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人乳牙牙髓干细胞膜片在组织工程牙髓再生中的实验研究

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中国美容医学 2022年第12期31卷 116-120页

作者：谢娜陆磊姬小婷王丹杨唐成芳李子夏胡妍李旋西安医学院口腔医学院陕西西安710021 陕西中医药大学附属医院口腔科陕西咸阳712000

目的:选用人乳牙牙髓干细胞(Stem cells derived from exfoliated deciduous teeth,SHED)作为种子细胞构建细胞膜片,探索适宜SHED进行牙髓再生所需的微环境,并且比较人乳牙牙髓干细胞膜片和细胞-聚乙丙交酯(PLGA)复合物(SHED-PLGA)两种... 详细信息

目的:选用人乳牙牙髓干细胞(Stem cells derived from exfoliated deciduous teeth,SHED)作为种子细胞构建细胞膜片,探索适宜SHED进行牙髓再生所需的微环境,并且比较人乳牙牙髓干细胞膜片和细胞-聚乙丙交酯(PLGA)复合物(SHED-PLGA)两种不同的构建方法在组织工程牙髓再生中的效果。方法:采用酶解组织块法培养SHED,有限稀释法进行纯化,条件诱导液诱导SHED细胞膜片,并将其置于处理过的牙本质基质片段的根管内,在裸鼠体内异位构建年轻恒牙牙髓再生的实验模型。结果:制备的牙本质基质片段分别负载SHED-PLGA复合物和SHED细胞膜片后在裸鼠体内异位移植3个月,经免疫组化染色后可观察到牙本质基质片段的根管内壁有一层新形成的牙本质样基质和单层不连续排列的成牙本质细胞样细胞,通过灰度扫描分析可知:SHED细胞膜片组的组织生成量明显高于SHED-PLGA组。结论:利用条件诱导液可以形成SHED细胞膜片,SHED细胞膜片和SHED-PLGA均可在体内形成牙髓-牙本质复合体样结构,SHED细胞膜片组的组织生成量明显高于SHEDPLGA组,细胞膜片可以为牙髓再生提供新的实验方法。

关键词：组织工程人乳牙牙髓干细胞支架材料细胞膜片牙髓再生

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人乳牙牙髓干细胞的研究进展

中国细胞生物学学报 2018年第5期40卷 813-819页

作者：张雪芬刘军权浙江卫未生物医药科技有限公司杭州金域医学检验所杭州310053

人乳牙牙髓干细胞具较强的增殖能力及分化成身体各种类型细胞的潜能,组织来源易得,处理方便,是细胞治疗和再生医学所需干细胞的理想来源。该文就其生物学特性、临床前研究及未来前景作一综述。

关键词：人乳牙牙髓干细胞间充质干细胞多向分化组织工程再生医学

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人乳牙牙髓干细胞治疗肝硬化小鼠模型的研究

肝脏 2021年第5期26卷 510-513页

作者：陆观珠包玉洁白玉盘焉雷许洁上海交通大学医学院附属第九人民医院感染科 200011

目的研究人乳牙牙髓干细胞(SHED)治疗肝硬化小鼠的效果。方法建立CCl4诱导的肝硬化模型,治疗组和对照组小鼠分别经尾静脉注射SHED和0.9%NaCl溶液,4周后评价肝功能指标及肝脏病理学表现。结果SHED治疗组与对照组小鼠总胆红素为(4.73±0.... 详细信息

目的研究人乳牙牙髓干细胞(SHED)治疗肝硬化小鼠的效果。方法建立CCl4诱导的肝硬化模型,治疗组和对照组小鼠分别经尾静脉注射SHED和0.9%NaCl溶液,4周后评价肝功能指标及肝脏病理学表现。结果SHED治疗组与对照组小鼠总胆红素为(4.73±0.06)μmol/L比(6.27±0.50)μmol/L、ALT为(48.33±5.13)U/L比(64.33±3.06)U/L、AST为(107.67±17.56)U/L比(149.00±7.55)U/L和碱性磷酸酶为(142.00±28.93)mmol/L比(240.00±30.51)mmol/L,均较对照组显著好转。治疗组小鼠的体质量为(25.80±1.02)g比(22.86±0.97)g、肝脏湿重为(2.16±0.11)g比(1.88±0.15)g均较对照组显著增加,差异均有统计学意义(t=3.347、4.668,均P<0.05)。SHED治疗组小鼠肝脏组织纤维化及炎症浸润程度较对照组明显改善。结论在肝硬化小鼠模型中,经SHED治疗组小鼠的肝功能及肝脏病理学表现较对照组显著改善。提示SHED对肝硬化具有治疗作用。

