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人工蛹虫草中核苷类化学成分的研究

中药材 2007年第8期30卷 957-958页

作者：麻兵继阮元刘吉开河南农业大学农学院中药材系河南郑州450002 中国科学院昆明植物研究所云南昆明650204

目的:研究人工蛹虫草Cordyceps militaris中核苷类化学成分。方法:建立人工蛹虫草中核苷类化合物的提取方法并用色谱水法分离各个核苷类化合物。结果:分离鉴定了4个化合物,分别是尿嘧啶核苷(1)、腺嘌呤核苷(2)、鸟嘌呤核苷(3)和酪氨酸(4... 详细信息

目的:研究人工蛹虫草Cordyceps militaris中核苷类化学成分。方法:建立人工蛹虫草中核苷类化合物的提取方法并用色谱水法分离各个核苷类化合物。结果:分离鉴定了4个化合物,分别是尿嘧啶核苷(1)、腺嘌呤核苷(2)、鸟嘌呤核苷(3)和酪氨酸(4)。结论:从核苷类物质分析来看,该人工蛹虫草菌丝体中核苷类物质含量丰富,主要为化合物1、2、3,三者总和约占菌丝体干重的1.3%。

关键词：人工蛹虫草菌丝体核苷

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人工蛹虫草药材高效毛细管电泳指纹图谱研究

中药材 2007年第1期30卷 28-30页

作者：叶斌宋丽艳于荣敏暨南大学药学院广东广州510632

目的:利用高效毛细管电泳(HPCE)技术建立人工蛹虫草药材的指纹图谱。方法:采用50 cm×75μm毛细管柱,以0.5 mmol/L硼砂溶液为缓冲液,运行电压为20 kv,检测波长为254 nm,柱温25℃。结果:建立的指纹图谱中共有11个共有峰,且方法学考察符... 详细信息

目的:利用高效毛细管电泳(HPCE)技术建立人工蛹虫草药材的指纹图谱。方法:采用50 cm×75μm毛细管柱,以0.5 mmol/L硼砂溶液为缓冲液,运行电压为20 kv,检测波长为254 nm,柱温25℃。结果:建立的指纹图谱中共有11个共有峰,且方法学考察符合规定的标准。结论:该法准确简便,可作为控制人工蛹虫草中药材内在质量的有效手段。

关键词：人工蛹虫草高效毛细管电泳指纹图谱

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人工蛹虫草化学成分研究

中草药 2004年第5期35卷 493-495页

作者：王刚麻兵继刘吉开安徽中医学院药学系安徽合肥230038 中国科学院昆明植物研究所云南昆明650205

人工蛹虫草Cordyceps militaris(L.)Link又称北冬虫夏草,与冬虫夏草同属麦角菌科虫草属.北方民间曾把蛹虫草作为冬虫夏草应用[1].记载其"性平,味甘,有益肺肾,补精髓,止血化痰"等功效,用于肺结核及老人虚弱和贫血等症,为珍贵的中药材[2]... 详细信息

人工蛹虫草Cordyceps militaris(L.)Link又称北冬虫夏草,与冬虫夏草同属麦角菌科虫草属.北方民间曾把蛹虫草作为冬虫夏草应用[1].记载其"性平,味甘,有益肺肾,补精髓,止血化痰"等功效,用于肺结核及老人虚弱和贫血等症,为珍贵的中药材[2].目前由于人们疯狂搜寻挖掘冬虫夏草,导致生态环境的破坏,因而与冬虫夏草齐名的蛹虫草在国际上日益受到人们的关注,它的开发与生产也为我国开辟了新的营养源和药源.对于冬虫夏草化学成分的研究较多,而对人工蛹虫草化学成分研究较少,仅见姜弘等[3]从人工蛹虫草子实体中分离得到8个化合物,分别为核苷类、甾醇和脂肪酸类化合物.我们现报道从其人工培养的子实体中得到7个化合物,其中化合物Ⅰ,Ⅴ～Ⅶ,为首次从该真菌中分离得到.本实验通过对人工蛹虫草化学成分的系统研究,对比两者的化学成分的异同,为人工蛹虫草代替冬虫夏草药用提供研究基础.

