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基于UFLC-QTrap-MS/MS结合多元统计分析的不同产地、不同部位乌药中核苷和氨基酸类成分分析

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质谱学报 2024年第2期45卷 269-280页

作者：罗益远顾海燕谢叶菲蒋新苗王娟蔡红蝶马舒伟陈宏降浙江药科职业大学中药学院浙江宁波315100 启东市人民医院药剂科江苏南通226299

本研究建立了一种超快速液相色谱-三重四极杆/线性离子阱-串联质谱(UFLC-QTrap-MS/MS)同时测定乌药中11种核苷类和14种氨基酸类成分的分析方法,并结合多元统计分析比较不同产地、不同部位乌药的质量。采用Waters XBridge Amide色谱柱(2.... 详细信息

本研究建立了一种超快速液相色谱-三重四极杆/线性离子阱-串联质谱(UFLC-QTrap-MS/MS)同时测定乌药中11种核苷类和14种氨基酸类成分的分析方法,并结合多元统计分析比较不同产地、不同部位乌药的质量。采用Waters XBridge Amide色谱柱(2.1 mm×100 mm×3.5μm),以0.2%甲酸水溶液(A)-0.2%甲酸乙腈溶液(B)为流动相进行梯度洗脱;在电喷雾正离子模式下,以多反应监测(MRM)进行质谱检测;基于各成分的质量浓度,用方差分析(ANOVA)、主成分分析(PCA)、正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)、层次聚类分析(HCA)、逼近理想解排序法(TOPSIS)以及灰色关联度分析(GRA),对不同产地、不同部位乌药样品进行综合评价。结果表明,所测成分在一定浓度范围内具有良好的线性关系,相关系数均大于0.9924;精密度、重复性、稳定性良好,平均加样回收率为94.86%~106.47%,相对标准偏差(RSD)均小于4.55%。不同产地、不同部位乌药样品间存在一定的差异,HCA和PCA 2种方法均将样品分为3类。OPLS-DA模型分析通过VIP值共筛选得到6个差异性化合物,分别为尿苷、丙氨酸、胞嘧啶、黄嘌呤、腺嘌呤、鸟嘌呤。该方法简便、灵敏度高、重现性好,可用于乌药中核苷和氨基酸类成分的同时测定,为药材质量评价和综合利用提供方法参考。

关键词：超快速液相色谱-三重四极杆/线性离子阱-串联质谱(UFLC-QTrap-MS/MS) 乌药氨基酸核苷不同产地不同部位

乌药对大鼠宫腔粘连纤维化的干预作用及其代谢组学分析

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中国实验方剂学杂志 2023年第15期29卷 142-151页

作者：严婧杨盾郭东卫王雅静刘靓丽贾天阳谢明霞湖南中医药大学长沙410208 岳阳市妇幼保健院湖南岳阳414000 湖南省脑科医院/湖南省第二人民医院长沙410021

目的:探讨乌药对宫腔粘连(IUA)模型大鼠的药效学影响及其代谢机制。方法:建立了一种基于机械损伤+感染的IUA大鼠模型,通过分子生物学及药理学方法和技术评价乌药提取物(LAE)抑制宫腔粘连纤维化的作用;通过基于气相色谱法-质谱法联用(GC-... 详细信息

目的:探讨乌药对宫腔粘连(IUA)模型大鼠的药效学影响及其代谢机制。方法:建立了一种基于机械损伤+感染的IUA大鼠模型,通过分子生物学及药理学方法和技术评价乌药提取物(LAE)抑制宫腔粘连纤维化的作用;通过基于气相色谱法-质谱法联用(GC-MS)的血清代谢组学方法探讨LAE的代谢调节机制。结果:动物实验表明,LAE能显著改善IUA模型大鼠子宫组织细胞的形态和结构损伤,子宫内膜增殖、血管生成和形态学恢复,并抑制血清转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))、Smad2及Smad3 mRNA的表达,而增加Smad7 mRNA表达,以抑制纤维化。此外,LAE可显著抑制雌二醇(E2)、促卵泡生成激素(FSH)和促黄体生成素(LH)等激素水平及肿瘤坏死因子(TNF)-α的表达(P<0.01),改善子宫微环境。代谢组学表明,与正常组相比,IUA大鼠血清代谢发生显著异常,共筛选鉴定得到9个差异标志物。LAE可显著改善这种代谢异常,主要包括6个差异代谢物,其中5个为上述9个标志物中的共有标志物,分别为天门冬氨酸(L-aspartic acid),焦谷氨酸(L-pyroglutamic acid),丝氨酸(L-serine),葡萄糖(Glucose)和正缬氨酸(L-norvaline)。通路富集显示氨酰-tRNA合成通路是其主要的影响机制。结论:结合药理学研究结果可得,LAE可显著改善IUA模型大鼠子宫损伤,抑制纤维化。其机制可能与通过抑制氨酰-tRNA合成通路,改善微环境有关。

