Smac基因的克隆及其对Burkitt′s淋巴瘤

作     者：陆超 吴升华 陈吉庆 赵非 池霞 潘晓勤 费莉 郭梅 黄松明 郭锡熔 陈荣华 LU Chao;WU Sheng-hua;CHEN Ji-qing;ZHAO Fei;CHI Xia;PAN Xiao-qin;FEI Li;GUO Mei;HUANG Song-ming;GUO Xi-rong;CHEN Rong-hua

作者机构：南京医科大学第一附属医院儿科210029 南京市儿童医院肾科 南京医科大学儿科研究所 

出 版 物：《中华儿科杂志》 (Chinese Journal of Pediatrics)

年 卷 期：2005年第43卷第7期

页      面：503-506页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30371502) 江苏省卫生厅135工程项目(200245) 

主　　题：Burkitt Smac基因 促凋亡作用 caspase-3酶活性 淋巴瘤细胞 真核表达载体pcDNA3.1 真核表达载体pcDNA3.1 Raji细胞 全长cDNA activator caspases 人胚肾293细胞 Western 流式细胞仪分析 细胞凋亡 促凋亡基因 激光共聚焦 

摘      要：目的克隆人促凋亡基因(secondmitochondriaderivedactivatorofcaspases,Smac),研究Smac基因转染对Burkitt′s淋巴瘤Raji细胞的促凋亡作用。方法从人胚肾293细胞中扩增人Smac基因全长的cDNA;构建含Smac基因全长cDNA的真核表达载体pcDNA3.1/Smac,并转染人Burkitt′s淋巴瘤Raji细胞;用Westernblot测定外源基因的表达;Hoechest33258和碘化丙锭双荧光染色,结合激光共聚焦显微镜观察细胞凋亡形态;流式细胞仪分析细胞凋亡百分率;比色法测定caspase3酶活性。结果成功克隆人Smac基因全长cDNA,并构建真核表达载体pcDNA3.1/Smac;转染人Smac基因全长cDNA的真核表达载体24h,可显著诱导Burkitt′s淋巴瘤Raji细胞的凋亡,凋亡百分率达(43.7±2.5)%;转染人Smac基因全长cDNA的真核表达载体24h,可显著诱导Raji细胞中caspase3酶活性上调,吸光度为0.936±0.041,与正常对照组(0.138±0.026)及空载体转染对照组(0.136±0.036)相比,P0.05。结论转染并表达外源性Smac基因,可显著诱导人Burkitt′s淋巴瘤Raji细胞凋亡。其机制可能与caspase3酶活性上调有关。