关键词：人工蛹虫草化学成分中药提取分离

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人工蛹虫草总核苷提取工艺优化考察

中药材 2011年第4期34卷 644-646页

作者：叶斌李婷菲刘浩于荣敏广东食品药品职业学院广东广州510520 广东省食品药品职业技术学校广东广州510663 暨南大学药学院广东广州510632

目的:优化考察利用大孔吸附树脂纯化提取分离人工蛹虫草总核苷的工艺方法。方法:通过正交设计优化总核苷的提取分离条件,用高效液相色谱分析和检测各组分。结果:最佳提取条件为样品在10倍量水中80℃水浴提取3次,每次2 h,滤液合并,减压... 详细信息

目的:优化考察利用大孔吸附树脂纯化提取分离人工蛹虫草总核苷的工艺方法。方法:通过正交设计优化总核苷的提取分离条件,用高效液相色谱分析和检测各组分。结果:最佳提取条件为样品在10倍量水中80℃水浴提取3次,每次2 h,滤液合并,减压浓缩后上AB-8弱极性大孔树脂柱,蒸馏水洗脱除去多糖类大分子物质。以30%乙醇洗脱得总核苷提取液,减压浓缩,真空干燥后得到人工蛹虫草总核苷。结论:利用色谱法对提取过程中与提取液前体及中间体进行了比较分析,结果显示该工艺具有简单、快速、高效等优点。

关键词：人工蛹虫草提取工艺大孔树脂总核苷

超声辅助离子液体微萃取-反相液相色谱法测定人工蛹虫草活性成分

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食品科学 2017年第8期38卷 179-183页

作者：张伟张勇尹震花康文艺黄河科技学院郑州市药用资源研究重点实验室河南郑州450063

建立离子液体[C_4MIM]PF_6萃取剂,结合超声辅助萃取,利用高效液相色谱法同时测定人工蛹虫草中尿苷、肌苷、鸟苷、腺苷及虫草素含量。采用Inert Sustain C_(18)色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相为甲醇、0.02 mol/L KH_2PO_4溶液梯度洗... 详细信息

建立离子液体[C_4MIM]PF_6萃取剂,结合超声辅助萃取,利用高效液相色谱法同时测定人工蛹虫草中尿苷、肌苷、鸟苷、腺苷及虫草素含量。采用Inert Sustain C_(18)色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相为甲醇、0.02 mol/L KH_2PO_4溶液梯度洗脱,洗脱流速为0.6 m L/min,柱温30℃,检测波长254 nm。5种成分的最佳萃取条件为0.7 mol/L[C_4MIM]PF_6-20%甲醇溶液、过50目筛、固液比1∶50(g/L)、超声时间50 min、离心转速3 000 r/min。线性范围分别为0.568~3.408、0.284~1.704、0.264~1.584、0.232~1.392、1.672~10.032 mg/m L,相关系数均在0.999 8以上,加样回收率为97.6%~101.5%,相对标准偏差为1.43%~1.97%。所建方法快速简便、准确可靠、重复性良好,可用于人工蛹虫草中核苷类成分的同时快速分析。

关键词：人工蛹虫草离子液体高效液相色谱法核苷类

人工蛹虫草与谷胱甘肽组方对酒精性肝损伤保护作用的实验研究

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毒理学杂志 2014年第6期28卷 466-467,471页

作者：颜燕谢玮郭婕杨非姚文环山东省疾病预防控制中心山东济南250014

目的研究人工蛹虫草与谷胱甘肽(GSH)组方对酒精性肝损伤的保护作用。方法将小鼠随机分为空白对照组、模型对照组、蛹虫草与GSH低、中、高剂量组(0.200、0.400和1.200 g/kg),灌胃给药,1次/d,连续30 d。实验末期采用50%乙醇一次灌胃,造成... 详细信息

目的研究人工蛹虫草与谷胱甘肽(GSH)组方对酒精性肝损伤的保护作用。方法将小鼠随机分为空白对照组、模型对照组、蛹虫草与GSH低、中、高剂量组(0.200、0.400和1.200 g/kg),灌胃给药,1次/d,连续30 d。实验末期采用50%乙醇一次灌胃,造成小鼠急性肝损伤模型。测定血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)水平,制作肝组织病理切片,测定肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)、三酰甘油(TG)含量。结果 0.400和1.200 g/kg剂量组ALT和AST活性、MDA和TG含量以及肝脏脂肪变性评分,明显低于模型对照组(P人工蛹虫草与GSH组方对乙醇所致急性肝损伤具有明显的保护作用。

