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大鼠主动脉内皮细胞的原子力显微镜观察

解剖学杂志 2006年第2期29卷 241-243页

作者：郭国庆陈静沈伟哉钟世镇暨南大学医学院解剖学教研室广州510630 南方医科大学解剖学教研室广州510515

血管内皮细胞具有内分泌、调节血管内外物质交换的作用。20世纪80年代初，扫描隧道显微技术首次获得硅表面的空间形貌，随后扫描探针显微技术的各种衍生技术得到长足的发展，其中包括广泛应用于物理和化学等领域的原子力显微镜（atomic ... 详细信息

血管内皮细胞具有内分泌、调节血管内外物质交换的作用。20世纪80年代初，扫描隧道显微技术首次获得硅表面的空间形貌，随后扫描探针显微技术的各种衍生技术得到长足的发展，其中包括广泛应用于物理和化学等领域的原子力显微镜（atomic force microscope，AFM。AFM是研究生物材料的理想工具。近年来AFM的观察对象已由无机扩展到有机，从无生命到有生命，其在生物医学领域的应用越来越广泛。

关键词：原子力显微镜观察主动脉内皮细胞血管内皮细胞大鼠生物医学领域显微技术 AFM 物质交换 20世纪衍生技术

4-羟基壬烯酸诱导人主动脉内皮细胞和心肌细胞凋亡

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基础医学与临床 2006年第6期26卷 647-649页

作者：徐坚王宁夫徐海鹰李佩璋杭州市第一人民医院心内科浙江杭州310006

我们应用4-羟基壬烯酸（HNE）诱导培养的人主动脉内皮细胞和心肌细胞的氧化应激，观察不同浓度的HNE促使培养的主动脉内皮细胞和心肌细胞凋亡的程度。 1 材料与方法 1.1 人主动脉内皮细胞（HAOEC）和心肌细胞的培养：人主动脉内皮细胞... 详细信息

我们应用4-羟基壬烯酸（HNE）诱导培养的人主动脉内皮细胞和心肌细胞的氧化应激，观察不同浓度的HNE促使培养的主动脉内皮细胞和心肌细胞凋亡的程度。 1 材料与方法 1.1 人主动脉内皮细胞（HAOEC）和心肌细胞的培养：人主动脉内皮细胞（购自美国细胞应用公司CA 92121）和人心肌细胞（购自ATCC公司CRL-1446）培养于改良Eagle＇s培养基中（DMEM培养基），37℃条件下进行原代和传代培养。所有的实验在2周内完成。

关键词：主动脉内皮细胞心肌细胞凋亡烯酸羟基 DMEM培养基诱导培养人心肌细胞 37℃条件氧化应激不同浓度

不同强度恒磁场对大鼠主动脉内皮细胞增殖的影响

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中国临床康复 2004年第6期8卷 1048-1049,T001页

作者：马波程何祥周廉贾国良王克光张荣庆李争显牛金龙东北大学材料与冶金学院辽宁省沈阳市110004 西北有色金属研究院生物中心

目的:观察不同强度恒磁场对大鼠主动脉内皮细胞增殖的影响。方法:将体外培养3代的大鼠主动脉内皮细胞分为对照组及不同强度(0.5,1.0,5.0,10.0,100.0,500.0Gs)磁场组。磁场作用时间为48h,用四唑盐比色法测定细胞增殖。结果:与对照组相比,... 详细信息

目的:观察不同强度恒磁场对大鼠主动脉内皮细胞增殖的影响。方法:将体外培养3代的大鼠主动脉内皮细胞分为对照组及不同强度(0.5,1.0,5.0,10.0,100.0,500.0Gs)磁场组。磁场作用时间为48h,用四唑盐比色法测定细胞增殖。结果:与对照组相比,0.5,1.0,5.0Gs磁场组细胞增殖显著高于对照组(分别为0.301±0.023,0.308±0.042,0.294±0.025和0.230±0.026;t=11.20,8.65,7.92;P细胞增殖与对照组相比无明显差异(0.228±0.034和0.230±0.026;t=0.26;P>0.05);100.0Gs和500.0Gs磁场组细胞增殖显著低于对照组(分别为0.173±0.022,0.166±0.015和0.230±0.026;t=9.17,11.68;P主动脉内皮细胞的增殖,而100.0Gs以上恒磁场可抑制内皮细胞增殖。