关键词：肝硬化肝纤维化人乳牙牙髓干细胞动物模型

SIRT 1通过下调PPAR-γ受体提升人乳牙牙髓干细胞骨向分化效能

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口腔医学研究 2022年第2期38卷 169-175页

作者：曹威刘梦佳张清彬广州医科大学附属口腔医院颞下颌关节科·广东省口腔组织修复与重建工程技术研究中心·广州市口腔再生医学基础与应用研究重点实验室广东广州510182 广州医科大学基础医学院人体解剖学教研室广东广州511436

目的:研究SIRT1对人乳牙牙髓干细胞(SHEDs)成骨分化效能的影响。方法:选取特异性SIRT1激活剂SRT1720和抑制剂EX527,预处理SHEDs 3 d后作为工作细胞用于实验。CCK-8实验检测SRT1720和EX527与SHEDs共培养1、2、3、7 d后的细胞增殖能力变... 详细信息

目的:研究SIRT1对人乳牙牙髓干细胞(SHEDs)成骨分化效能的影响。方法:选取特异性SIRT1激活剂SRT1720和抑制剂EX527,预处理SHEDs 3 d后作为工作细胞用于实验。CCK-8实验检测SRT1720和EX527与SHEDs共培养1、2、3、7 d后的细胞增殖能力变化。筛选出最佳浓度为0.5μmol/L的SRT1720和EX527溶液,利用成骨诱导培养基诱导SHEDs骨向分化。通过碱性磷酸酶染色及定量检测,茜素红矿化结节染色等方法分别检测早、晚期成骨分化,通过RT-PCR检测骨向分化标志物ALP、Runx2、骨桥蛋白、Ⅰ型胶原、骨钙蛋白以及SIRT1、PPAR-γ等相关基因及蛋白表达水平,研究SIRT1调控SHEDs体外骨向分化的可能机制。结果:SIRT1激活剂组骨向分化标志物基因mRNA较SIRT1抑制剂组增强,表明随着SIRT1表达上调,SHEDs的成骨分化效能也一并上调,而PPAR-γ受体相应下调。结论:SIRT1的表达与SHEDs的骨向分化能力呈正相关,SIRT1促进骨向分化的作用与BMP信号通路中的PPAR-γ受体下调密切相关。

关键词： SIRT1 人乳牙牙髓干细胞 PPAR-γ 骨向分化

白藜芦醇促进人乳牙牙髓干细胞的增殖和成骨分化

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中国组织工程研究 2023年第19期27卷 3011-3016页

作者：岳海云孙银雪毕迎春解放军第九六〇医院基础医学实验室山东省济南市250031 山东中医药大学第一临床医学院山东省济南市250355 解放军第九六〇医院口腔科山东省济南市250031

背景:白藜芦醇是一种天然非黄酮类多酚化合物。研究表明,白藜芦醇具有抗氧化、抗炎、抗衰老和抗肿瘤等多种生物活性,并且能促进骨髓间充质干细胞的成骨分化,但其是否能调节乳牙牙髓干细胞的成骨分化尚不清楚。目的:研究白藜芦醇对人乳... 详细信息

