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脂联素干预高糖介导人牙周膜细胞凋亡的相关机制

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中国组织工程研究 2019年第7期23卷 1097-1102页

作者：林仰东殷恺天津市第一中心医院口腔科天津市300192

背景:脂联素是最近发现的一种由脂肪细胞分泌的特异蛋白质,因其在调节糖脂代谢和抗氧化应激等方面的功效,而被认为是治疗糖尿病及其并发症的潜在物质。目的:探讨脂联素干预对高糖介导人牙周膜细胞凋亡及其经典Wnt/β-catenin信号转导通... 详细信息

背景:脂联素是最近发现的一种由脂肪细胞分泌的特异蛋白质,因其在调节糖脂代谢和抗氧化应激等方面的功效,而被认为是治疗糖尿病及其并发症的潜在物质。目的:探讨脂联素干预对高糖介导人牙周膜细胞凋亡及其经典Wnt/β-catenin信号转导通路的影响。方法:体外复苏培养人牙周膜细胞。将所有细胞随机平均分为4组:对照组(正常RPMI1640完全培养基,葡萄糖浓度为11 mmol/L),高糖组(葡萄糖浓度40 mmol/L的RPMI1640培养基),甘露醇组(RPMI1640培养基+甘露醇19.5 mmol/L)和脂联素组(葡萄糖浓度40 mmol/L的RPMI1640培养基+20 mg/L脂联素)。在培养24-96 h后的不同时间点,采用MTT法检测各组细胞的细胞存活情况,采用流式细胞术检测各组细胞周期及凋亡情况的变化。通过RT-PCR和Western blot检测Wnt1、Wnt10b及β-catenin的表达水平。结果与结论:(1)高糖在体外对人牙周膜细胞有显著的抑制增殖和促进凋亡作用,但对细胞周期的影响不明显;(2)人牙周膜细胞经体外高糖培养基培养24-96 h后,其抑制增殖作用呈时间依赖性;而脂联素则显著提高了高糖干预下细胞的增殖并抑制了细胞凋亡(P 人牙周膜细胞凋亡,抑制细胞增殖,对细胞周期无显著影响。而脂联素可以抑制上述作用,可能通过上调Wnt1和Wnt10b表达继而激活Wnt/β-catenin信号转导通路发挥作用。

关键词：脂联素高糖环境人牙周膜细胞 Wnt/β-catenin信号转导通路细胞凋亡细胞增殖细胞周期牙周炎牙周膜 Wnt1蛋白质组织工程

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体外张应力对人牙周膜细胞串珠素表达的影响

上海口腔医学 2014年第6期23卷 675-680页

作者：王奕孙超凡陈利娇王彦亮胡荣党温州医科大学附属口腔医院正畸科浙江温州325027 温州医科大学附属口腔医院口腔颌面外科浙江温州325027

目的 :观察体外周期性张应力对人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,h PDLCs)串珠素的表达影响,探讨应力作用下牙周组织改建的分子机制。方法:采用酶消法分离培养h PDLC,通过应力加载仪对细胞施以12%elongation、1 Hz的单轴... 详细信息

目的 :观察体外周期性张应力对人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,h PDLCs)串珠素的表达影响,探讨应力作用下牙周组织改建的分子机制。方法:采用酶消法分离培养h PDLC,通过应力加载仪对细胞施以12%elongation、1 Hz的单轴张应力。加力时长分别为0、12、24、48 h。然后通过实时定量PCR和ELISA方法分别检测张应力下不同时间点串珠素基因和蛋白的表达变化。采用SPSS19.0软件包对数据进行统计学分析。结果:张应力加载后,串珠素m RNA在加力的前12 h内表达水平出现短暂升高,但无显著差异。随着加力时间延长,m RNA表达持续下降,48 h后达到最低水平,至对照组的0.28±0.05(P细胞基质内的串珠素蛋白表达则随着加力时间一直下降,48 h后从(14.03±0.71)pg/m L(对照组)降低到最低水平(11.06±0.15)pg/m L,差异显著(P人牙周膜细胞串珠素基因及蛋白表达,下降趋势与时间具有相关性,提示串珠素可能在牙周膜对机械力刺激的反应中发挥作用。