关键词：人工蛹虫草 GSH 酒精肝损伤

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人工蛹虫草质量标准的建立与指纹图谱研究

人工蛹虫草质量标准的建立与指纹图谱研究

作者：苏颖西南大学

学位级别：硕士

蛹虫草,又名蚕蛹虫草、北冬虫夏草、北虫草等,是国内外公认的食药用真菌。它具有补肺益肾、抗疲劳耐缺氧、调节免疫功能、辅助抗肿瘤等作用。蛹虫草中的主要活性成分包括虫草素、虫草酸、虫草多糖等,还有丰富的维生素与氨基酸,以及多种... 详细信息

蛹虫草,又名蚕蛹虫草、北冬虫夏草、北虫草等,是国内外公认的食药用真菌。它具有补肺益肾、抗疲劳耐缺氧、调节免疫功能、辅助抗肿瘤等作用。蛹虫草中的主要活性成分包括虫草素、虫草酸、虫草多糖等,还有丰富的维生素与氨基酸,以及多种人体必需微量元素。蛹虫草因其易于规模化人工栽培、主要药用成分与冬虫夏草相近等优势成为冬虫夏草的优良替代品,可以在一定程度上解决野生冬虫夏草资源稀缺的状况。目前蛹虫草的人工栽培技术已经成熟,进入产业化生产阶段,但市场上的人工蛹虫草质量参差不齐,甚至常有假冒伪劣现象发生。中国药典至今也未收载人工蛹虫草质量控制标准。因此,建立人工蛹虫草质量标准,控制人工蛹虫草的品质,规范人工蛹虫草生产方式是势在必行的。本实验对10批人工蛹虫草的内在质量进行了全面系统的研究,建立起了科学合理可行的质量标准。主要内容如下： 1、人工蛹虫草的生药学鉴定以中国药典2010版为指导,对人工蛹虫草药材进行了性状观察、显微鉴别、薄层鉴别、水分、总灰分、酸不溶性灰分、水溶性浸出物、重金属含量检查,并根据测定结果,研究蛹虫草的内在质量,对人工蛹虫草上述指标的含量限度做出规定。 2、人工蛹虫草多糖含量的测定用蒽酮—硫酸比色法对10批蛹虫草药材中的多糖含量进行了测定,结果发现10批蛹虫草多糖含量差异十分显著,说明多糖含量受人工蛹虫草生长中的各种因素影响较大,含量不可控,未将其列入质量标准草案。 3、人工蛹虫草四种核苷类物质的含量测定以HPLC法对10批人工蛹虫草药材中所含的四种核苷类物质（虫草素、腺苷、腺嘌呤、尿苷）进行含量测定,建立起一个快速、简便、稳定的同时测定四种核苷类物质的方法。结果表明10批蛹虫草四种物质的含量均差异显著,虫草素和腺苷含量都较高,根据测定结果对四种核苷类物质的含量限度作了规定。 4、人工蛹虫草HPLC指纹图谱的建立以HPLC法建立了人工蛹虫草指纹图谱,对样品溶液提取方式、色谱条件都进行了考察与优化,得到的色谱图响应值高、基线平稳、分离度好,符合中药指纹图谱的技术要求。得到具有14个共有峰的指纹图谱,各批样品图谱与对照指纹图谱的相似度均在0.9以上。 5、人工蛹虫草质量标准的建立在全文实验研究的基础上,起草了人工蛹虫草质量标准,为人工蛹虫草药材的质量评价和未来药典收载该品种提供了科学依据。

关键词：人工蛹虫草质量标准指纹图谱

人工蛹虫草的液体发酵与血清药物化学的初步研究

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人工蛹虫草的液体发酵与血清药物化学的初步研究

作者：曹灵杰广东药科大学

学位级别：硕士

冬虫夏草是我国名贵的传统中药及保健品。蛹虫草别名北冬虫夏草,具有与冬虫夏草相似的活性成分和药理作用,有望成为代替冬虫夏草的新型真菌药源。蛹虫草市场需求巨大,野生资源稀缺,因此其开发研究成为近年来的热点问题。目前研究大多数... 详细信息

