检索结果-南通市图书馆

人干细胞因子cDNA克隆及其在大肠杆菌中的高效表达

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国医学科学院学报 1997年第1期19卷 29-34页

作者：陈卫东狄旭李江宋飞陈松森梁植权中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所北京100005

以超速离心法提取的HepG2细胞总RNA为模板，应用RT-PCR技术扩增得到编码人干细胞因子（SCF）全长CDNA（约0.8kb）。克隆、序列分析确证编码人SCF膜外活性区的CDNA（约0.5kb）结构正确，构建了含有该基因的表达质粒（PBV-mhSCF）并在大... 详细信息

以超速离心法提取的HepG2细胞总RNA为模板，应用RT-PCR技术扩增得到编码人干细胞因子（SCF）全长CDNA（约0.8kb）。克隆、序列分析确证编码人SCF膜外活性区的CDNA（约0.5kb）结构正确，构建了含有该基因的表达质粒（PBV-mhSCF）并在大肠杆菌中获得高效表达。

关键词：人干细胞因子 cDNA 聚合酶链反应基因重组表达

人干细胞因子模拟肽与c-JUN亮氨酸拉链融合蛋白的原核表达和生物学功能鉴定

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国生物工程杂志 2010年第12期30卷 5-9页

作者：苏林孔燕刘长征杨克恭陈松森中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 北京大学临床肿瘤学院北京肿瘤医院暨北京市肿瘤防治研究所北京100036

将两种人干细胞因子(hSCF)模拟肽(CS2和LS2)分别与c-jun亮氨酸拉链在大肠杆菌中融合表达,比较模拟肽与融合蛋白的生物学活性。通过搭桥PCR的方法,构建分别含有CS2和LS2与c-jun亮氨酸拉链融合蛋白及单独c-jun亮氨酸拉链编码序列的三种原... 详细信息

将两种人干细胞因子(hSCF)模拟肽(CS2和LS2)分别与c-jun亮氨酸拉链在大肠杆菌中融合表达,比较模拟肽与融合蛋白的生物学活性。通过搭桥PCR的方法,构建分别含有CS2和LS2与c-jun亮氨酸拉链融合蛋白及单独c-jun亮氨酸拉链编码序列的三种原核表达质粒pET30a-CSJ,pET30a-LSJ和pET30a-Jun,在*** BL21中进行表达,经镍柱和Sephadex G-50柱纯化后,SDS-PAGE和质谱法检测重组融合蛋白(CSJ,LSJ)和c-Jun的理化性质,MTT法检测融合蛋白刺激UT-7细胞增殖的活性。结果显示CSJ,LSJ和c-jun在***中均呈20%左右表达,经纯化后其纯度达95%以上,分子量分别为7336.08,7991.54和6672.74。细胞学活性实验显示:与CS2和LS2相比,CSJ和LSJ促进UT-7细胞增殖的活性提高约1000倍。在大肠杆菌中成功表达了hSCF模拟肽与c-jun亮氨酸拉链融合蛋白,融合蛋白活性显著高于合成的hSCF模拟肽。

关键词：人干细胞因子模拟肽融合蛋白亮氨酸拉链

可溶型人干细胞因子cDNA的克隆表达、复性与纯化

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

细胞与分子免疫学杂志 2004年第4期20卷 402-405页

作者：王骊丽耿信笃韩骅西北大学现代分离科学研究所陕西西安710069 第四军医大学医学遗传学与发育生物学教研室陕西西安710032

目的 :构建可溶型人干细胞因子 (hSCF)基因的表达载体。优化培养条件 ,实现hSCF基因在大肠杆菌中的高表达。方法 :利用PCR技术 ,以人淋巴结cDNA为模板扩增并克隆hSCF基因。用简并PCR对hSCF基因 5′端的序列进行修饰 ,以实现在大肠杆菌... 详细信息

目的 :构建可溶型人干细胞因子 (hSCF)基因的表达载体。优化培养条件 ,实现hSCF基因在大肠杆菌中的高表达。方法 :利用PCR技术 ,以人淋巴结cDNA为模板扩增并克隆hSCF基因。用简并PCR对hSCF基因 5′端的序列进行修饰 ,以实现在大肠杆菌中的高效表达 ;用MTT比色法测定初步复性和纯化的hSCF蛋白的生物学活性。结果 :扩增并克隆了hSCF成熟肽cDNA。将其插入表达载体pBV2 2 0构建了hSCF基因的表达质粒 ,并在大肠菌中初步表达。表达量占总菌体的 2 0 %以上 ,优化培养条件后表达量可达到 4 0 %以上 ,表达产物为包涵体。将包涵体溶解在 8mol/L脲或 7mol/L盐酸胍中 ,用疏水色谱法进行复性并同时纯化 ,得到具有天然生物学活性的rhSCF蛋白。结论 :成功地克隆hSCF基因 ,并实现在原核系统中的高表达 ,所获表达菌株可用于生产以获得具有生物学活性的rhSCF蛋白产品。