关键词：张应力人牙周膜细胞串珠素

周期性牵张应力作用下KLF5对人牙周膜细胞增殖和成骨分化的影响

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上海口腔医学 2018年第1期27卷 28-33页

作者：高锦瑜余小琴王军强延安大学附属医院口腔正畸科陕西延安716000 安康市人民医院口腔科陕西安康725000 延安大学附属医院口腔修复科陕西延安716000

目的 :探讨周期性牵张应力(cyclic tensile stress,CTS)作用下Kruppel样转录因子5(Kruppel-like factor 5,KLF5)在人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,h PDLCs)中的表达及其对h PDLCs增殖和成骨分化的影响。方法:酶解组织块法体外培养h PDLCs,对其施加形变率10%,频率0.5 Hz的周期性牵张应力1、4、8、12、24 h,采用RT-PCR和Western印迹法检测细胞中KLF5 m RNA和蛋白的表达。转染si RNA(si-KLF5)至h PDLCs沉默KLF5表达,RT-PCR检测KLF5 m RNA的表达。同时,将过表达碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,b FGF、FGF2)的pc DNA3.1-FGF2转染至稳定转染si-KLF5的h PDLCs,加力8 h后,以CCK8法检测各组细胞的增殖活性,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)试剂盒检测ALP活性,RT-PCR检测成骨分化因子Runx2和Osterix的m RNA表达,Western印迹法检测Runx2、Osterix、FGF2、GSK-3β、P-GSK-3β(ser 9)、β-catenin蛋白的表达。采用SPSS22.0软件包对数据进行统计学分析。结果 :10%CTS刺激呈时间依赖性地诱导h PDLCs中KLF5 m RNA和蛋白表达。si-KLF5转染可显著抑制10%CTS诱导的h PDLCs的增殖,降低其ALP活性,减少Runx2和Osterix的m RNA和蛋白表达,并抑制FGF2-GSK-3β/β-catenin信号通路的激活;而过表达FGF2可以部分逆转沉默KLF5对h PDLCs增殖和成骨分化的抑制效应。结论 :周期性牵张应力作用下,KLF5通过FGF2-GSK-3β//β-catenin信号通路影响人牙周膜细胞的增殖和成骨分化。

关键词： KLF5 人牙周膜细胞细胞增殖成骨分化

低强度脉冲超声波联合骨形态发生蛋白2促进人牙周膜细胞的成骨分化

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中国组织工程研究 2015年第11期19卷 1668-1672页

作者：刘俊胡波蒋欣益孙吉成邓锋宋锦璘重庆医科大学附属口腔医院口腔疾病与生物医学重庆市重点实验室重庆市401147 绵阳市中心医院口腔科四川省绵阳市621000

背景:低强度脉冲超声波和骨形态发生蛋白2均可促进人牙周膜细胞成骨分化,但两者联合应用尚未见报道。目的:验证低强度脉冲超声波和骨形态发生蛋白2联合应用诱导牙周膜细胞成骨分化的生物学效应。方法:体外分离、原代、传代培养与鉴定牙... 详细信息