背景:白藜芦醇是一种天然非黄酮类多酚化合物。研究表明,白藜芦醇具有抗氧化、抗炎、抗衰老和抗肿瘤等多种生物活性,并且能促进骨髓间充质干细胞的成骨分化,但其是否能调节乳牙牙髓干细胞的成骨分化尚不清楚。目的:研究白藜芦醇对人乳牙牙髓干细胞增殖和成骨分化能力的影响。方法:组织块法分离培养人乳牙牙髓干细胞,不同浓度的白藜芦醇处理成骨诱导的人乳牙牙髓干细胞,CCK-8检测细胞活性,茜素红染色检测矿化结节数量,RT-qPCR检测成骨相关基因的mRNA表达及Western blot检测Runt相关转录因子2的蛋白水平。结果与结论:①CCK-8检测结果显示,处理第3天时,较高浓度(20,40,80,100μmol/L)白藜芦醇显著抑制细胞增殖,因此,后续实验中选用1,5,10μmol/L白藜芦醇处理乳牙牙髓干细胞,检测其对成骨分化的作用;②与成骨诱导对照组相比,10μmol/L白藜芦醇组乳牙牙髓干细胞的矿化结节数量显著增多;③与成骨诱导对照组相比,10μmol/L白藜芦醇组乳牙牙髓干细胞的碱性磷酸酶、Runt相关转录因子2和骨钙素的mRNA表达量升高;④与成骨诱导对照组相比,白藜芦醇组乳牙牙髓干细胞的Runt相关转录因子2蛋白水平呈浓度依赖性增加;⑤结果表明,适宜浓度的白藜芦醇可提高人乳牙牙髓干细胞的增殖和成骨分化能力。

关键词：干细胞间充质干细胞牙髓干细胞人乳牙牙髓干细胞白藜芦醇成骨分化

人乳牙牙髓干细胞对干燥综合征患者CD4^+T细胞的免疫抑制效应

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同济大学学报（医学版） 2017年第1期38卷 12-17页

作者：黄琬雪阮光峰王艳青汤建平同济大学附属同济医院风湿免疫科上海200065

目的探讨在体外人乳牙牙髓干细胞(stem cells from human exfoliated deciduous teeth,SHED)及其联合IL-6抗体对干燥综合征患者(Sj?gren syndrome,SS)外周血活化的CD4^+T细胞的免疫抑制效应。方法培养并鉴定SHED;流式细胞术检测健康者... 详细信息

目的探讨在体外人乳牙牙髓干细胞(stem cells from human exfoliated deciduous teeth,SHED)及其联合IL-6抗体对干燥综合征患者(Sj?gren syndrome,SS)外周血活化的CD4^+T细胞的免疫抑制效应。方法培养并鉴定SHED;流式细胞术检测健康者和SS患者外周血CD4^+T细胞中Th1、Th2、Th17、Treg及Tfh的比例;将健康者和SS患者PBMC各自单独培养或与SHED共培养,ELISA法检测培养上清液中IL-6浓度,在各组中添加或不添加IL-6抗体,72 h后流式细胞术检测CD4^+T细胞增殖情况。结果 SS患者外周血CD4^+T细胞中Th17及Tfh比例较健康者升高(P细胞中Th2的比例(P细胞的增殖,降低SS患者CD4^+T细胞中Th17的比例且增加Treg的比例;IL-6抗体可降低与SHED共培养的SS患者PBMC中CD4^+T细胞Th2亚型比例。

关键词：干燥综合征人乳牙牙髓干细胞 CD4+T细胞 /L-6抗体

miR-20调控人乳牙牙髓干细胞向神经元样细胞的定向分化

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中国组织工程研究 2019年第21期23卷 3329-3335页

作者：邓轩阳芳唐西清赵焱南华大学附属第二医院口腔科湖南省衡阳市421001 三亚市人民医院口腔科海南省三亚市572000

背景:研究发现miR-20在促进骨髓间充质干细胞以及炎症牙周膜干细胞的成骨分化中具有重要意义,但其在牙髓干细胞向神经元细胞分化中的调节功能尚未完全阐明。目的:探讨miR-20调控骨形态发生蛋白信号通路诱导人乳牙牙髓干细胞向神经元样... 详细信息