关键词：乌药宫腔粘连纤维化代谢组学

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乌药化学成分结构参数与色谱保留时间的关系

浙江大学学报（理学版） 2018年第6期45卷 721-727页

作者：堵锡华王超徐州工程学院化学化工学院江苏徐州221018

乌药含有呋喃倍半萜、黄酮、生物碱、挥发油等多种化学成分,具有抗氧化、抗肿瘤及抑菌等活性.为研究乌药化学成分的性质,计算了乌药化学成分的分子连接性指数和电性拓扑状态指数,并筛选分子连接性指数中的0X,5 X和5 Xc,以及电性拓扑状... 详细信息

乌药含有呋喃倍半萜、黄酮、生物碱、挥发油等多种化学成分,具有抗氧化、抗肿瘤及抑菌等活性.为研究乌药化学成分的性质,计算了乌药化学成分的分子连接性指数和电性拓扑状态指数,并筛选分子连接性指数中的0X,5 X和5 Xc,以及电性拓扑状态指数中的E1,E2和E3,将这6种结构指数作为神经网络的输入层变量,色谱保留时间作为输出层变量,做回归分析,采用6∶5∶1的神经网络结构,构建了预测能力较强的预测模型.该模型总相关系数rt为0.994 0,训练集相关系数为0.992 9,测试集相关系数为0.997 0,验证集相关系数为0.997 9,利用该模型计算得到的保留时间预测值与实验值吻合度较好,相对平均误差为2.66%.结果表明,乌药化学成分的色谱保留时间与6种结构参数之间具有良好的非线性关系.

关键词：乌药化学成分色谱保留时间分子连接性指数电性拓扑状态指数神经网络

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乌药中1个新的倍半萜类化合物

中国中药杂志 2024年第4期49卷 961-967页

作者：杨文翠于金倩王珍强牛彤付瑞明刘伟王晓山东中医药大学药学院山东济南250355 齐鲁工业大学(山东省科学院)山东省分析测试中心山东省大型精密分析仪器应用技术重点实验室山东济南250014 齐鲁工业大学(山东省科学院)药学院山东省高等学校天然药物活性成分研究重点实验室山东济南250014

对乌药醇提液的水部位化学成分进行研究,运用大孔树脂柱色谱、MCI中压柱色谱、半制备型高效液相色谱等方法进行分离纯化,并结合化合物的理化性质和波谱学数据分析鉴定化合物结构,从乌药醇提液的水部位中分离并鉴定了13个化合物,分别为(1... 详细信息

对乌药醇提液的水部位化学成分进行研究,运用大孔树脂柱色谱、MCI中压柱色谱、半制备型高效液相色谱等方法进行分离纯化,并结合化合物的理化性质和波谱学数据分析鉴定化合物结构,从乌药醇提液的水部位中分离并鉴定了13个化合物,分别为(1S,3R,5R,6R,8S,10S)-epi-lindenanolide H(1)、它乔糖苷(2)、lindenanolide H(3)、leonuriside A(4)、3,4-二羟基苯乙醇葡萄糖苷(5)、3,4,5-三甲氧基苯酚-1-O-6-α-L-鼠李糖-(1→6)-O-β-D-葡萄糖苷(6)、5-羟甲基糠醛(7)、(+)-南烛木树脂-4-烯基-β-D-吡喃葡萄糖苷(8)、南烛木糖苷(9)、去甲波尔定碱(10)、去甲异波尔定碱(11)、波尔定碱(12)、瑞枯灵(13)。其中化合物1为新化合物,化合物2、5、6、8、9为首次从乌药中分离得到。利用脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞建立炎症模型,结果表明化合物1、8、10、12具有较好的抗炎活性。

关键词：乌药化学成分抗炎活性

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乌药调节胆固醇逆转运抗高脂血症作用研究

中国中药杂志 2021年第7期46卷 1795-1802页

作者：刘慧芳黄建波黄敏聪姜涛吕圭源李波求鑫瑜程斌楼招欢浙江中医药大学药学院浙江杭州310053 浙江中医药大学基础医学院浙江杭州310053 杭州医学院安全性评价研究中心浙江杭州310053 浙江医药高等专科学校中药学院浙江宁波315000

明确乌药醇提物对高脂饮食诱导的高脂血症模型大鼠血脂水平的改善作用,初步从胆固醇逆转运角度探讨其可能的作用机制。SD大鼠分为正常组、模型组、阿托伐他汀组以及乌药醇提物(LREE)高、中、低剂量组,除正常组外,其余各组采用高脂饮食... 详细信息