关键词：恒磁场大鼠主动脉内皮细胞细胞增殖不同强度四唑盐比色法测定经皮冠状动脉介入治疗

树鼩主动脉内皮细胞株的建立及其生物学特性的研究

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中国实验动物学报 1993年第1期1卷 49-55页

作者：张永蓉卢耀增陈中苏树芸佘铭鹏夏人仪中国医学科学院实验动物研究所中国医学科学院基础医学研究所

将树鼩胸主动脉分层剥离,用组织块贴壁法,体外培养出主动脉内皮细胞,历经一年,传至23代,命名为TSaec-8910。倒置显微镜下细胞单层生长,呈铺路石样镶嵌排列,第Ⅷ因子相关抗原阳性,透射电镜观察,细胞质内未找到Weibel-Palade小体。细胞生... 详细信息

将树鼩胸主动脉分层剥离,用组织块贴壁法,体外培养出主动脉内皮细胞,历经一年,传至23代,命名为TSaec-8910。倒置显微镜下细胞单层生长,呈铺路石样镶嵌排列,第Ⅷ因子相关抗原阳性,透射电镜观察,细胞质内未找到Weibel-Palade小体。细胞生长曲线及分裂指数示9～12d汇合成单层,按1:2或1:3传代,传代间隔为lO～14d,细胞冻存复苏后接种存活率为31.5％,细胞染色体检查为二倍体细胞,2n=62,雄性。内皮细胞生长因子、上皮细胞生长因子、条件培养基和附着底物对TSaec-8910细胞有明显影响,细胞在玻璃瓶壁上贴壁时间为24～18h,而在涂有鼠尾胶瓶壁则为4h左右,内皮细胞生长因子、上皮细胞生长因子能促进TSaec-8910细胞贴壁和增殖,20％TSaec-8910细胞条件培养基亦能良好地维持细胞形态。

关键词：主动脉内皮细胞 TS 内皮细胞生长因子上皮细胞树鼩二倍体细胞复苏后条件培养基贴壁法雄性

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长期游泳运动后大鼠主动脉内皮细胞的改变

武汉体育学院学报 1997年第4期31卷 80-81页

作者：梁志强邓道善廖进昌广东西江大学 526061 北京体育大学

对9只大鼠进行了6个月的游泳训练后，结果发现：内皮细胞胞核增大，染色体增多，细胞质中线粒体增加，有大量微饮小泡存在。运动训练可以引起主动脉形态结构的改变。

关键词：游泳运动的大鼠主动脉内皮细胞透射电镜

生半夏及其炮制品对小鼠主动脉内皮细胞炎性因子分泌的影响

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中国实验方剂学杂志 2013年第10期19卷 261-265页

作者：周信张小荣张秋燕崔翰明西南交通大学生命科学与工程学院成都610031 中国中医科学院广安门医院北京100053

目的:研究生半夏及其炮制品清、姜、法半夏对小鼠主动脉内皮细胞(MVecs)炎性因子分泌的影响。方法:分别用石油醚、乙酸乙酯、95%乙醇、纯水提取半夏及其炮制品,将其作用于脂多糖(LPS)刺激诱导的小鼠主动脉内皮细胞,设置正常组(不给药也... 详细信息

目的:研究生半夏及其炮制品清、姜、法半夏对小鼠主动脉内皮细胞(MVecs)炎性因子分泌的影响。方法:分别用石油醚、乙酸乙酯、95%乙醇、纯水提取半夏及其炮制品,将其作用于脂多糖(LPS)刺激诱导的小鼠主动脉内皮细胞,设置正常组(不给药也不加LPS刺激)、对照组(不给药,加入10 mg.L-1LPS)和实验组(均含与对照组相同剂量的LPS,含不同溶剂半夏提取物,剂量分别为0.1,1,10,20 mg.L-1)。24 h后酶联免疫吸附试验法(ELISA)测定培养上清液中白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量。结果:与对照组相比,生半夏各提取物组分均能降低炎性因子的分泌,各剂量均有显著性差异(P细胞分泌TNF-α的抑制作用呈一定量效关系,在20 mg.L-1剂量下IL-6,TNF-α分泌量最低。不同半夏炮制品的各组分(20 mg.L-1剂量组)均能降低TNF-α分泌量;清半夏石油醚组分在20 mg.L-1降低IL-6的作用最强。生、清、姜、法半夏水提液均能降低IL-6,TNF-α的分泌(P主动脉内皮细胞炎性因子的分泌有一定抑制作用,作用强度与半夏的炮制和提取溶剂有关。

关键词：半夏主动脉内皮细胞脂多糖白介素6 肿瘤坏死因子α

黄芪甲苷对肾血管性高血压大鼠主动脉内皮细胞线粒体损伤的保护研究

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黄芪甲苷对肾血管性高血压大鼠主动脉内皮细胞线粒体损伤的保护研...