背景:低强度脉冲超声波和骨形态发生蛋白2均可促进人牙周膜细胞成骨分化,但两者联合应用尚未见报道。目的:验证低强度脉冲超声波和骨形态发生蛋白2联合应用诱导牙周膜细胞成骨分化的生物学效应。方法:体外分离、原代、传代培养与鉴定牙周膜细胞。取生长良好的第4代牙周膜细胞接种至六孔板中,实验分为4组:对照组、低强度脉冲超声波诱导组、骨形态发生蛋白2诱导组、低强度脉冲超声波联合骨形态发生蛋白2诱导组。采用碱性磷酸酶检测试剂盒检测细胞碱性磷酸酶活性,RT-PCR检测牙周膜细胞成骨相关基因Ⅰ型胶原、骨桥蛋白的表达。结果与结论:通过低强度脉冲超声波、骨形态发生蛋白2和低强度脉冲超声波+骨形态发生蛋白2诱导后,体外培养的牙周膜细胞碱性磷酸酶活性均显著高于对照组(P牙周膜细胞成骨能力,两者联合应用其成骨诱导能力更强。

关键词：组织构建骨组织工程低强度脉冲超声骨形态发生蛋白2 人牙周膜细胞成骨分化国家自然科学基金

周期性牵张力调节人牙周膜细胞成骨相关基因表达的研究

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中华口腔医学杂志 2007年第6期42卷 368-372页

作者：李永明杨磊丁寅李东第四军医大学口腔医学院正畸科西安710032

目的探讨牵张力诱导体外培养的人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,HPDLC)成骨分化的基因调控机制。方法通过体外细胞加载系统对培养的人牙周膜细胞施加12%形变率、6周/min 的周期性牵张力48h,使用点样数为96点的人骨再生... 详细信息

目的探讨牵张力诱导体外培养的人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,HPDLC)成骨分化的基因调控机制。方法通过体外细胞加载系统对培养的人牙周膜细胞施加12%形变率、6周/min 的周期性牵张力48h,使用点样数为96点的人骨再生基因表达谱芯片检测周期性牵张力加载组细胞成骨相关基因表达的变化。结果 HPDLC 在周期性牵张力作用下有21种成骨相关基因的表达明显升高,包括10种生长因子和相关分子,10种细胞外基质和相关蛋白,1种细胞黏附分子。有2种基因表达明显下降,包括1种生长因子和相关分子,1种细胞黏附分子。结论周期性牵张力作用于体外培养的 HPDLC,可以通过调节部分成骨相关基因的表达,诱导牙周膜细胞的成骨分化。

关键词：基因表达基因芯片人牙周膜细胞

中药双黄补对人牙周膜细胞在玉米醇溶蛋白支架材料上黏附生长及增殖的影响

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中国中西医结合杂志 2011年第7期31卷 932-936页

作者：许彦枝李娜刘健吴景景杨凤英罗冬青河北医科大学第四医院口腔科石家庄050011 首都医科大学附属北京中医医院口腔科北京100010

目的研究中药双黄补对人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,HPDLCs)在玉米醇溶蛋白(Zein)支架材料上黏附生长及增殖的影响,探讨双黄补-Zein作为一种复合支架材料应用于牙周组织工程的可行性。方法采用组织块法体外培养HPDLCs... 详细信息

目的研究中药双黄补对人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,HPDLCs)在玉米醇溶蛋白(Zein)支架材料上黏附生长及增殖的影响,探讨双黄补-Zein作为一种复合支架材料应用于牙周组织工程的可行性。方法采用组织块法体外培养HPDLCs,水提醇沉法制备双黄补煎液,溶剂浇铸/粒子沥滤法制备Zein支架,制备Zein支架浸提液并用其配制50、100、150、200、500、1000μg/mL浓度的双黄补培养液。分别设不同浓度双黄补组、Zein支架浸提液组及细胞对照组。MTT法检测各组对HPDLCs增殖的影响;根据MTT检测结果,选取最佳浓度(100μg/mL)双黄补作为实验组,10%FBS的DMEM培养液作为对照组,倒置相差显微镜及扫描电镜观察双黄补对HPDLCs在Zein支架材料上细胞形态的影响。结果与Zein支架浸提液组及细胞对照组比较,不同浓度双黄补均能促进HPDLCs的增殖,且以100μg/mL浓度的双黄补促增殖作用最明显(P细胞对照组比较差异无统计学意义(P>0·05),但其细胞增殖率为正值;形态学观察结果显示HPDLCs在Zein支架上生长良好,且在双黄补作用下Zein支架上的HPDLCs数目较多,形态较好。结论双黄补能促进HPDLCs在Zein支架上的黏附生长及增殖。双黄补-Zein作为一种复合支架材料应用于牙周组织工程具有可行性。

