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二烯丙基一硫拮抗苯诱导小鼠白细胞降低效果研究

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中华劳动卫生职业病杂志 2019年第4期37卷 247-254页

作者：于婷厉铭黎显杰王琼刘志丹谢克勤山东大学公共卫生学院营养与毒理学系济南250012

目的研究二烯丙基一硫(DAS)拮抗苯诱导小鼠白细胞降低的效果。方法健康SPF雄性ICR小鼠90只,适应性饲养5 d后,随机分为空白对照组、苯模型组(1.30 g/kg)、苯+DAS低剂量组、苯+DAS中剂量组、苯+DAS高剂量组、DAS阳性对照组,每组15只。分... 详细信息

目的研究二烯丙基一硫(DAS)拮抗苯诱导小鼠白细胞降低的效果。方法健康SPF雄性ICR小鼠90只,适应性饲养5 d后,随机分为空白对照组、苯模型组(1.30 g/kg)、苯+DAS低剂量组、苯+DAS中剂量组、苯+DAS高剂量组、DAS阳性对照组,每组15只。分别给予苯+DAS低、中、高剂量干预组和DAS阳性对照组小鼠40、80、160、160 mg/kg DAS,其余两组给予等体积的玉米油。2 h后,苯模型组和各干预组动物均经口给予苯-玉米油混悬液,其余两组给予等体积玉米油。苯和DAS溶解于玉米油中。1次/d,连续4周。分别于第14、29天麻醉后取血,收集抗凝血检测血常规,处死后,取小鼠脾脏和胸腺,用于计算脏器系数及组织病理学检查。结果与空白对照组比较,苯模型组小鼠第14天外周血白细胞、淋巴细胞、单核细胞计数分别降低68.99%、71.72%、53.19%,差异均有统计学意义(P<0.05);与染毒第14天比较,苯模型组小鼠第29天淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞、红细胞、血红蛋白分别降低83.00%、81.03%、89.37%、20.84%、19.25%,差异均有统计学意义(P<0.05);与空白对照组比较,苯模型组脾脏重量、脾脏系数、脾脏白髓面积比、胸腺重量、胸腺系数、胸腺皮质面积比均明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与苯模型组比较,第14天苯+DAS高剂量组单核细胞、淋巴细胞分别增加136.36%、260.00%(P<0.05);与干预第14天比较,第29天苯+DAS低、中、高剂量组白细胞、淋巴细胞、红细胞、血小板、血红蛋白均明显增高,差异均有统计学意义(P<0.05);与苯模型组比较,苯+DAS高剂量组脾脏重量、脾脏系数、脾脏白髓面积比、胸腺重量、胸腺系数、胸腺皮质面积比均明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论DAS能有效拮抗苯诱导小鼠白细胞的降低。

关键词：二烯丙基一硫苯白细胞减少小鼠

二烯丙基一硫抑制苯诱导大鼠外周血白细胞减少的抗氧化机制

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中华劳动卫生职业病杂志 2019年第10期37卷 737-745页

作者：于婷王琼黎显杰厉铭刘志丹谢克勤山东大学公共卫生学院营养与毒理学系济南250012

目的研究二烯丙基一硫(DAS)拮抗苯诱导大鼠外周血白细胞(WBC)降低中抗氧化作用的相关机制。方法SPF级成年雄性SD大鼠60只,体重180~220 g,适应性喂养5 d后,随机分为空白对照组、DAS对照组、苯模型组以及苯+DAS低、中、高剂量组,每组10只... 详细信息