作者：张少君南京医科大学

学位级别：硕士

背景血管壁是由内层内皮细胞、中层平滑肌细胞、外层结缔组织构成的。血管内皮细胞(EC)是位于血液与血管组织之间的一层扁平细胞,作为血液和组织之间的屏障,不仅来维持血管壁的完整,完成血液和组织液的代谢交换,还可合成和分泌多种生物... 详细信息

背景血管壁是由内层内皮细胞、中层平滑肌细胞、外层结缔组织构成的。血管内皮细胞(EC)是位于血液与血管组织之间的一层扁平细胞,作为血液和组织之间的屏障,不仅来维持血管壁的完整,完成血液和组织液的代谢交换,还可合成和分泌多种生物活性物质,以保证血管正常的收缩和舒张功能,起到调节血管张力、调节血流、血压的作用。除此之外,它还具有调节凝血与抗凝平衡、防止血栓形成、抑制血管壁细胞的游走和增殖等多种重要的生理功能。血管内皮细胞衰老、凋亡与再生的平衡对正常血管的功能维持具有极其重要的作用。线粒体作为细胞内的重要细胞器,除了合成ATP为组织细胞提供能量外,还调控制细胞程序性死亡、以及细胞衰老等多种病理生理的代谢过程。线粒体作为细胞供能的主要细胞器很容易受到机体内部和外界各种不良因素的攻击,血管内皮细胞线粒体的功能障碍或损伤,必然会导致血管内皮正常生理功能的维持。因此,保护血管内皮细胞线粒体的损伤在防治心血管疾病中有重要意义。黄芪甲苷(Astragaloside IV, AS-IV)是从中药黄芪中分离得到的具有多种药理活性的皂苷类化合物,是黄芪主要活性成分之一,具有抗氧化特性,有调节机体免疫力、保护组织器官、降低血糖、抗细胞凋亡和抗炎抗病毒等药理作用。研究表明,AS-IV能够通过提高线粒体膜电位减轻线粒体损伤,保护视网膜神经节细胞,还可通过降低线粒体氧化应激产物来减少心肌细胞的凋亡[1-2]。因此,我们进一步推测AS-IV对主动脉内皮细胞线粒体损伤具有保护功能,但AS-IV对线粒体保护作用的确切机制尚不明确。目的本研究旨在证实AS-IV对肾血管性高血压大鼠主动脉内皮细胞线粒体损伤的保护作用并探索其可能机制,将有益于开发AS-IV药物作用靶点。方法1、肾血管性高血压大鼠模型的建立及血压监测清洁级SD大鼠麻醉固定后暴露左侧肾脏,钝性分离左侧肾动脉,于肾动脉中段放置银夹(内径0.2mmm),缩窄肾动脉。术后分笼,置于室温,苏醒后给予常规饮食。采用大小鼠无创血压仪BP-2000系统,经套尾法分别于术前、术后每周测量各组大鼠血压,每只大鼠血压测量10次,取平均值;术后2周收缩压>140mmHg(1mmHg=0.133kPa)作为高血压模型制作成功标准,用于进一步实验。2、实验分组与治疗实验分为假手术组(SHAM组)、两肾一夹组(2K1C组)、黄芪甲苷低剂量组(AST-L组,1.0mg/(kg-d))、黄芪甲苷高剂量组(AST-H组,5.0mg/(kg-d))、洛沙坦钾组(LOS组,10mg/(kg-d))、黄芪甲苷高剂量+洛沙坦钾组(AST-H+LOS组,5.0mg/(kg-d)+10mg/(kg-d))。AST-L组、AST-H组、LOS组和AST-H+LOS组于术后2周腹腔注射给药,SHAM组和2K1C组给予等体积生理盐水腹腔注射。3、通过电子透射显微镜观察大鼠胸主动脉内皮细胞线粒体通过透射电镜观察大鼠胸主动脉内皮细胞线粒体内外膜的清晰度、线粒体嵴的完整性、线粒体基质电子密度的高低变化及线粒体肿胀情况。4、应用免疫组化染色法观察大鼠主动脉内皮细胞锰-超氧化物歧化酶(SOD2)的表达大鼠主动脉内皮细胞SOD2免疫组化检测,采用形态学图像分析系统Image-ProPlusVersion6.0软件进行主动脉内皮细胞阳性染色面积和总光密度值的测量,计算得出平均光密度值(IOD/area),以平均光密度值代表SOD2的表达水平。结果1、鼠尾法测定大鼠血压显示,手术前各组大鼠基础血压差异无统计学意义(P>0.05)。术后两周末,2K1C组、AS-IV低剂量组、AS-IV高剂量组、LOS组、AS-IV高剂量+LOS组与SHAM组比较收缩压明显升高,差异有统计学意义(P0.05);LOS组、AS-IV高剂量+LOS组与AS-IV高剂量组相比较降压效果差异无统计学意义(P>0.05)。2、电镜下可见,SHAM组主动脉内皮细胞线粒体双层膜清晰完整,线粒体嵴、嵴间隙清楚,基质电子密度正常。2K1C组主动脉内皮细胞线粒体的嵴断裂缺失,仅留部分残端,可见明显肿胀、空泡化。AS-IV低剂量组线粒体的嵴模糊不清,有轻度空泡化。AS-IV高剂量组线粒体嵴清楚,但有残端,空泡化明显减轻。LOS组、AS-IV高剂量+LOS组与SHAM组相比较主动脉内皮细胞线粒体超微结构无明显差别。3、免疫组化结果显示：与SHAM组比较,2K1C组大鼠主动脉内皮细胞