冬虫夏草是我国名贵的传统中药及保健品。蛹虫草别名北冬虫夏草,具有与冬虫夏草相似的活性成分和药理作用,有望成为代替冬虫夏草的新型真菌药源。蛹虫草市场需求巨大,野生资源稀缺,因此其开发研究成为近年来的热点问题。目前研究大多数集中在活性成分的提取与功能研究方面,对于蛹虫草液体发酵过程中活性成分的形成过程研究不多,同时蛹虫草在体内的药效物质基础还不明确。本论文选取蛹虫草菌种,对蛹虫草液体发酵过程中主要活性成分的代谢变化及液体发酵工艺进行研究,并在此基础上,通过对蛹虫草、蛹虫草菌丝体及蛹虫草液体发酵液的指纹图谱及其给药血清图谱进行相关性研究,分析蛹虫草及其液体发酵产物的入血移行成分,初步探讨其可能的药效物质基础。研究目的:1.研究蛹虫草液体发酵过程中主要活性成分的代谢变化,确定各类活性成分的最佳收集时间;2.对蛹虫草液体发酵条件进行优化,确定最佳发酵工艺;3.研究蛹虫草、蛹虫草菌丝体及蛹虫草液体发酵液的指纹图谱及其给药血清图谱的相关性,初步探讨其可能的药效物质基础。研究方法:1.蛹虫草液体发酵过程主要活性成分的代谢变化研究:选取蛹虫草菌种GIM 5.270,以菌丝体产量为指标,对蛹虫草液体发酵的基础培养基进行筛选。在此基础上,延长蛹虫草液体发酵时间,根据发酵体系中不同活性成分,采取相应的分析方法检测不同时间点菌丝体与发酵液中主要活性成分的含量:其中总糖采用苯酚-硫酸法;还原糖采用DNS法;虫草酸采用比色法;虫草素与腺苷采用HPLC。并且根据发酵体系中蛹虫草活性成分的分布情况及代谢变化,确定各类活性成分的最佳收集时间。2.蛹虫草液体发酵过程中的工艺研究:在最佳收集时间的基础上,以菌丝体及胞外粗多糖产量为指标,采用单因素实验分别考察营养因子(包括碳源、碳源用量、氮源、复合氮源比例、氮源用量、无机盐比例、无机盐用量、VB1用量)及培养条件(温度、摇床转速、p H值、装液量)对活性成分产量的影响,并在此基础上,通过营养因子正交实验和培养条件正交实验对液体发酵工艺进行优化,筛选蛹虫草的最佳液体发酵工艺。3.蛹虫草血清药物化学的初步研究:首先通过对洗脱梯度、检测波长、柱温、流动相、洗脱速度、上样体积的筛选,建立蛹虫草药材的HPLC指纹图谱分析方法。随后对10批次蛹虫草提取液进行HPLC指纹图谱相似度评价,建立蛹虫草对照指纹图谱,并进行方法学验证,同时建立人工培养的菌丝体、发酵液相应的对照指纹图谱,对三类产物进行质量比对分析。在此基础上,将蛹虫草三类产物提取液分别进行大鼠灌胃给药,获得给药血清,使用与蛹虫草指纹图谱相同的色谱条件,测定给药血清的HPLC指纹图谱,并与对照指纹图谱进行比对,分析入血移行成分。研究结果:1.蛹虫草液体发酵过程主要活性成分的代谢变化研究:蛹虫草液体发酵基础培养基的筛选结果显示,马铃薯综合PDA培养基的菌丝体产量最高。蛹虫草液体发酵过程中菌丝体与发酵液中的主要活性成分检测结果显示:随着时间的进行,菌丝体越来越多,发酵液越来越澄清;发酵体系中虫草多糖与虫草酸含量均呈先增高后降低的趋势,其最佳收集时间在8 d左右;腺苷含量呈逐渐降低趋势,最佳收集时间在5 d左右;虫草素含量呈逐渐增高趋势,最佳收集时间在15 d左右。2.蛹虫草液体发酵过程中的工艺研究:单因素实验与正交实验结果显示蛹虫草液体发酵培养基的最佳营养因子为:20%马铃薯汁1 L,葡萄糖20 g,蛋白胨16 g,酵母粉5 g,KH2PO4 2.5 g,Mg SO4 2 g,VB1 16 mg;最佳培养条件为:21℃,150 r,p H 6.0(自然),装液量90 m L(300 m L锥形瓶),无光照。在此工艺下,菌丝体与粗多糖的综合产量可达到11.22 g/L。3.蛹虫草血清药物化学的初步研究:HPLC检测确定蛹虫草指纹图谱分析方法为:Age La Venusi L ASB C18(5 um,4.6×150 mm)色谱柱;流动相甲醇-水;检测波长260 nm;流速1.0 ml/min;柱温25℃;进样量10 u L;50 min梯度洗脱。采用相似度评价软件对10批次蛹虫草提取液指纹图谱进行处理,得到蛹虫草对照指纹图谱进行比对相似度均>0.9。同时建立了菌丝体与发酵液指纹图谱,三类产物中均可观察到腺苷峰与虫草素峰,菌丝体中腺苷含量更高,发酵液中则虫草素含量更高,菌丝体与蛹虫草之间的共有峰更多。大鼠给药血清HPLC指纹图谱与对照指纹图谱比对分析结果显示,蛹虫草给药血清指纹图谱中标定了7个移行成分在空白血清中未出现,其中5个为原型成分,2个为代谢或应激产物成分;菌丝体给药血清中标定了6个移行成分在空白血清中未出现,都为原型成分;发酵液给药血清中标定了7个移行成分在空白血清中未出现,其中5个为原型成分,2个为代谢或应激产物成分,其中在三类产物提取液中均有2个原型成分分别被指认为腺