目的研究二烯丙基一硫(DAS)拮抗苯诱导大鼠外周血白细胞(WBC)降低中抗氧化作用的相关机制。方法SPF级成年雄性SD大鼠60只,体重180~220 g,适应性喂养5 d后,随机分为空白对照组、DAS对照组、苯模型组以及苯+DAS低、中、高剂量组,每组10只。DAS各剂量干预组和DAS对照组大鼠分别经口灌胃40、80、160、160 mg/kg·bw DAS,空白对照组和苯模型组给予等体积玉米油;2 h后,苯模型组和DAS各剂量干预组给予苯(1.3 g/kg·bw)-玉米油混合液(体积分数50%),空白对照组和DAS对照组给予等体积玉米油。1次/d,连续4周。提前1 d颈静脉取抗凝血进行外周血细胞计数;腹腔注射戊巴比妥(50 mg/kg·bw)麻醉大鼠,腹主动脉法取血并分离血清,低温剥离胸腺、脾脏和股骨,检测样品中氧化和抗氧化指标;分离一侧股骨进行骨髓中WBC计数。结果与空白对照组比较,苯模型组大鼠脾脏、胸腺体积减小,重量及脏器系数均降低(P二醛(MDA)浓度增加(P<0.05),总超氧化物歧化酶(T-SOD)活力、还原型谷胱甘肽(GSH)含量、还原型谷胱甘肽与氧化型谷胱甘肽比值(GSH/GSSG值)以及总抗氧化能力(T-AOC)水平均降低(P<0.05);与苯模型组比较,苯+DAS高剂量组MDA浓度降低(P<0.05),T-SOD活力、GSH含量、GSH/GSSG值以及T-AOC水平均增加(P<0.05)。与空白对照组比较,苯模型组大鼠脾脏中MDA浓度增加(P<0.05),GSH含量、GSH/GSSG值和T-AOC水平均降低(P<0.05);与苯模型组比较,DAS各剂量干预组MDA浓度均降低(P<0.05),苯+DAS高剂量组T-SOD活力和GSH/GSSG值以及DAS各剂量干预组GSH和T-AOC水平均增加(P<0.05)。与空白对照组比较,苯模型组大鼠骨髓细胞(BMCs)和外周血单个核细胞(PBMCs)中MDA浓度均增加(P<0.05),PBMCs中T-AOC水平降低(P<0.05);与苯模型组比较,DAS各剂量干预组BMCs和PBMCs中MDA浓度降低(P<0.05),苯+DAS高剂量组GSH含量和GSH/GSSG值均增加(P<0.05)。结论DAS拮抗苯诱导外周血WBC减少的机制可能与其抗氧化应激有关。

关键词：大鼠苯二烯丙基一硫白细胞减少氧化性应激骨髓细胞外周血单个核细胞

二烯丙基一硫对正己烷中毒大鼠周围神经损伤的干预效果

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中华劳动卫生职业病杂志 2020年第1期38卷 1-6页

作者：黎显杰王琼厉铭于婷刘志丹赵宁谢克勤山东大学毒理研究所济南250012

目的探讨二烯丙基一硫(DAS)对正己烷中毒大鼠周围神经损伤的干预效果。方法成年雄性Wistar大鼠68只,随机选取50只分为5组:空白对照组、DAS对照组(100 mg/kg·bw)、正己烷模型组、DAS低剂量干预组(50 mg/kg·bw)、DAS高剂量干预组(100 mg... 详细信息

目的探讨二烯丙基一硫(DAS)对正己烷中毒大鼠周围神经损伤的干预效果。方法成年雄性Wistar大鼠68只,随机选取50只分为5组:空白对照组、DAS对照组(100 mg/kg·bw)、正己烷模型组、DAS低剂量干预组(50 mg/kg·bw)、DAS高剂量干预组(100 mg/kg·bw)。正己烷染毒建立大鼠周围神经损伤模型,使用不同剂量的DAS进行干预,监测大鼠的行为学改变及吡咯加合物变化,并进行血清吡咯加合物的代谢分析,评价干预效果。另选18只大鼠随机分配到正己烷模型组、DAS低剂量干预组、DAS高剂量干预组中,每组各6只,作为卫星组,于第4周进行血清吡咯加合物的代谢动力学研究。结果从第2周开始,与空白对照组比较,正己烷模型组、DAS低剂量干预组、DAS高剂量干预组大鼠体重均降低,差异均有统计学意义(P0.05)。正己烷模型组、DAS低剂量干预组、DAS高剂量干预组大鼠依次在染毒第2、3、5周开始出现步态异常。在实验终点,与空白对照组比较,正己烷模型组、DAS低剂量干预组、DAS高剂量干预组大鼠步态评分均增高(P0.05)。与正己烷模型组比较,DAS低剂量和DAS高剂量组大鼠转棒潜伏期均增加,差异均有统计学意义(P0.05)。与正己烷模型组比较,DAS低剂量和高剂量干预组大鼠神经传导速度均提高,差异均有统计学意义(P0.05)。在第7周实验终点,与DAS低剂量干预组比较,DAS高剂量干预组大鼠血清、尿、毛发吡咯加合物浓度均降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。大鼠血清吡咯加合物在9~12 h达到峰值,之后开始下降。与正己烷模型组比较,DAS低剂量和高剂量干预组大鼠血清吡咯加合物的半衰期变短、曲线下面积减少,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论DAS可能拮抗正己烷引起的大鼠周围神经病变。