关键词： PCR 人干细胞因子大肠杆菌包含体高效疏水色谱色谱饼重组蛋白

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

可溶性人干细胞因子的原核表达和纯化

四川大学学报（自然科学版） 2005年第3期42卷 584-587页

作者：肖冰孙元田徐洁杰潘克俭胡火珍四川大学生命科学学院细胞生物学教研室四川成都610064

用Trizol提取人骨髓总RNA,通过RT PCR扩增人干细胞因子DNA,克隆到pMD18 T载体中并测序将其定向连入原核表达载体pET32a(+),获得了重组表达载体pET32a(+)/hSCF,其cDNA长度为504bp,测序结果与已知序列吻合然后在大肠杆菌BL21中经IPTG诱导... 详细信息

用Trizol提取人骨髓总RNA,通过RT PCR扩增人干细胞因子DNA,克隆到pMD18 T载体中并测序将其定向连入原核表达载体pET32a(+),获得了重组表达载体pET32a(+)/hSCF,其cDNA长度为504bp,测序结果与已知序列吻合然后在大肠杆菌BL21中经IPTG诱导表达,获得37kD的融合蛋白,约占菌体总蛋白量的30% 经Ni2+

关键词：人干细胞因子原核表达纯化

人干细胞因子(SCF)5’旁侧调控序列与其全长cDNA融合克隆的构建及鉴定

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

广东医学院学报 2001年第1期19卷 6-9页

作者：谭运年谭文斌彭兴华广东医学院附属医院妇产科研究室广东湛江524001 湖南医科大学分子生物学研究中心湖南长沙410078

目的 :为研究人干细胞因子 (SCF) 5’旁侧 1.42 kb区域内不同序列对全长 c DNA在真核细胞中表达的调控作用 ,构建了 SCF5’旁侧 1.42 kb的调控序列与其 1.2 kb的全长 c DNA融合克隆。方法 :将 PCR获得的 SCF5’旁侧 1.42kb的调控序列与 ... 详细信息

目的 :为研究人干细胞因子 (SCF) 5’旁侧 1.42 kb区域内不同序列对全长 c DNA在真核细胞中表达的调控作用 ,构建了 SCF5’旁侧 1.42 kb的调控序列与其 1.2 kb的全长 c DNA融合克隆。方法 :将 PCR获得的 SCF5’旁侧 1.42kb的调控序列与 RT- PCR获得的其 1.2 kb的全长 c DNA克隆入 p GEM- T载体 ,筛选正确插入方向 ,利用合适的限制性内切酶从中切出三个片段依次亚克隆入 p UC19克隆载体中。结果 :获得了 SCF5’旁侧 1.42 kb的调控序列与其 1.2 kb的全长 c DNA并成功地构建了它们的融合克隆。结论 :T-载体在克隆添加了少量具有 3’→ 5’外切核酸酶的 PCR产物中仍然有效 ;在稍大片段的基因克隆操作中 ,利用分段亚克隆的方法 ,避开干扰另外的酶切位点 ,依次分段亚克隆更为可行。

关键词：人干细胞因子调控序列 cDNA 融合克隆

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

人干细胞因子cDNA的设计、合成与克隆

生物技术通讯 2002年第1期13卷 26-29页

作者：赵志虎张京生曹诚马清钧军事医学科学院生物工程研究所北京100850

选择大肠杆菌的偏爱密码子,分成18个长约60个碱基且相互配对的寡核苷酸片段,合成了可溶形式的人干细胞因子(hSCF)的cDNA。合成片段经纯化、5'-端磷酸化后,通过PCR进行合成hSCF的cDNA一次性组装与扩增,得到了含有可溶形式的hSCF的全部编... 详细信息

选择大肠杆菌的偏爱密码子,分成18个长约60个碱基且相互配对的寡核苷酸片段,合成了可溶形式的人干细胞因子(hSCF)的cDNA。合成片段经纯化、5'-端磷酸化后,通过PCR进行合成hSCF的cDNA一次性组装与扩增,得到了含有可溶形式的hSCF的全部编码区及EcoRⅠ、SalⅠ位点在内的全长共515个碱基对的DNA片段。回收该DNA片段,酶切消化,定向克隆进质粒pUC19。经酶切鉴定以及序列测定,得到了全序列正确的克隆株,为下一步的工作奠定了基础。

