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环境与职业医学 2024年第4期41卷 362-366,374页

作者：张聪罗薇王莎巢杰东南大学公共卫生学院环境医学工程教育部重点实验室江苏南京210009 东南大学医学院医学生理系江苏南京210009

[背景]肺纤维化疾病目前早期缺少筛查诊断方法,后期缺乏特效治疗措施,因此急需探究其机制并开发针对性的治疗方法。[目的]筛选病理条件下差异表达的环状RNA(circRNA)hsa_circUCK2的表达情况,探究其对肺纤维化的影响。[方法]在细胞实验中... 详细信息

[背景]肺纤维化疾病目前早期缺少筛查诊断方法,后期缺乏特效治疗措施,因此急需探究其机制并开发针对性的治疗方法。[目的]筛选病理条件下差异表达的环状RNA(circRNA)hsa_circUCK2的表达情况,探究其对肺纤维化的影响。[方法]在细胞实验中,使用小干扰RNA(siRNA)敲除HPF-a细胞中hsa_circUCK2,TGF-β1刺激HPF-a细胞,设立si-NC组、si-circUCK2组、si-NC+TGF-β1处理组、si-circUCK2+TGF-β1处理组4组,Western blot法检测4组HPF-a细胞中纤连蛋白(FN1)表达情况,划痕实验检测HPF-a细胞迁移能力,CCK-8实验检测TGF-β1刺激的2组(si-NC+TGF-β1处理组和si-circUCK2+TGF-β1处理组)HPF-a细胞活性。在动物实验中,健康SPF级雄性C57BL/6小鼠48只,随机分为生理盐水+si-con组,生理盐水+si-circ_0000115组,SiO_(2)+si-con组,SiO2+si-circ_0000115组4组。mmu_circ_0000115是hsa_circUCK2的小鼠同源基因,气管滴注siRNA敲除小鼠肺circRNA mmu_circ_0000115,48 h后通过气管滴注SiO2悬液(0.2 g·kg^(-1),50 mg·mL^(-1))构建小鼠肺纤维化模型,实时荧光定量PCR检测小鼠各脏器中敲除效率,Western blot检测肺组织中I型胶原α2蛋白(COL1A2)表达情况,天狼星红检测肺组织中胶原合成情况。[结果]在细胞实验中,Western blot结果显示,敲除hsa_circUCK2可下调TGF-β1刺激的HPFa细胞中FN1的表达水平(P 细胞划痕实验结果显示,hsa_circUCK2基因的下调可以抑制HPF-a细胞的增殖和迁移(P 肺组织中被显著敲除mmu_circ_0000115(P 肺组织中胶原的产生和沉积减少。[结论]敲低hsa_circUCK2抑制成纤维细胞活化和减少肺纤维化模型小鼠中胶原沉积。提示hsa_circUCK2参与肺纤维化进程,可能是肺纤维化的潜在治疗靶点。

关键词：环状RNA 转录组芯片 hsa_circUCK2 肺纤维化人肺成纤维-成人细胞

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