明确乌药醇提物对高脂饮食诱导的高脂血症模型大鼠血脂水平的改善作用,初步从胆固醇逆转运角度探讨其可能的作用机制。SD大鼠分为正常组、模型组、阿托伐他汀组以及乌药醇提物(LREE)高、中、低剂量组,除正常组外,其余各组采用高脂饮食喂养建立高脂血症大鼠模型;造模成功后,各给药组分别灌胃给予相应药物,正常组和模型组给予纯水,连续5周。全自动生化仪测定血清总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein-cholesterol,HDL-c)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein-cholesterol,LDL-c)水平及丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)活性;酶比色法测定大鼠肝脏TC,TG,总胆汁酸(total bile acid,TBA)和粪便中TC,TBA含量;HE染色法观察肝组织病变;免疫组化法检测小肠三磷酸结合盒转运体G8(ATP-binding cassette G8,ABCG8)表达;Western blot和免疫组化法检测肝脏组织过氧化物酶体增殖物激活受体γ/α(peroxisome proliferator-activated receptor gamma/aerfa,PPARγ/α)、肝X受体-α(liver X receptor-α,LXRα)、三磷酸结合盒转运体A1(ATP-binding cassette A1,ABCA1)、清道夫受体B类Ⅰ型(scavenger receptor class B typeⅠ,SR-BⅠ)表达。结果显示,LREE能有效降低血清和肝脏TC,TG水平及血清LDL-c水平和AST活性,提高HDL-c水平,但对ALT活性和肝指数未有显著性改善;HE染色结果表明,LREE能够减轻肝脏脂质沉积,减少炎性细胞浸润;此外,LREE能增加粪便TC和TBA含量,上调小肠ABCG8和肝脏PPARγ/α,SR-BⅠ,LXRα,ABCA1蛋白表达。提示,LREE对高脂饮食诱导的高脂血症具有改善作用,该作用可能与调节胆固醇逆转运(RCT),促进胆固醇向肝脏内转运及向胆汁酸的转化,以及胆固醇和胆汁酸的肠道排泄有关,RCT可能是LREE抗高脂血症的潜在机制。

关键词：乌药高脂血症胆固醇逆转运(RCT) 降血脂作用胆固醇

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乌药的化学成分研究

中草药 2016年第6期47卷 872-875页

作者：海萍高原李蓉涛王飞昆明理工大学生命科学与技术学院云南昆明650500 云南西力生物技术股份有限公司云南昆明650201 宜宾学院化学与化工学院四川宜宾644000

目的研究乌药Lindera aggregata根的化学成分。方法应用硅胶、Sephadex LH-20等多种色谱技术进行分离纯化,并利用波谱分析方法(MS,1D、2D-NMR)鉴定化合物结构。结果从乌药根95%乙醇提取物中分离得到14个化合物,其中化合物1为新化合物,... 详细信息

目的研究乌药Lindera aggregata根的化学成分。方法应用硅胶、Sephadex LH-20等多种色谱技术进行分离纯化,并利用波谱分析方法(MS,1D、2D-NMR)鉴定化合物结构。结果从乌药根95%乙醇提取物中分离得到14个化合物,其中化合物1为新化合物,命名为乌药双查耳酮(1),其余已知化合物分别鉴定为乌药环戊烯二酮甲醚(2)、乌药环戊烯二酮(3)、帕夏查耳酮(4)、球松素(5)、甲基赤芝酮(6)、松属素(7)、5,7-二羟基-6,8-二甲氧基黄酮(8)、赤芝酮(9)、乙基赤芝酮(10)、肉桂酸(11)、球松素查耳酮(12)、蓟黄素(13)和β-谷甾醇(14)。结论化合物1为新化合物,化合物13为首次从该属植物中分离得到。

关键词：乌药乌药双查耳酮球松素赤芝酮肉桂酸蓟黄素

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乌药化学成分及生物活性研究进展

中国中药杂志 2023年第21期48卷 5719-5726页

作者：陈芳有刘洋谢丹罗永明江西中医药大学药学院江西南昌330004

乌药为樟科山胡椒属药用植物,药材资源丰富,临床应用广泛。研究发现乌药主要化学成分为倍半萜类、生物碱类、倍半萜二聚体类、黄酮类和酚酸类等,近年来从乌药中首次报道了大量的乌药烷型倍半萜二聚体和三聚体。生物活性研究显示乌药提... 详细信息

乌药为樟科山胡椒属药用植物,药材资源丰富,临床应用广泛。研究发现乌药主要化学成分为倍半萜类、生物碱类、倍半萜二聚体类、黄酮类和酚酸类等,近年来从乌药中首次报道了大量的乌药烷型倍半萜二聚体和三聚体。生物活性研究显示乌药提取物及其活性成分具有抗肿瘤、抗炎、镇痛、保肝、抗氧化、降血脂和降血糖等多种生物活性,并且对其作用机制进行了深入研究。该文综述了近十年乌药化学成分及其生物活性研究进展,以期为该药用植物的进一步研究与开发利用提供参考。