关键词：正己烷中毒大鼠二烯丙基一硫吡咯加合物周围神经神经损伤

二烯丙基一硫拮抗苯诱导白细胞减少的效果及其机制研究

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二烯丙基一硫拮抗苯诱导白细胞减少的效果及其机制研究

作者：于婷山东大学

学位级别：硕士

研究目的苯是一种透明油状液体,是具有芳香气味的无色或浅黄色的液体。苯作为一种重要的生产原料和有机溶剂在多种工艺中被使用,是职业场所中常见的一种毒物和污染物。1982年国际癌症研究机构(IARC)将苯规定为公认的环境致癌物质。在我... 详细信息

研究目的苯是一种透明油状液体,是具有芳香气味的无色或浅黄色的液体。苯作为一种重要的生产原料和有机溶剂在多种工艺中被使用,是职业场所中常见的一种毒物和污染物。1982年国际癌症研究机构(IARC)将苯规定为公认的环境致癌物质。在我国,慢性职业中毒中苯中毒连续多年居于首位。血液系统是慢性苯中毒损害的一个主要靶点。在中毒早期主要引起外周血白细胞减少为,再生障碍性贫血,粒细胞白血病是苯中毒严重时导致的结果。针对慢性苯中毒的治疗目前尚无特定的特效药,主要采用对症、纠正贫血、升高白细胞、支持疗法和抗肿瘤化疗药物进行治疗,但是长期使用可引一系列副作用,如发热、乏力、骨痛、甚至刺激恶性细胞生长等。因此,现在极为重要的是在生活中寻找一种干预药物通过饮食来预防慢性苯中毒。大蒜素在常温下快速的被代谢分解为具有多种生物学功效的有机硫化物(OSCs),如二烯丙基三硫(DATS)、二烯丙基二硫(DADS)、二烯丙基一硫(DAS)等。DAS的拮抗效果在慢性苯中毒诱导的白细胞减少方面是否也发挥作用尚未见报道。因此,在本次实验中我们选择的干预药物是DAS,经过经口染苯建立外周血白细胞减少症模型,分两部分试验来进行,试图证实DAS是否对苯诱导的小鼠外周血白细胞减少症有拮抗作用?拮抗机制是什么?第一部分,选择ICR小鼠90只,随机分成空白对照组、DAS对照组、苯模型组、DAS低、中、高剂量干预组,每组15只。苯模型组和DAS各干预组动物均经口给予苯(1.3g/***),使用玉米油溶解苯,随后以等体积的玉米油给与另外两组实验动物。2 h前,分别给予苯+DAS低、中、高剂量干预组和DAS对照组40、80、160、160mg/kg的DAS,其余两组给以等体积的玉米油,1次/d,持续4周。分别于第14、29天经眼内眦取血于抗凝管中以检测血常规;于第30天,处死动物,迅速取脾脏和胸腺称重并计算脏器系数;取适当部位的脾脏、胸腺经固定后制备石蜡切片做病理学检查,剩余部分于-80℃冷冻保存。结果发现:1.血常规改变与空白对照组比较,苯模型组小鼠染毒第14d外周血白细胞计数下降68.99%,差别有统计学意义(P一步分别下降为83.00%,81.03%,89.37%,差异有统计学意义(P<0.01或0.05);红细胞、血红蛋白分别降低20.84%,19.25%,差异有统计学意义(P<0.01或0.05)。与苯模型组相比较,DAS高剂量干预组干预第14天白细胞计数明显增加270.30%,差异有统计学意义(P<0.01),其中,单核细胞、淋巴细胞分别增加136.36%、260.00%,差异有统计学意义(P<0.01或0.05);与干预第14天比较,第29天干预效果明显。DAS低、中、高剂量各干预组白细胞分别增长95.76%,167.80%,453.39%,差异均有统计学意义(P<0.01);淋巴细胞分别增加114.67%,157.33%,553.33%,差异均有统计学意义(P<0.01);DAS中剂量组单核细胞增加154.55%(P<0.01),中性粒细胞增加281.82%(P<0.01);DAS高剂量组单核细胞增加472.73%(P<0.05),中性粒细胞增加713.64%(P<0.01);经DAS干预后,小鼠红细胞、血小板、血红蛋白均明显增高,具有统计学差异(P<0.01或 0.05)。2.病理改变肉眼观察可见空白对照组脾脏颜色暗红,表面光滑,被膜完整,质脆而软,形状呈长椭圆状。苯模型组脾脏颜色变淡,表面粗糙,形状大小较空白对照组变小。DAS40m/kg、80m/kg、160m/kg各剂量干预组无论脾脏颜色还是大小均有恢复趋势。空白对照组具有被膜完整的胸腺,质软,乳白色,短小肥厚。苯中毒模型组胸腺颜色变浅,小而扁平。与苯模型组比较,DAS 40m/kg、80m/kg、160m/kg剂量干预组胸腺病理组织颜色和大小均有不同程度的改善,趋于空白对照组。肉眼观察脾脏病理在DAS对照组中未见明显可见病变。镜下观察正常脾脏被膜呈粉红色,红髓呈深红色,白髓致密呈紫蓝色,为脾结节。红髓和白髓界限清晰。相较于空白对照组,苯中毒模型组脾脏病理色淡,红髓数目多且呈淡粉色,松散分布的白髓及其白髓间分布数量较少的淋巴细胞,红白髓界限不明显。与苯模型组相比较,DAS40m/kg、80m/kg、160m/kg各剂量干预组白髓、红髓的颜色、界限、数目均有不同程度的好转。与空白组对照比较,DAS对照组脾脏病理接近空白对照组,肉眼观察无明显可见病变。与空白对照组比较,苯模型组脾脏白髓面积比降低明显(P<0.01);与苯模型组比较