关键词：人工蛹虫草液体发酵发酵工艺指纹图谱血清药物化学

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人工蛹虫草质量标准及指纹图谱研究

人工蛹虫草质量标准及指纹图谱研究

作者：王瑞华华中科技大学

学位级别：硕士

蛹虫草,又名北冬虫夏草,其功效类似于野生的冬虫夏草,具有补肺益肾、止血化痰、抗疲劳耐缺氧、调节免疫、辅助抗肿瘤等作用。由于其对自然生长环境要求不高,人工培育较为成功,有望成为冬虫夏草的替代品而造福于人类。目前市场上有较多... 详细信息

蛹虫草,又名北冬虫夏草,其功效类似于野生的冬虫夏草,具有补肺益肾、止血化痰、抗疲劳耐缺氧、调节免疫、辅助抗肿瘤等作用。由于其对自然生长环境要求不高,人工培育较为成功,有望成为冬虫夏草的替代品而造福于人类。目前市场上有较多人工培育的蛹虫草,但无统一规范的质量控制方法,中国药典中也没有关于蛹虫草质量控制的标准。为了确保人工蛹虫草合理有效的应用,使其质量评价有具体的量化指标,本文以大米为培养基的蛹虫草子实体为研究对象,系统地建立了药材的质量标准,并采用了包括指纹图谱在内的质量控制手段,为人工蛹虫草的质量控制研究提供了可以借鉴的思路和方法,为以后药材的质量评价提供了相应的依据。本论文按照2005版《中国药典》中相关规定,系统地研究了人工蛹虫草质量控制的各项指标,包括性状、鉴别、检查及含量测定等项。运用正交试验设计筛选腺苷和虫草素的最佳提取条件,确定制备方法为:20%甲醇30倍,超声提取10min;采用高效液相色谱法同时对腺苷和虫草素进行含量测定,腺苷在23.2 ng～464ng的范围内线性关系良好(r = 0.9999),平均加样回收率为98.92%(RSD=1.17%),虫草素在30ng～600ng的范围内线性关系良好(r = 0.9999),平均加样回收率为99.37%(RSD=1.42%)。结果表明该提取和测定方法操作简单,重复性好,结果准确可靠,为评价药材质量提供了依据。按照《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求(暂行)》中相关规定,采用HPLC/DAD法制定人工蛹虫草药材的指纹图谱。通过分析方法的建立,确定采用Agilent TC–18 (5μm,4.6×250mm)色谱柱,甲醇–0.02mol/L KH2PO4溶液梯度洗脱,分析时间60min,检测波长260nm,进样量10μL,流速1.0mL/min,柱温30℃的色谱指纹图谱条件,经方法学考察证明该方法准确可靠。对12批人工蛹虫草样品进行指纹图谱分析,标定了15个共有峰,并对其中的尿苷、腺苷、虫草素色谱峰进行了指认。采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》计算指纹图谱相似度,结果12批蛹虫草与对照指纹图谱的相似度均在0.90以上,表明各批次人工蛹虫草之间具有较好的一致性。对15批不同产地的人工蛹虫草进行HPLC指纹图谱分析,将所得特征数据利用系统聚类分析方法进行分类,分析结果将15批药材分为2类,其中I类为推荐品,II类为非推荐品。在此基础上采用逐步判别分析法,建立典则判别函数和Bayes判别函数,选择交互验证法对判别函数的效果进行验证,结果表明判别相符率达100%。两类判别函数的建立,为未知样品的鉴定提供了一个准确、快捷的工具。本研究系统地建立了人工蛹虫草药材的质量评价体系,为全面、科学、有效地控制其质量奠定了理论基础。

关键词：人工蛹虫草质量标准指纹图谱