关键词：黄芪甲苷肾血管性高血压大鼠主动脉内皮细胞线粒体锰超氧化物歧化酶

空间环境中丹参酚酸B镁对人主动脉内皮细胞的保护作用

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科技导报 2007年第1期25卷 28-31页

作者：徐梅向青耿传营徐波李红艳李克明房青夏启胜陈志华陈朋民唐劲天中日友好临床医学研究所生物化学-分子生物学研究室北京100029 中日友好临床医学研究所药物药理室北京100029 清华大学工程物理系医学物理与工程研究所北京100084

探讨中药丹参酸B镁在空间环境下对接种低温细胞生存系统中人主动脉内皮细胞的作用,为预防空间环境对宇航员心血管功能的损伤提供依据。将人主动脉内皮细胞加入丹参酚酸B镁接种于低温细胞生存系统中,搭载于第22颗返回式卫星。经过18d空... 详细信息

探讨中药丹参酸B镁在空间环境下对接种低温细胞生存系统中人主动脉内皮细胞的作用,为预防空间环境对宇航员心血管功能的损伤提供依据。将人主动脉内皮细胞加入丹参酚酸B镁接种于低温细胞生存系统中,搭载于第22颗返回式卫星。经过18d空间飞行,将回收卫星返回后的细胞进行第17,24,30d光镜照相,Giemsa染色及细胞计数。结果显示:加药组的细胞在形态上及增殖数目上均优于对照组,表明丹参酚酸B镁能够改善空间环境中人主动脉内皮细胞的生存状况,减轻宇宙射线、微重力、微磁场对细胞的损伤程度。

关键词：丹参酚酸B镁主动脉内皮细胞空间环境

山药提取物对人冠状动脉与主动脉内皮细胞TIPE2与PCNP基因表达的影响

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山药提取物对人冠状动脉与主动脉内皮细胞TIPE2与PCNP基因表达的...

作者：闫成芸河南大学

学位级别：硕士

背景动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是一类主要累及大、中动脉的动脉硬化性疾病,表现为动脉的内膜层的脂质沉积、脂纹形成、粥样斑块、斑块破裂出血、血栓形成等一系列病理变化,最终导致血管管腔慢性狭窄甚至血栓形成发生急性闭塞,... 详细信息

