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植物病理学报 2019年第1期49卷 101-112页

作者：杨雅云张敦宇陈玲陈越殷富有蒋春苗肖素勤柯学余腾琼王波付坚钟巧芳陈功友程在全云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所云南省农业生物技术重点实验室农业部西南作物基因资源与种质创制重点实验室昆明650223 上海交通大学农业与生物学院上海200240

对云南药用野生稻7个不同居群的稻瘟病、纹枯病、白叶枯病和细菌性条斑病抗型表型进行鉴定,筛选抗源,并检测已克隆的抗稻瘟病、抗白叶枯病基因在它们中的存在情况。结果表明:用云南稻瘟病菌毒性菌株16t接种云南药用野生稻7个居群,除勐... 详细信息

对云南药用野生稻7个不同居群的稻瘟病、纹枯病、白叶枯病和细菌性条斑病抗型表型进行鉴定,筛选抗源,并检测已克隆的抗稻瘟病、抗白叶枯病基因在它们中的存在情况。结果表明:用云南稻瘟病菌毒性菌株16t接种云南药用野生稻7个居群,除勐海药野(7)表型为感病外,其他6个居群均为抗病;勐遮药用野生稻(4)和景纳上沟药用野生稻(1)分别不含Pib和Pi2基因片段,其他5个居群都含有Pib、Pi2、Pi9、Pid2、Pikp、Pis和Pi56等基因片段;所有的参试药用野生稻高抗纹枯病;除勐往药野(13)和澜沧孟矿药野(14)对细菌性条斑病菌菌株RS105表现为感病和勐遮药野(5)对菌株RS1-20表现为感病外,其他材料对菌株RS105和RS1-20都表现为抗病;云南白叶枯病菌强致病性菌株CX30-1、菲律宾菌株PXO99和PXO86对景纳上沟药用野生稻(1)和澜沧孟矿药用野生稻(14)具有强致病性,其他居群表现为抗病至中抗; 7个居群都含有Xa5、Xa13、Xa21基因片段。本文首次报道了云南药用野生稻多个居群类型对4种主要病害的抗性,这些结果为深度挖掘利用云南药用野生稻资源的有效抗病基因奠定了基础。

关键词：云南药用野生稻抗病性鉴定已克隆抗病基因

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云南药用野生稻BIBAC文库混合克隆池制备及筛选

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生物技术通报 2012年第2期28卷 117-120页

作者：刘艳平程在全殷富有余腾琼张敦宇郭怡卿张薇黄兴奇云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所昆明650223 云南大学生命科学学院昆明650091 云南省昭通市农科所昭通657000

在已构建完成的云南药用野生稻BIBAC(binary bacterial artificial chomosome)文库的基础上,将文库制备成一、二、三级混合克隆池,各级混合池的数量分别为3 360、140和14个。根据Xa21抗病基因序列设计1对特异引物,利用4步PCR法对文库混... 详细信息

在已构建完成的云南药用野生稻BIBAC(binary bacterial artificial chomosome)文库的基础上,将文库制备成一、二、三级混合克隆池,各级混合池的数量分别为3 360、140和14个。根据Xa21抗病基因序列设计1对特异引物,利用4步PCR法对文库混合克隆池进行逐级筛选,初步确定了3个抗病基因阳性克隆。为今后以PCR法高效利用云南药用野生稻BIBAC文库挖掘其优异基因奠定了良好的基础。

关键词：云南药用野生稻 BIABC文库混合克隆池 PCR筛选 Xa21基因

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云南药用野生稻BIBAC文库的构建及分析

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湖南农业大学学报（自然科学版） 2011年第1期37卷 17-21页

作者：侯思名张薇翟书华岑晓江黄兴奇程在全云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所云南昆明650205 昆明学院生命科学与技术系云南昆明650214 云南大学生命科学学院云南昆明650091

云南药用野生稻具有许多优良性状和有利基因,其CC基因组的优良基因很难通过有性杂交转移到栽培稻(AA基因组)上,但可以通过双元细菌人工染色体(BIBAC)以大片段的形式转化到栽培稻中。利用BIBAC2载体构建了云南药用野生稻基因组DNA文库,... 详细信息

云南药用野生稻具有许多优良性状和有利基因,其CC基因组的优良基因很难通过有性杂交转移到栽培稻(AA基因组)上,但可以通过双元细菌人工染色体(BIBAC)以大片段的形式转化到栽培稻中。利用BIBAC2载体构建了云南药用野生稻基因组DNA文库,该文库包含53 760个克隆,平均插入片段76 kb,保存在140块384孔板中,其库容相当于药用野生稻基因组的5.86倍。