关键词：人干细胞因子基因合成聚合酶链式反应 cDNA 设计克隆

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

重组人干细胞因子在昆虫细胞中的高效表达

微生物学报 2000年第1期40卷 44-49页

作者：张冬梅秦浚川臧宇辉朱洁沈倍奋南京大学医药生物技术国家重点实验室南京210093 军事医学科学院基础医学研究所北京100850

含信号肽的可溶性人干细胞因子（ｈＳＣＦ）ｃＤＮＡ基因重组于杆状病毒转移载体ｐＶＬ９４１中，重组转移载体ｐＶＬ９４１ＳＣＦ与野生型苜蓿夜蛾核型多角体病毒（ＡｃＮＰＶ）ＤＮＡ共转染草地夜蛾细胞Ｓｆ９后，通过体内同源... 详细信息

含信号肽的可溶性人干细胞因子（ｈＳＣＦ）ｃＤＮＡ基因重组于杆状病毒转移载体ｐＶＬ９４１中，重组转移载体ｐＶＬ９４１ＳＣＦ与野生型苜蓿夜蛾核型多角体病毒（ＡｃＮＰＶ）ＤＮＡ共转染草地夜蛾细胞Ｓｆ９后，通过体内同源重组构建了重组病毒ＡｃＮＰＶＳＣＦ。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交表明重组病毒基因组中含有ｈＳＣＦ基因片段。重组病毒感染单层Ｓｆ９细胞后，表达产物分泌到胞外培养液中。用ＭＴＴ比色法和ＴＦ１细胞株测定表达产物与ＩＬ３的协同效应，测得感染重组病毒的培养细胞第三天表达量为１９７０ｕｎｉｔｓ／ｍＬ培养液。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ分析可见分子量为１８ ×１０３、２０ ×１０３和２２ ×１０３三条带。

关键词：人干细胞因子 AcNPV 昆虫细胞表达造血功能

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

噬菌体表面展示文库筛选人干细胞因子模拟肽

中国医学科学院学报 2011年第4期33卷 351-356页

作者：苏林孔燕刘长征杨克恭陈松森中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 北京大学临床肿瘤学院北京肿瘤医院北京市肿瘤防治研究所肾癌和黑色素瘤内科北京100036

目的用噬菌体表面展示文库筛选具有人干细胞因子(hSCF)生物学活性的模拟肽。方法采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)从噬菌体环七肽库和十二肽库筛选与重组hSCF受体(rc-kit/Ig1-3)有较高亲和力的噬菌体克隆,提取噬菌体单链DNA进行序列测定,... 详细信息

目的用噬菌体表面展示文库筛选具有人干细胞因子(hSCF)生物学活性的模拟肽。方法采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)从噬菌体环七肽库和十二肽库筛选与重组hSCF受体(rc-kit/Ig1-3)有较高亲和力的噬菌体克隆,提取噬菌体单链DNA进行序列测定,根据序列测定结果合成阳性小肽,四甲基偶氮噻唑盐(MTT)法检测合成小肽刺激UT-7细胞增殖的活性。结果经3轮筛选获得11个来源于环七肽库和8个来源于十二肽库与rc-kit/Ig1-3结合活性较高的噬菌体克隆,DNA测序结果显示环七肽库筛选到1个共有序列DPSPHTH,十二肽库没有筛选到共有序列。序列比对分析显示,这些小肽与hSCF没有同源序列。MTT法测定结果表明,合成的4个小肽均能促进UT-7细胞增殖,其中CE16和LE20刺激效果明显。结论获得4个具有较高hSCF生物学活性的模拟肽。

关键词：噬菌体表面展示文库人干细胞因子模拟肽筛选酶联免疫吸附测定法

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

重组人干细胞因子的纯化

中国生物化学与分子生物学报 2004年第6期20卷 821-826页

作者：吴军巩新唱韶红赵志虎马清钧军事医学科学院生物工程研究所北京100071

干细胞因子 (SCF)是一种重要的造血生长因子 ,它在自体造血干细胞动员、肿瘤放疗化疗的辅助治疗、贫血和其它血液病的治疗上具有良好的应用前景 .为建立一种实用的rhSCF制备工艺 ,从表达rhSCF的工程菌分离包涵体 ,用尿素变性 ,低浓度尿... 详细信息

干细胞因子 (SCF)是一种重要的造血生长因子 ,它在自体造血干细胞动员、肿瘤放疗化疗的辅助治疗、贫血和其它血液病的治疗上具有良好的应用前景 .为建立一种实用的rhSCF制备工艺 ,从表达rhSCF的工程菌分离包涵体 ,用尿素变性 ,低浓度尿素溶液稀释复性 .复性液中的rhSCF经离子交换层析吸附、浓缩 ,凝胶排阻层析分离去除共价二聚体和疏水层析精纯化 ,获得纯化的rhSCF .纯化的rhSCF纯度大于 95 % ,回收率为 4 7% ,可促进人红白血病细胞TF - 1的生长 ,比活性为 0 .9× 10 6U mg ,与英国NIBSC的rhSCF标准品相似 .上述结果表明 ,所建立的制备高纯度rhSCF工艺高效简便。

关键词：人干细胞因子表达与纯化变性与复性