关键词：人牙周膜细胞双黄补玉米醇溶蛋白支架材料细胞增殖

三维培养模型中胰岛素样生长因子-Ⅰ对人牙周膜细胞增殖及碱性磷酸酶活性的影响

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华西口腔医学杂志 2011年第3期29卷 229-232页

作者：李彦牛忠英汤楚华包博师天鹏司少艳解放军总医院军医进修学院北京100853 解放军第306医院全军口腔疾病诊治中心北京100101 解放军第306医院病理实验科北京100101

目的了解胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)在三维培养条件下对人牙周膜细胞(hPDLCs)增殖及碱性磷酸酶(ALP)活性的影响。方法通过组织块法分离培养hPDLCs。采用旋转细胞培养系统(RCCS)建立三维培养环境。将细胞分为4组,分别为阴性对照组、阳... 详细信息

目的了解胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)在三维培养条件下对人牙周膜细胞(hPDLCs)增殖及碱性磷酸酶(ALP)活性的影响。方法通过组织块法分离培养hPDLCs。采用旋转细胞培养系统(RCCS)建立三维培养环境。将细胞分为4组,分别为阴性对照组、阳性对照组(三维培养组、IGF-Ⅰ组)、实验组(三维培养加IGF-Ⅰ组)。各组细胞分别培养1、3、5、7 d。采用甲基噻唑基四唑(MTT)法检测各组各时间点细胞增殖情况,分光光度计法检测ALP活性。结果与阴性对照组相比,三维培养加IGF-Ⅰ组细胞增殖自3d时显著增加(P<0.05),且高于三维培养组(P<0.05)。在培养3、5、7 d时,三维培养加IGF-Ⅰ组ALP活性显著高于阴性对照组(P<0.05);与三维培养组相比,三维培养加IGF-Ⅰ组ALP活性在3、5、7 d均显著增高(P<0.05)。结论 IGF-Ⅰ在三维培养条件下仍可显著促进hPDLCs增殖及其ALP活性。

关键词：人牙周膜细胞胰岛素样生长因子-Ⅰ 增殖碱性磷酸酶三维培养

成骨生长肽对人牙周膜细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响

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中国组织工程研究与临床康复 2009年第24期13卷 4627-4631页

作者：徐凌黄姣向学熔重庆医科大学附属口腔医院修复科重庆市400015 重庆医科大学附属口腔医院牙周科重庆市400015

背景:成骨生长肽是新近发现的一种生长因子,具有促进有丝分裂、促进成骨等作用,在组织损伤后的修复过程中发挥了重要的生理作用。目的:观察成骨生长肽对体外培养的人牙周膜细胞增殖及其碱性磷酸酶活性的影响。设计、时间及地点:细胞水... 详细信息

背景:成骨生长肽是新近发现的一种生长因子,具有促进有丝分裂、促进成骨等作用,在组织损伤后的修复过程中发挥了重要的生理作用。目的:观察成骨生长肽对体外培养的人牙周膜细胞增殖及其碱性磷酸酶活性的影响。设计、时间及地点:细胞水平的对比观察实验,于2006-02/06在教育部口腔生物医学工程重点实验室完成。材料:临床上因正畸需要拔除的牙周健康、无龋的新鲜第1前磨牙牙周膜组织。成骨生长肽购于美国Sigma公司。方法:在体外培养的人牙周膜细胞中加入10-11,10-10,10-9,10-8及10-7mol/L不同浓度的成骨生长肽,用四甲基偶氮唑盐比色法检测细胞的增殖率;以流式细胞仪法检测细胞的增殖周期;应用酶联免疫法检测细胞内碱性磷酸酶活性。主要观察指标:细胞培养第1,2,3天观察细胞增殖情况;第6天观察细胞内碱性磷酸酶活性。结果:成骨生长肽浓度在10-11～10-7mol/L时,对人牙周膜细胞的增殖率有明显的促进作用(P细胞S期所占的比例,从而加速细胞的增殖活动。成骨生长肽在10-11～10-7mol/L时,能显著提高细胞内碱性磷酸酶活性(P人牙周膜细胞的增殖活性,同时可以提高细胞碱性磷酸酶的活性。