背景动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是一类主要累及大、中动脉的动脉硬化性疾病,表现为动脉的内膜层的脂质沉积、脂纹形成、粥样斑块、斑块破裂出血、血栓形成等一系列病理变化,最终导致血管管腔慢性狭窄甚至血栓形成发生急性闭塞,危及生命。随着其发病率的逐年增加,科学家对AS的研究也越来越深入、越来越广泛,发病机制众说纷纭,但目前得到广泛认同的主要有两种学说:炎症学说和内皮损伤学说,认为炎症因子和免疫反应在AS发病的整个过程中均起到至关重要的作用。山药营养丰富,价格低廉,既能作为食物供人们食用,又能作为药物用于疾病的治疗,自古以来都受到人们的喜爱。以山药提取物(Dioscorease rhizome extract,DRE)为主要成分的药物制品也已在临床应用多年,主要用于高血脂、冠心病等动脉粥样硬化性疾病的预防与治疗。但在临床上缺乏大型的临床试验为其提供循证医学证据,在分子机制方面的研究更是少有,因此山药抗动脉粥样硬化的机制尚不明确。PCNP(PEST-containing nuclear protein)是一类新近发现的核蛋白,也是一种亲水性的蛋白,其结构中富含PEST序列,是NIRF的底物,容易被NIRF介导泛素化,从而被蛋白酶降解,因此其半衰期较短,相对较不稳定。研究发现,PCNP参与细胞周期的调控过程及肿瘤细胞的发生与发展进程,在类风湿性关节炎的发生与发展中可能也起到一定的调节作用。TIPE2(tumor necrosis factor-α-induced protein 8-like 2)是新近发现的对细胞凋亡起调节作用的蛋白,研究发现其对先天性免疫及获得性免疫具有负性调节作用,并参与维持机体的免疫内稳态。由于在抗菌免疫机制中亦产生负性调节作用,过表达可能会促进细菌感染后炎症反应的发生,造成严重的全身炎症反应。同时还发现TIPE2参与多种肿瘤细胞的发生与发展进程。近期的研究发现巨噬细胞中的TIPE2通过对免疫反应起到负性调节作用,从而对动脉粥样硬化进程具有一定的抑制作用。本实验预从DRE入手,探讨在人冠状动脉内皮细胞(human coronary artery endothelial cell,HCAEC)及主动脉内皮细胞(human aortic endothelial cell,HAEC)中PCNP与TIPE2的表达量是否随着DRE浓度的变化而变化,以及两种细胞内的蛋白表达是否有差异,为进一步研究DRE与AS的关系及新药的开发提供理论依据。目的通过检测HCAEC及HAEC内PCNP与TIPE2的表达量随DRE浓度的变化情况,探讨DRE与AS的关系。方法将DRE用DMEM细胞培养液完全溶解制得10mg/ml的DRE原液,再将DRE原液稀释为如下三种浓度:1μg/ml、10μg/ml、100μg/ml,分别培养HCAEC及HAEC 24h、48 h、72 h,并设置对照组(0μg/ml)。通过MTT法绘制细胞生长曲线,检测不同浓度DRE对两种细胞生长的影响;提取细胞内的RNA,反转录为c DNA,通过实时定量PCR(Real time-PCR,RT-PCR)法检测不同浓度DRE培养两种细胞,经过不同时间后细胞内PCNP和TIPE2基因表达的变化;通过免疫印迹法(Western Blotting)检测经过DRE培养后HCAEC和HAEC细胞内PCNP和TIPE2蛋白的表达量的变化。结果MTT结果显示:不同浓度的DRE对HCAEC和HAEC细胞的生长未产生明显影响(P>0.05);RT-PCR结果显示:PCNP的表达量不受药物浓度、细胞种类及培养时间的影响(P>0.05),TIPE2的表达量不受细胞种类及培养时间的影响(P>0.05),与DRE浓度呈正相关,浓度越大TIPE2表达量越多,相反浓度越小TIPE2表达量越少(P细胞种类及培养时间的影响(P>0.05),TIPE2蛋白表达量不受细胞种类及培养时间的影响(P>0.05),与DRE浓度有关,浓度越大TIPE2表达量越多(P细胞的生长;2.PCNP的表达不受DRE浓度及培养时间的影响,且在HCAEC和HAEC内的表达量无显著差异;3.TIPE2的表达与DRE浓度有关,随着DRE浓度的升高而增多,相反浓度降低表达量减少,但同样不受培养时间的影响,在HCAEC和HAEC内的表达量无显著差异。

关键词：山药提取物冠状动脉内皮细胞主动脉内皮细胞 PCNP TIPE2