运体26A家族(SLC26A)的蛋白质粒,并对其生理功能进行检测。方法构建多种人类SLC26A转运体-绿色荧光蛋白的融合质粒,并使用瞬时转染技术将其表达在人胚肾293细胞(HEK-293)中。用全细胞膜片钳技... 详细信息

目的构建能在HEK-293细胞膜上表达的溶质转运体26A家族(SLC26A)的蛋白质粒,并对其生理功能进行检测。方法构建多种人类SLC26A转运体-绿色荧光蛋白的融合质粒,并使用瞬时转染技术将其表达在人胚肾293细胞(HEK-293)中。用全细胞膜片钳技术记录表达有SLC26A蛋白的HEK-293细胞的膜电容。结果每个SLC26A转运体均能在HEK-293细胞的细胞膜上表达,并表现出和离子相互作用的生理功能。SLC26A转运体与离子结合的数目与其在细胞膜上的表达程度正相关并具有一定的离子选择性。结论 SLC26A转运体家族能够在HEK-293细胞上表达并具有与转运离子结合的生理功能。在HEK-293细胞系中表达SLC26A转运体家族的研究方法,为进一步研究此家族成员转运功能及其转运机制提供了可能。

关键词：人胚肾293细胞溶质转运体26A家族全细胞膜片钳非线性膜电容

Smac基因的克隆及其对Burkitt′s淋巴瘤

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中华儿科杂志 2005年第7期43卷 503-506页

作者：陆超吴升华陈吉庆赵非池霞潘晓勤费莉郭梅黄松明郭锡熔陈荣华南京医科大学第一附属医院儿科 210029 南京市儿童医院肾科南京医科大学儿科研究所

目的克隆人促凋亡基因(secondmitochondriaderivedactivatorofcaspases,Smac),研究Smac基因转染对Burkitt′s淋巴瘤Raji细胞的促凋亡作用。方法从人胚肾293细胞中扩增人Smac基因全长的cDNA;构建含Smac基因全长cDNA的真核表达载体pcDNA3.1/Smac,并转染人Burkitt′s淋巴瘤Raji细胞;用Westernblot测定外源基因的表达;Hoechest33258和碘化丙锭双荧光染色,结合激光共聚焦显微镜观察细胞凋亡形态;流式细胞仪分析细胞凋亡百分率;比色法测定caspase3酶活性。结果成功克隆人Smac基因全长cDNA,并构建真核表达载体pcDNA3.1/Smac;转染人Smac基因全长cDNA的真核表达载体24h,可显著诱导Burkitt′s淋巴瘤Raji细胞的凋亡,凋亡百分率达(43.7±2.5)%;转染人Smac基因全长cDNA的真核表达载体24h,可显著诱导Raji细胞中caspase3酶活性上调,吸光度为0.936±0.041,与正常对照组(0.138±0.026)及空载体转染对照组(0.136±0.036)相比,P人Burkitt′s淋巴瘤Raji细胞凋亡。其机制可能与caspase3酶活性上调有关。

关键词： Burkitt Smac基因促凋亡作用 caspase-3酶活性淋巴瘤细胞真核表达载体pcDNA3.1 真核表达载体pcDNA3.1 Raji细胞全长cDNA activator caspases 人胚肾293细胞 Western 流式细胞仪分析细胞凋亡促凋亡基因激光共聚焦

先天性QT间期延长综合征相关基因SCN5A定点突变及蛋白表达研究

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中国当代儿科杂志 2013年第3期15卷 223-226页

作者：史瑞明强华张艳敏马爱群高洁西安交通大学医学院第一附属医院儿科陕西西安710061

目的构建先天性QT间期延长综合征相关基因SCN5A-delQKP1507-1509突变型真核表达载体,并观察其在人胚肾293(HEK293)细胞中的表达。方法采用一步法构建SCN5A-delQKP1507-1509突变型真核表达载体PEGFP-delQKP-hH1,用脂质体转染法将野生型... 详细信息

目的构建先天性QT间期延长综合征相关基因SCN5A-delQKP1507-1509突变型真核表达载体,并观察其在人胚肾293(HEK293)细胞中的表达。方法采用一步法构建SCN5A-delQKP1507-1509突变型真核表达载体PEGFP-delQKP-hH1,用脂质体转染法将野生型和突变型质粒分别转染HEK293细胞,激光共聚焦显微镜观察钠通道蛋白在HEK293细胞的表达与定位,Western blot检测其蛋白表达。结果经电泳及DNA测序显示突变型1507-1509位点成功缺失9个碱基,野生型与突变型均在HEK293细胞膜上表达,且表达量差异无统计学意义(P>0.05)。结论成功构建钠通道基因SCN5A-delQKP1507-1509突变型真核表达载体,并在HEK293细胞中表达,为进一步研究其功能奠定基础。

关键词：先天性QT间期延长综合征 SCN5A基因定点突变真核表达载体人胚肾293细胞