关键词：成骨生长肽人牙周膜细胞细胞增殖增殖周期碱性磷酸酶

微RNA-146a反转牙龈卟啉单胞菌脂多糖对人牙周膜细胞成骨的抑制作用

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中华口腔医学杂志 2018年第11期53卷 753-759页

作者：朱东望薛栋赖文徐万宁蒋少云天津医科大学口腔医院口腔颌面外科 300070 天津医科大学口腔医院牙周科 300070 首都医科大学宣武医院口腔科北京100053 北京大学深圳医院口腔医学中心 518036 四川大学华西口腔医院口腔颌面外科口腔疾病研究国家重点实验室国家口腔疾病临床医学研究中心成都610041

目的探讨微RNA-146a（microRNA-146a，miR-146a）对牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis，Pg）脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）刺激下人牙周膜细胞（human periodontal ligament cells，hPDLC）成骨分化的影响及机制，为牙周组织工程学研究提供实验依据。方法体外培养hPDLC，诱导成骨分化，将细胞分为5组：含5%胎牛血清的α-微量伊格尔培养基培养的hPDLC（非成骨分化培养组）；成骨分化液培养的hPDLC（成骨分化培养组）；成骨分化液＋1 mg/L Pg LPS处理的hPDLC（LPS组）；成骨分化液＋1 mg/L Pg LPS＋miR-146a模拟物处理的hPDLC（LPS＋miR-146a模拟物组）；成骨分化液＋1 mg/L Pg LPS＋miR-146a阴性对照处理的hPDLC（LPS＋miR-146a阴性对照组），每组设5个复孔。通过实时荧光定量PCR和茜素红染色法分别检测成骨标志物和矿化，同时应用非放射性转录因子检测hPDLC的核提取物中核因子κB（nuclear factor kappa B，NF-κB）p65的核活性。结果与成骨分化培养组相比，LPS组hPDLC中Ⅰ型胶原、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）、Runt相关转录因子2（Runt-related transcription factor-2，RUNX2）和骨钙蛋白水平显著降低（P〈0.05）；Pg LPS可以抑制矿化能力，刺激NF-κB p65的核转录活性的表达（成骨分化培养组：1.023±0.217，LPS组：6.252±0.613，P=0.008）；与LPS＋miR-146a阴性对照组相比，LPS＋miR-146a模拟物组第3天检测到hPDLC中除ALP（P=0.167）和RUNX2（P=0.580）外，Ⅰ型胶原（P=0.007）和骨钙蛋白mRNA（P=0.049）的表达均显著增加；第7和14天时Ⅰ型胶原、ALP、RUNX2和骨钙蛋白mRNA水平均显著增加（P〈0.05），并可以增强矿化能力，同时miR-146a模拟物可显著降低Pg LPS诱导的hPDLC中NF-κB p65的核转录活性（LPS＋miR-146a模拟物组：2.427±0.354；LPS＋miR-146a阴性对照组：5.863±0.482，P=0.019）。结论miR-146a可以通过促进hPDLC中成骨标志物的表达和抑制炎症通路，逆转Pg LPS对hPDLC成骨分化的抑制作用。

关键词：牙周炎微RNAs 成骨分化人牙周膜细胞