关键词：云南药用野生稻双元细菌人工染色体基因组文库

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云南药用野生稻白叶枯病抗性相关蛋白筛选

云南药用野生稻白叶枯病抗性相关蛋白筛选

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作者：刘自单云南大学

学位级别：硕士

水稻是人类最主要的粮食作物之一。白叶枯病是水稻最重要的细菌性病害,每年对稻谷生产造成巨大损失。从具有广谱抗性的优异种质资源中挖掘抗白叶枯病基因并加以利用是最经济有效的措施之一。研究表明云南药用野生稻对白叶枯病具有很好... 详细信息

水稻是人类最主要的粮食作物之一。白叶枯病是水稻最重要的细菌性病害,每年对稻谷生产造成巨大损失。从具有广谱抗性的优异种质资源中挖掘抗白叶枯病基因并加以利用是最经济有效的措施之一。研究表明云南药用野生稻对白叶枯病具有很好的抗性。从抗性相关蛋白筛选鉴定可以为新抗性基因发掘提供十分有用的信息。本实验以具有抗性的云南药用野生稻为供试材料,并采用对供试材料具有不同反应的云南高原粳稻区白叶枯病菌株2001-28和18F,进行接种鉴定,同时设置用清水接种的对照;采用双向电泳-质谱技术分析两种反应类型中药用野生稻蛋白随时间(2h、24h、48h、72h、96h)变化情况,按设定在表达浓度上发生2倍以上变化蛋白界定为差异表达蛋白;观察相同时间点两种反应类型分别与对照比较的差异蛋白及两种反应类型之间的差异蛋白;从中挑选出表达较稳定、并与抗病性相关联的部分蛋白作为候选抗病相关蛋白进行质谱分析鉴定;根据Gene ontology数据库,分析候选抗病相关蛋白。研究结果如下： 1.两种反应类型中的差异蛋白数目随时间的变化规律与对照相比较,亲和反应中每个时间点(2h、24h、48h、72h、96h)得到的差异蛋白数目分别为：30、36、34、25、13个;相应地,非亲和反应中每个时间点得到的差异蛋白数目分别为：30、71、51、44、20个。差异蛋白数目随时间变化趋势均为先上升,然后逐渐下降;两种反应差异蛋白数目达最多的时刻均在24h;在同一时间点上表达差异蛋白数目均为非亲和反应远多于亲和反应。非亲和反应与亲和反应比较,每个时间点的差异蛋白数目分别为：29、65、44、38、19个,提示两种反应差异最大的时刻为24h左右。 2.差异蛋白质谱鉴定及功能分类抗病相关蛋白存在于非亲和反应和亲和反应中,为了更加全面而准确的筛选到在寄主抗病防御过程中起关键作用的蛋白,本次筛选出的25个蛋白点包括以下三个方面：(1)满足对照、亲和反应及非亲和反应三者之间均具有表达差异的差异蛋白点14个。(2)非亲和反应中特异表达的差异蛋白点6个(在亲和反应中不发生表达)。(3)亲和反应中特异表达的差异蛋白点5个(在非亲和反应中不发生表达)。将25个差异蛋白成功进行质谱鉴定并按其功能分为五类：与光合作用相关的蛋白共10个(40%);与抗逆胁迫相关的蛋白共11个(44%);与氮代谢相关的蛋白2个(8%);与糖酵解及核酸形成相关蛋白分别为1个(4%)。与对照相比,在11个与抗逆胁迫相关蛋白中,热休克蛋白、黄酮3‘-0-甲基转移酶1(Flavone3’-O-methyltransferase1)、R2R3-MYB转录因子这3个蛋白在非亲和反应中表现为特异上调,而在亲和反应中不表达;在亲和反应中特异下调的腈水解酶在非亲和反应中不表达;同时,在亲和反应中表达下调的类萌发素蛋白(germin-like protein)、肽基脯氨酰基顺反异构酶(peptidyl-prolyl-cis-transisomerase)、铁蛋白、、分子伴侣4个蛋白在非亲和反应中上调表达。从这一结果可以推测在非亲和反应中上调表达的抗逆胁迫相关蛋白可能通过三条途径使宿主获得抗性：①R2R3-MYB转录因子、黄酮3’-0-甲基转移酶1、腈水解酶和肽基脯氨酰基顺反异构酶调控产生次生代谢产物作为植物进行自身防御的关键物质。②以上有些次生代谢产物(如JA和SA)作为信号转导分子调控PR蛋白的表达来抵御病原菌的侵害。③过氧化物还原酶、铁蛋白、热休克蛋白、分子伴侣可能协同作用来抵抗病菌侵染时细胞内积累的ROS。肽基脯氨酰基顺反异构酶、黄酮3’-0-甲基转移酶1、R2R3-MYB转录因子和类萌发素蛋白可能只存在于药用野生稻与白叶枯病菌互作中并与药用野生稻的广谱性抗性紧密相关,值得进一步研究。

关键词：云南药用野生稻白叶枯病抗病相关蛋白蛋白组学

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