背景:研究发现miR-20在促进骨髓间充质干细胞以及炎症牙周膜干细胞的成骨分化中具有重要意义,但其在牙髓干细胞向神经元细胞分化中的调节功能尚未完全阐明。目的:探讨miR-20调控骨形态发生蛋白信号通路诱导人乳牙牙髓干细胞向神经元样细胞定向分化的机制。方法:从人脱落乳牙中分离纯化乳牙牙髓干细胞并进行神经诱导分化,观察诱导分化期间细胞形态变化,检测Nestin、NSE、miR-20、BMP2的表达。将乳牙牙髓干细胞分为如下5组:阴性对照组(转染阴性对照序列)、miR-20 mimic组(转染mi R-20模拟物48 h)、mi R-20 inhibitor组(转染miR-20抑制物48 h)、通路抑制剂组(骨形态发生蛋白通路抑制剂处理细胞10 d)、联合组(转染mi R-20模拟物并且在转染后24 h在培养基中添加通路抑制剂处理细胞10 d)。各组乳牙牙髓干细胞在神经诱导分化第12天,采用Real-time PCR和Western blot检测BMP2、BMPR2、Nestin和NSE的m RNA和蛋白水平,免疫荧光染色观察Ⅲβ-tubulin的表达,高尔基染色检测神经元细胞树突棘数目。结果与结论:①乳牙牙髓干细胞随时间的延长逐渐分化为神经元样细胞,Nestin表达在分化期间先增高后降低,NSE、mi R-20和BMP2表达水平逐渐升高;②与阴性对照组相比,mi R-20 mimic组BMP2、BMPR2、Ⅲβ-tubulin、Nestin和NSE水平上调并且诱导神经元树突棘生成;而miR-20inhibitor组和通路抑制剂组BMP2、BMPR2、Ⅲβ-tubulin、Nestin和NSE蛋白表达下调并抑制神经元树突棘生成;骨形态发生蛋白通路抑制剂能逆转miR-20对乳牙牙髓干细胞神经分化的诱导。③上述结果表明,mi R-20能够通过激活骨形态发生蛋白信号通路从而诱导乳牙牙髓干细胞向神经元样细胞定向分化。

关键词：人乳牙牙髓干细胞神经元细胞 miR-20 神经向诱导分化骨形态发生蛋白信号通路 Ⅲβ-tubulin 神经元细胞树突棘海南省自然科学基金

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人乳牙牙髓干细胞分化的研究进展

口腔颌面外科杂志 2012年第2期22卷 136-139页

作者：郝永明邹德荣上海交通大学医学院附属第六人民医院口腔科上海200233

人乳牙牙髓干细胞（stem cells from human exfoliated deciduous teeth,SHED）是口腔来源的干细胞,因高度增殖能力和多分化的潜能,而成为再生医学的热点。本文就其多方向分化潜能进行综述。

关键词：人乳牙牙髓干细胞多分化再生医学

人乳牙牙髓干细胞体外表达和分泌胶质细胞源性神经营养因子的研究

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北京口腔医学 2011年第5期19卷 245-248页

作者：王劲松汪璇王松灵首都医科大学医学实验与测试中心北京100069 首都医科大学基础医学院生理学系教育部神经变性病重点实验室首都医科大学口腔医学院涎腺疾病中心及基因治疗牙再生分子生物学实验室

目的研究人乳牙牙髓干细胞(SHED)表达和分泌胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)的能力及规律,为进一步探讨SHED治疗帕金森病的作用机制提供依据。方法通过酶消化法体外分离培养人乳牙牙髓中的干细胞,当传代至第3代时,加入神经干细胞的特殊... 详细信息

目的研究人乳牙牙髓干细胞(SHED)表达和分泌胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)的能力及规律,为进一步探讨SHED治疗帕金森病的作用机制提供依据。方法通过酶消化法体外分离培养人乳牙牙髓中的干细胞,当传代至第3代时,加入神经干细胞的特殊培养基Neurobasal A和细胞因子进行神经球诱导培养,通过Real-Time PCR、免疫荧光和ELISA等方法,分别从mRNA和蛋白水平检测体外培养SHED和神经球中GDNF的表达。结果 Real-Time PCR检测结果显示,在mRNA水平,SHED和神经球中都有GDNF的表达。在蛋白水平,免疫荧光结果可见SHED和神经球中都有GDNF的表达;采用ELISA法在培养第3天的SHED培养液和神经球的培养上清中均可检测到GDNF,并随着时间的延长,培养液中GDNF浓度明显升高。结论 SHED具有表达和分泌GDNF的能力。

关键词：人乳牙牙髓干细胞神经球胶质细胞源性神经营养因子