二烯丙基一硫拮抗苯诱导白细胞减少的效果及其机制研究

作     者：于婷 

作者单位：山东大学 

学位级别：硕士

导师姓名：谢克勤

授予年度：2020年

学科分类：100405[医学-卫生毒理学] 1004[医学-公共卫生与预防医学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

主      题：二烯丙基一硫 苯 白细胞减少症 氧化应激 Keap1/Nrf2 

摘      要：研究目的苯是一种透明油状液体,是具有芳香气味的无色或浅黄色的液体。苯作为一种重要的生产原料和有机溶剂在多种工艺中被使用,是职业场所中常见的一种毒物和污染物。1982年国际癌症研究机构(IARC)将苯规定为公认的环境致癌物质。在我国,慢性职业中毒中苯中毒连续多年居于首位。血液系统是慢性苯中毒损害的一个主要靶点。在中毒早期主要引起外周血白细胞减少为,再生障碍性贫血,粒细胞白血病是苯中毒严重时导致的结果。针对慢性苯中毒的治疗目前尚无特定的特效药,主要采用对症、纠正贫血、升高白细胞、支持疗法和抗肿瘤化疗药物进行治疗,但是长期使用可引一系列副作用,如发热、乏力、骨痛、甚至刺激恶性细胞生长等。因此,现在极为重要的是在生活中寻找一种干预药物通过饮食来预防慢性苯中毒。大蒜素在常温下快速的被代谢分解为具有多种生物学功效的有机硫化物(OSCs),如二烯丙基三硫(DATS)、二烯丙基二硫(DADS)、二烯丙基一硫(DAS)等。DAS的拮抗效果在慢性苯中毒诱导的白细胞减少方面是否也发挥作用尚未见报道。因此,在本次实验中我们选择的干预药物是DAS,经过经口染苯建立外周血白细胞减少症模型,分两部分试验来进行,试图证实DAS是否对苯诱导的小鼠外周血白细胞减少症有拮抗作用?拮抗机制是什么?第一部分,选择ICR小鼠90只,随机分成空白对照组、DAS对照组、苯模型组、DAS低、中、高剂量干预组,每组15只。苯模型组和DAS各干预组动物均经口给予苯(1.3g/***),使用玉米油溶解苯,随后以等体积的玉米油给与另外两组实验动物。2 h前,分别给予苯+DAS低、中、高剂量干预组和DAS对照组40、80、160、160mg/kg的DAS,其余两组给以等体积的玉米油,1次/d,持续4周。分别于第14、29天经眼内眦取血于抗凝管中以检测血常规;于第30天,处死动物,迅速取脾脏和胸腺称重并计算脏器系数;取适当部位的脾脏、胸腺经固定后制备石蜡切片做病理学检查,剩余部分于-80℃冷冻保存。结果发现:1.血常规改变与空白对照组比较,苯模型组小鼠染毒第14d外周血白细胞计数下降68.99%,差别有统计学意义(P0.01),其中淋巴细胞、单核细胞分别降低了 71.72%,53.19%,差异均有统计学意义(P0.01);与染毒第14天比较,苯模型组小鼠染毒第29天淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞进一步分别下降为83.00%,81.03%,89.37%,差异有统计学意义(P0.01或0.05);红细胞、血红蛋白分别降低20.84%,19.25%,差异有统计学意义(P0.01或0.05)。与苯模型组相比较,DAS高剂量干预组干预第14天白细胞计数明显增加270.30%,差异有统计学意义(P0.01),其中,单核细胞、淋巴细胞分别增加136.36%、260.00%,差异有统计学意义(P0.01或0.05);与干预第14天比较,第29天干预效果明显。DAS低、中、高剂量各干预组白细胞分别增长95.76%,167.80%,453.39%,差异均有统计学意义(P0.01);淋巴细胞分别增加114.67%,157.33%,553.33%,差异均有统计学意义(P0.01);DAS中剂量组单核细胞增加154.55%(P0.01),中性粒细胞增加281.82%(P0.01);DAS高剂量组单核细胞增加472.73%(P0.05),中性粒细胞增加713.64%(P0.01);经DAS干预后,小鼠红细胞、血小板、血红蛋白均明显增高,具有统计学差异(P0.01或 0.05)。2.病理改变肉眼观察可见空白对照组脾脏颜色暗红,表面光滑,被膜完整,质脆而软,形状呈长椭圆状。苯模型组脾脏颜色变淡,表面粗糙,形状大小较空白对照组变小。DAS40m/kg、80m/kg、160m/kg各剂量干预组无论脾脏颜色还是大小均有恢复趋势。空白对照组具有被膜完整的胸腺,质软,乳白色,短小肥厚。苯中毒模型组胸腺颜色变浅,小而扁平。与苯模型组比较,DAS 40m/kg、80m/kg、160m/kg剂量干预组胸腺病理组织颜色和大小均有不同程度的改善,趋于空白对照组。肉眼观察脾脏病理在DAS对照组中未见明显可见病变。镜下观察正常脾脏被膜呈粉红色,红髓呈深红色,白髓致密呈紫蓝色,为脾结节。红髓和白髓界限清晰。相较于空白对照组,苯中毒模型组脾脏病理色淡,红髓数目多且呈淡粉色,松散分布的白髓及其白髓间分布数量较少的淋巴细胞,红白髓界限不明显。与苯模型组相比较,DAS40m/kg、80m/kg、160m/kg各剂量干预组白髓、红髓的颜色、界限、数目均有不同程度的好转。与空白组对照比较,DAS对照组脾脏病理接近空白对照组,肉眼观察无明显可见病变。与空白对照组比较,苯模型组脾脏白髓面积比降低明显(P0.01);与苯模型组比较