关键词：二烯丙基一硫苯白细胞减少症氧化应激 Keap1/Nrf2

二烯丙基一硫化物对小鼠急性酒精性肝损伤的保护作用

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环境与健康杂志 2012年第9期29卷 789-792,F0003页

作者：朱振平曾涛邵晓颖于丽华谢克勤山东大学公共卫生学院环境与健康系毒理室山东济南250012

目的研究二烯丙基一硫化物(DAS)对急性酒精性肝损伤的保护作用。方法将40只健康SPF级雄性昆明小鼠随机分为4组,分别为对照组、模型组、DAS干预组和DAS对照组,每组10只。DAS干预组和DAS对照组小鼠经口灌胃给予50 mg/kg的DAS溶液,每天1次... 详细信息

目的研究二烯丙基一硫化物(DAS)对急性酒精性肝损伤的保护作用。方法将40只健康SPF级雄性昆明小鼠随机分为4组,分别为对照组、模型组、DAS干预组和DAS对照组,每组10只。DAS干预组和DAS对照组小鼠经口灌胃给予50 mg/kg的DAS溶液,每天1次,连续7 d;对照组和模型组小鼠给予等体积的玉米油。末次给药2 h后,模型组和DAS干预组小鼠经口灌胃给予5 g/kg乙醇诱导肝损伤,连续3次,每次间隔12 h;对照组和DAS对照组小鼠给予等体积等热量的麦芽糖糊精。测定血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的活力以及肝组织匀浆中谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽还原酶(GR)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活力。结果与模型组比较,对照组、DAS干预组和DAS对照组小鼠血清ALT、AST活力和肝组织匀浆中MDA含量均较低,肝组织匀浆中GSH含量和SOD、GPx、GR活力均较高,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论 DAS对小鼠急性酒精性肝损伤有保护作用,机制可能与其具有的抗氧化活性有关。

关键词：二烯丙基一硫乙醇肝损伤脂质过氧化谷胱甘肽

大蒜油中主要脂溶性有机硫化物对小鼠酒精性肝损伤拮抗作用的研究

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大蒜油中主要脂溶性有机硫化物对小鼠酒精性肝损伤拮抗作用的研究

作者：管敏杰山东大学

学位级别：硕士

研究目的酒精性肝病(alcoholic liver disease,ALD)是指由于长期大量的酒精摄入导致的一系列肝脏损伤性疾病,按发展进程分为酒精性脂肪肝、酒精性肝炎、酒精性肝纤维化和酒精性肝硬化。在世界各地区范围内ALD发病率和死亡率持续升高,AL... 详细信息