关键词：乌药倍半萜生物碱倍半萜二聚体生物活性

乌药挥发油对寒凝气滞血瘀证大鼠血液流变学及NO-s GC-c GMP信号通路的影响

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中草药 2022年第15期53卷 4730-4737页

作者：欧阳林旗蒋司晨陈镇王胜玫何阳邓桂明湖南中医药大学第一附属医院药学部湖南长沙410007 湖南中医药大学药学院湖南长沙410208

目的探讨乌药挥发油对寒凝气滞血瘀证大鼠中医证候积分、血液流变学及一氧化氮(nitric oxide,NO)-可溶性鸟苷酸环化酶(soluble guanylate cyclase,sGC)-环磷酸鸟苷(cyclic guanosine monophosphate,cGMP)信号通路的影响。方法将48只S... 详细信息

目的探讨乌药挥发油对寒凝气滞血瘀证大鼠中医证候积分、血液流变学及一氧化氮(nitric oxide,NO)-可溶性鸟苷酸环化酶(soluble guanylate cyclase,sGC)-环磷酸鸟苷(cyclic guanosine monophosphate,cGMP)信号通路的影响。方法将48只SD雄性大鼠随机分为对照组、模型组及乌药挥发油高、中、低剂量(3.76、1.88、0.94 g/kg)组和复方丹参片(1.20 g/kg)组,每组8只。除对照组外,其余组大鼠采用sc肾上腺素加冰水浴双因素复合刺激14 d制备寒凝气滞血瘀证模型。从造模第15天开始,各给药组ig相应药物,对照组和模型组ig等体积2%聚山梨酯-80溶液,1次/d,连续7 d;在给药过程中间隔2 d给予1次造模条件,维持大鼠血瘀证表现。末次给药后的第2天对各组大鼠进行中医证候评分,测定各组大鼠血液流变学及血浆NO、内皮素(endothelin,ET)水平;采用苏木素-伊红(HE)染色法观察胸主动脉组织形态;采用ELISA法检测胸主动脉组织中环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,c AMP)和c GMP水平;采用Western blotting法检测胸主动脉组织磷酸二酯酶5A(phosphodiesterase 5A,PDE5A)和sGC蛋白表达情况。结果与对照组比较,模型组大鼠中医证候积分、血液流变学(全血黏度、血浆黏度、红细胞聚集指数、纤维蛋白原)、血浆ET含量、胸主动脉c AMP、c GMP含量、PDE5A蛋白表达水平均显著升高(P乌药挥发油组大鼠血液流变学指标和胸主动脉PDE5A蛋白表达水平显著降低(P乌药挥发油组大鼠血管内膜和血管内皮细胞损伤、血管平滑肌收缩显著改善。结论乌药挥发油能有效改善寒凝气滞血瘀证大鼠中医证候评分、血液流变学,发挥血管内皮细胞保护、改善血液高凝状态的作用,其机制与调控NO-sGC-cGMP信号通路有关。

关键词：乌药挥发油气滞血瘀证血液流变学磷酸二酯酶5A 一氧化氮-可溶性鸟苷酸环化酶-环磷酸鸟苷信号通路

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乌药中异喹啉生物碱去甲异波尔定的含量测定

中国中药杂志 2009年第21期34卷 2774-2776页

作者：陈建忠侴桂新杨莉王长虹王峥涛中国药科大学生药学研究室江苏南京210038 上海中医药大学教育部中药标准化重点实验室上海201210 上海中药标准化研究中心上海201210

目的：建立乌药中去甲异波尔定的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法测定去甲异波尔定（norisoboldine）的含量，以Phenomenex Gemini C18柱为固定相，乙腈-0．5％甲酸（加三乙胺调节pH至2．25）为流动相，梯度洗脱，检测波长为28... 详细信息

目的：建立乌药中去甲异波尔定的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法测定去甲异波尔定（norisoboldine）的含量，以Phenomenex Gemini C18柱为固定相，乙腈-0．5％甲酸（加三乙胺调节pH至2．25）为流动相，梯度洗脱，检测波长为280nm，柱温25℃。结果：去甲异波尔定在0．015—1．509μg峰面积与进样量呈良好的线性，r=0．9999；平均回收率为99．58％，相对标准偏差为1．4％。结论：通过对20批不同来源的乌药样品中去甲异波尔定的测定，结果表明方法简单，准确可靠，重复性好，可为提升乌药的质量标准提供依据。

关键词：乌药去甲异波尔定高效液相色谱法含量测定