研究目的酒精性肝病(alcoholic liver disease,ALD)是指由于长期大量的酒精摄入导致的一系列肝脏损伤性疾病,按发展进程分为酒精性脂肪肝、酒精性肝炎、酒精性肝纤维化和酒精性肝硬化。在世界各地区范围内ALD发病率和死亡率持续升高,ALD已经成为不容忽视的公共卫生问题。近年来虽然在ALD发病机制的研究上取得了一些突破,但目前仍然缺乏有效的防治方法。已有的研究表明,ALD的发病与酒精摄入后导致的氧化应激密切相关。Nrf-2(NF-E2 related factor 2)是迄今为止发现的最为重要的调控内源性抗氧化系统活性的核转录因子,可调控一系列抗氧化酶及Ⅱ相解毒酶的表达。从调控“氧化应激”入手,研究能够激活“Nrf-2调控的抗氧化信号通路”的天然或化学合成物质对ALD的防治作用,将有助于找到可有效防治ALD的新药物。大蒜作为一种民间用药有非常悠久的历史。最近几十年关于大蒜医学治疗作用的研究表明,大蒜中所含的有机硫化物具有广泛且显著的生物学活性。来自国内外许多实验室的研究结果提示大蒜中的多种有机硫化物具有抑制ALD发生和进展的作用。本研究将比较大蒜油中5种主要的脂溶性有机硫化物对小鼠ALD的拮抗效果,并围绕Nrf-2信号通路探讨其可能的作用机制。研究方法1.动物分组及处理:将SPF级ICR雄性小鼠随机分成10个组,即对照组、模型组、DATS高剂量组(100mg/***)、DATS低剂量组(50mg/***)、DADS高剂量组(lOOmg/***)、DADS低剂量组(50mg/***)、DAS高剂量组(100mg/***)、DAS低剂量组(50mg/***)、AMTS组(100mg/***)、AMDS组(1OOmg/***)。模型组和各干预组小鼠喂饲含有5%(w/v)酒精的液体饲料,对照组小鼠喂饲不含酒精的等体积等热量的液体饲料。用玉米油将各种有机硫化物溶于溶剂中并混匀,采用灌胃的方式给予干预剂。4周末,模型组及各干预组小鼠均给予5g/***的酒精灌胃,对照组小鼠给予等体积等热量的麦芽糖糊精溶液。4h后处死小鼠,取血和肝脏组织备用。2.血清转氨酶:将采集的血液用离心机3000rpm/min离心15min,分离血清,用全自动生化分析仪测定血清谷丙转氨酶(alanine transferase,ALT)和谷草转氨酶(aspartatetransferase,AST)活性。3.肝脏甘油三酯(triglyceride,TG)含量测定:采用北京普利莱公司提供的组织TG测定试剂盒测定肝组织中TG含量,并测定肝组织匀浆中蛋白含量对测定结果进行校正。4.肝脏病理检测:取小块肝脏组织,分别制备石蜡切片和冰冻切片,进行苏木素-伊红(H&E)染色和油红O染色,观察肝脏损伤情况。5.肝组织中Nrf-2、过氧化物酶体增殖物活化受体α(peroxisome proliferator-activated receptor α,PPAR-α)、甾醇调节原件结合蛋白(sterol regulatory element binding protein 1c,SREBP-1c)等相关蛋白表达:称取一定量的肝脏组织,用预冷的RIPA裂解液按照1:5(w/v)的比例制备匀浆12000g/min离心30min,上清液即为总蛋白;用细胞浆和细胞核蛋白抽提试剂盒按照操作指示提取细胞浆和细胞核蛋白。采用western blotting测定蛋白样品中相关蛋白的表达。研究结果1 大蒜的各有机硫化物拮抗酒精性肝病效果的评价1.1各有机硫化物对实验动物体重、肝重和脏器系数的影响实验结束时,与对照组小鼠相比,模型组小鼠体重无显著差异(P>0.05),肝脏重量和肝脏系数均明显增加(P硫化物对小鼠血清转氨酶活性的影响与对照组小鼠相比,模型组小鼠血清中AST和ALT活性均明显升高(P硫化物对小鼠酒精性肝病造成的氧化应激损伤及脂质代谢紊乱的干预效果的评估。2.1各组小鼠肝脏组织中脂肪含量的测定与对照组小鼠相比,模型组小鼠肝脏中TG含量明显升高(P硫化物干预组小鼠

关键词：酒精性脂肪肝二烯丙基三硫二烯丙基二硫二烯丙基一硫烯丙基甲基三硫烯丙基甲基二硫氧化应激 Nrf-2